邁瑞全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)梅毒螺旋體抗體結(jié)果分析

宋 燕 劉金玲 王 兵

根據(jù)全國(guó)法定傳染病疫情概況顯示，2018年梅毒發(fā)病人數(shù)在甲、乙類傳染病中排名位居第3位，是發(fā)病人數(shù)最高的性傳播疾病[1]。鑒于梅毒可通過(guò)血液傳播，因此有創(chuàng)檢查及手術(shù)等操作前，有必要進(jìn)行梅毒感染情況篩查[2]。

實(shí)驗(yàn)室常用的梅毒篩查手段主要針對(duì)梅毒螺旋體(treponema pallidum，TP)感染機(jī)體后產(chǎn)生的兩種抗體進(jìn)行檢測(cè)，即梅毒特異性抗體和梅毒非特異性抗體。其中梅毒特異性抗體一旦產(chǎn)生，可持續(xù)甚至終身陽(yáng)性，常用于梅毒感染狀態(tài)的篩查。針對(duì)特異性抗體常用的檢查方法包括化學(xué)發(fā)光法(CMIA)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)等，其中化學(xué)發(fā)光法因敏感度高、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)使得其更易在臨床實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用[3～6]。

目前各醫(yī)院檢驗(yàn)科CMIA法檢測(cè)TP抗體多使用進(jìn)口儀器，國(guó)產(chǎn)儀器檢測(cè)TP抗體的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少。航天中心醫(yī)院檢驗(yàn)科2019年6月份開始使用邁瑞全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀CL6000-i檢測(cè)TP，現(xiàn)將2019年6月～2020年1月份的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。

對(duì)象和方法

1.研究對(duì)象：選取2019年6月～2020年1月在航天中心醫(yī)院進(jìn)行TP抗體檢測(cè)的樣本23298例，其中男性10305例，女性12993例。23298例研究對(duì)象包括體檢人群2201例，皮膚性病患者145例，門診患者9880例，內(nèi)科住院患者7983例，外科住院患者2856例，圍產(chǎn)孕婦233例。

2.試劑和儀器：采用邁瑞全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀CL6000-i及相配套TP抗體檢測(cè)試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為抗TP抗體的S/CO(吸光度值/臨界值)≥1。梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗(yàn)法(TPPA)試劑盒賽樂(lè)迪亞，由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供。血清盤采用梅毒螺旋體抗體化學(xué)發(fā)光試劑國(guó)家參考品(批號(hào)370036-201801)。所有操作均參照試劑盒和儀器說(shuō)明書進(jìn)行。

3.檢測(cè)方法和流程：選取邁瑞CL6000-i TP抗體相應(yīng)兩個(gè)水平質(zhì)控品，其中低值為陰性質(zhì)控品，高值為弱陽(yáng)性質(zhì)控品。低值質(zhì)控品和弱陽(yáng)性質(zhì)控品各連續(xù)測(cè)定20遍，計(jì)算批內(nèi)CV。兩個(gè)質(zhì)控品每日上、下午各1次，每次重復(fù)2遍，共4次，連續(xù)檢測(cè)5天，計(jì)算批間CV。質(zhì)控品和血清盤標(biāo)本按照血清樣本同樣測(cè)定。23298例樣本首先在邁瑞CL6000-i平臺(tái)檢測(cè)，篩查陽(yáng)性樣本會(huì)進(jìn)一步做TPPA確證。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，不同組之間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

低值質(zhì)控品和弱陽(yáng)性質(zhì)控品各連續(xù)測(cè)定20遍，計(jì)算得批內(nèi)CV。兩個(gè)質(zhì)控品每日上、下午各1次，每次重復(fù)2遍，共檢測(cè)4次，連續(xù)檢測(cè)5天，計(jì)算批間CV。經(jīng)計(jì)算得出低值質(zhì)控品總均值0.21，批內(nèi)CV 1.31%，批間CV 1.47%，弱陽(yáng)性質(zhì)控品總均值2.47，批內(nèi)CV 0.61%，批間CV 1.28%。血清盤中陰性企業(yè)參考品檢出率19/20，陽(yáng)性企業(yè)參考品檢出率9/10，最低檢出限的4個(gè)參考品L1和L2均檢出陽(yáng)性(要求L1和L2檢出陽(yáng)性)，L3和L4均檢出陰性(L3要求檢出陰性或陽(yáng)性，L4要求檢出陰性)，試劑性能均滿足國(guó)家血清盤要求。

23298例樣本在邁瑞CL6000-i進(jìn)行TP抗體篩查，篩查陽(yáng)性286例，陽(yáng)性率1.22%(286/23298)。初篩陽(yáng)性的286例樣本進(jìn)行TPPA確證，結(jié)果顯示TPPA陽(yáng)性176例，TPPA陰性110例，真陽(yáng)性率61.53%(176/286)，邁瑞CL6000-i篩查TP抗體假陽(yáng)性率0.47%(110/23298)。χ2檢驗(yàn)結(jié)果顯示，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00,表1)。

表1 邁瑞CL6000-i CMIA法和TPPA確證法的結(jié)果比較

初篩陽(yáng)性的286例樣本根據(jù)S/CO值劃分為1～3、3～5、5～7、7～10及>10 共5段，梅毒特異性抗體的真陽(yáng)性率隨著S/CO值的增加而逐漸增高，當(dāng)S/CO>10時(shí)，真陽(yáng)性率可達(dá)100%，不同值段的真陽(yáng)性率詳見表2。

