痹痛膏灸質量標準研究

徐 賽，章 斌，李順源，盧 勇，劉兆明*

(1.雅安職業技術學院，四川 雅安 625000；2.雅安市中醫醫院，四川 雅安 625000)

痹痛膏灸是雅安市中醫醫院根據中醫經典古籍《青囊秘傳》，結合臨床用藥經驗研制出的一種醫院中藥制劑，主要用于治療寒濕痹阻型類風濕膝關節炎，可顯著緩解患者膝關節疼痛，促進膝關節癥水腫消散，改善膝關節功能[1]。其處方主要由川芎、當歸、透骨草、伸筋草等八味藥組成。本研究采用薄層色譜法(TLC)定性鑒別該制劑中的當歸和川芎，采用高效液相色譜法(HPLC)對川芎、當歸中的主要有效成分阿魏酸進行含量測定研究，為建立簡便可行的痹痛膏灸質量標準提供理論依據。

1 儀器與試藥

Waters e2695系列高效液相色譜儀。Waters Symmetry C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，ME204E分析天平(Mettler Toledo)，SB-5200DTN超聲波清洗機(Scientz)，KDC-1044離心機(ZONKIA)。阿魏酸對照品(批號：H27J7L16718；HPLC≥98%，上海源葉生物科技有限公司)，當歸對照藥材、川芎對照藥材均購自中國食品藥品檢定研究院，痹痛膏灸由雅安市中醫醫院提供。甲醇為色譜純，水為純化水，石油醚(60～90 ℃)、環己烷、乙酸乙酯、冰醋酸、乙醇均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

取痹痛膏灸3 g，加石油醚(60～90 ℃)20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮散至約1 mL，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材、川芎對照藥材各1.0 g，同法分別制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(2015年版《中國藥典》四部通則0502)試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的亮藍色熒光斑點，結果見圖1。

2.2 HPLC含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流速：1.0 mL/min；流動相：甲醇-0.5%冰醋酸(22∶78)；柱溫：30 ℃；檢測波長：323 nm；對照品、樣品進樣量均為10 μL。

2.2.2 溶液制備 對照品溶液：取阿魏酸對照品20 mg，置于50 mL棕色容量瓶中，加入45%乙醇∶冰醋酸(20∶1)定容，得到阿魏酸儲備液(0.4 mg/mL)。阿魏酸儲備液按照一定比例進行稀釋，得到阿魏酸對照液(10 μg/mL)。

供試品溶液：取痹痛膏灸1.5 g，精密稱定，置于圓底燒瓶，精密加入45%乙醇-冰醋酸(20∶1)20 mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用5%乙醇-冰醋酸(20∶1)補足減失的質量，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。

2.2.3 系統適用性試驗 分別取“2.2.2”項下的對照品溶液和供試品溶液，按“2.2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜(見圖2、圖3)。在阿魏酸對照品色譜峰相應的位置上，供試品色譜圖中顯示相同保留時間色譜峰，各色譜峰分離度均大于1.5。

注：1.阿魏酸。

注：1.阿魏酸。

2.2.4 線性與范圍 取一定量阿魏酸儲備液(0.4 mg/mL)進行稀釋，得到濃度范圍為2～10 μg/mL的標準曲線溶液。按“2.2.1”項下色譜條件依次進行測定，以阿魏酸色譜峰面積為縱坐標(y)，對照溶液濃度為橫坐標(x)，計算線性方程。得到回歸方程：y=50 221x-4 330.2，r=0.999 2(n=5)。結果表明，在2～10 μg/mL范圍內，阿魏酸的進樣量與峰面積線性關系良好。

2.2.5 精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件，重復進樣6次，記錄峰面積。結果顯示阿魏酸峰面積的RSD值為1.21%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，室溫下避光放置，置，分別在0 h，1 h，2 h，4 h，8 h，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，得到阿魏酸峰面積RSD為1.34%，表明痹痛膏灸供試品溶液在8 h內穩定。

2.2.7 加樣回收率試驗 取已知含量的同一批供試品溶液6份，置于棕色容量瓶中，分別加入阿魏酸對照液適量。按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，結果見表1。

2.2.8 樣品含量測定 分別取3批次痹痛膏灸樣品，批號分別為20190712，20190714，20190915按照“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，用外標法計算阿魏酸的含量，結果見表2。

表2 樣品中阿魏酸的含量測定結果 (μg/g)

3 結論與討論

痹痛膏灸主要由川芎、當歸、透骨草、伸筋草等八味藥組成，其中川芎、當歸為方中主藥，辛散溫通，具有活血行氣養血之功效，現代藥理學研究顯示，川芎可抑制血小板聚集，降低血液黏稠度，擴張血管，增加局部血流量，促進炎癥水腫和致痛炎癥介質吸收[2]，當歸具有擴張血管、緩解血管痙攣、保護血管內膜等作用[3]。川芎和當歸中均含有阿魏酸，對其有效成分阿魏酸的含量測定主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、氣-質聯用(GC-MS)[4-7]等方法。參照《中國藥典》2015年版一部川芎茶調散的測定方法，采用高效液相色譜法對阿魏酸成分進行含量測定，方法可行，重現性好，可以作為復方制劑中阿魏酸的含量測定方法。

綜上所述，本研究中建立的方法操作便捷，準確度高，重復性好，可用于痹痛膏灸的質量控制。