表2 286例陽(yáng)性樣本在不同S/CO值段的TPPA結(jié)果分布

286例初篩陽(yáng)性患者根據(jù)科室分為6組，即體檢人群、門診患者、內(nèi)科住院患者、外科住院患者、圍產(chǎn)患者和皮膚性病科患者。不同科室患者的初篩陽(yáng)性數(shù)及TPPA確證情況詳見表3，不同科室之間梅毒篩查的真陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。

表3 286例初篩陽(yáng)性樣本在不同科室的真陽(yáng)性率

286例初篩陽(yáng)性患者根據(jù)年齡分為3組，即<30歲，30～60歲和>60歲。不同年齡組之間患者的初篩陽(yáng)性數(shù)及TPPA確證情況詳見表4，不同年齡段患者之間梅毒篩查的真陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。

表4 286例初篩陽(yáng)性樣本在不同年齡組的真陽(yáng)性率

討 論

2018年中國(guó)梅毒發(fā)病人數(shù)達(dá)到494867例，在甲、乙類傳染病排名中位居第3位，其中排名首位的是病毒性肝炎，第2位是肺結(jié)核，在世界范圍內(nèi)每年梅毒的發(fā)病人數(shù)約為1200萬(wàn)人[1，7]。梅毒感染機(jī)體后可產(chǎn)生兩種抗體，一種是梅毒特異性抗體，另一種為梅毒非特異性抗體，綜合兩種抗體檢查結(jié)果可判斷患者是否是現(xiàn)癥感染。

梅毒螺旋體感染機(jī)體后，螺旋體本身會(huì)產(chǎn)生一些類脂質(zhì)物質(zhì)，另外被感染的機(jī)體組織細(xì)胞也會(huì)釋放類脂質(zhì)物質(zhì)，機(jī)體針對(duì)這些類脂質(zhì)物質(zhì)產(chǎn)生的抗體即梅毒非特異性抗體，機(jī)體處于感染狀態(tài)時(shí)才會(huì)產(chǎn)生非特異性抗體，因此這一指標(biāo)常用于判斷梅毒是否是現(xiàn)癥感染，還可用于治療效果觀察和復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)。目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)非特異性抗體的方法包括RPR、TRUST和VDRL等，但是這類方法是手工操作，肉眼判讀，不適合于大批量人群的篩查。梅毒特異性抗體是機(jī)體針對(duì)TP本身的特異性抗原所產(chǎn)生的，可持續(xù)甚至終生存在，常用于患者感染狀態(tài)篩查。針對(duì)特異性抗體的檢查方法包括CMIA、ELISA、TPPA、TPHA和膠體金等，其中CMIA檢測(cè)敏感度高，速度快，更適合于大批量人群的篩查，但該方法存在一定的假陽(yáng)性率，假陽(yáng)性結(jié)果可能引起潛在的醫(yī)療糾紛[8～11]。TPPA操作繁瑣，但因特異性相對(duì)較好，甚至可達(dá)99.9%，常用做梅毒螺旋體抗體的確證實(shí)驗(yàn)[12～14]。CMIA和TPPA兩種方法結(jié)合，可在一定程度上保證梅毒螺旋體抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，這也是很多文獻(xiàn)推薦的檢測(cè)方法[15～17]。

目前實(shí)驗(yàn)室CMIA法檢測(cè)TP抗體使用較多的是進(jìn)口儀器，關(guān)于國(guó)產(chǎn)儀器檢測(cè)TP抗體的文獻(xiàn)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)室2019年6月開始采用邁瑞全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀CL6000-i檢測(cè)TP抗體，為避免假陽(yáng)性結(jié)果引起潛在的醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)，所有篩查陽(yáng)性樣本會(huì)進(jìn)一步加做TPPA確證。為了初步評(píng)價(jià)該系統(tǒng)檢測(cè)性能，選擇配套低值質(zhì)控品和弱陽(yáng)性質(zhì)控品各連續(xù)測(cè)定20遍，計(jì)算批內(nèi)CV。兩個(gè)質(zhì)控品每日上、下午各1次，每次重復(fù)2遍，共檢測(cè)4次，連續(xù)檢測(cè)5天，計(jì)算批間CV。經(jīng)計(jì)算得出低值質(zhì)控品批內(nèi)CV 1.31%，批間CV 1.47%，弱陽(yáng)性質(zhì)控品批內(nèi)CV 0.61%，批間CV 1.28%。血清盤中陰性企業(yè)參考品檢出率19/20，陽(yáng)性企業(yè)參考品檢出率9/10，最低檢出限的4個(gè)參考品L1和L2均檢出陽(yáng)性(要求L1和L2檢出陽(yáng)性)，L3和L4均檢出陰性(L3要求檢出陰性或陽(yáng)性，L4要求檢出陰性)，試劑性能均滿足國(guó)家血清盤要求。

2019年6月～2020年1月，本實(shí)驗(yàn)室共檢測(cè)TP抗體23298例，初篩陽(yáng)性286例，陰性23012例。286例初篩陽(yáng)性樣本中176例TPPA陽(yáng)性，110例TPPA陰性，邁瑞CL6000-i檢測(cè)TP抗體的真陽(yáng)性率為61.53%，假陽(yáng)性率0.47%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還提示，篩查陽(yáng)性樣本隨著S/CO值增加，真陽(yáng)性率也增高，當(dāng)S/CO>10時(shí)，真陽(yáng)性率達(dá)到100%。筆者將286例初篩陽(yáng)性患者按照科室和年齡進(jìn)行了分組，結(jié)果顯示，與其他科室患者比較，體檢人群和產(chǎn)科患者真陽(yáng)性率較低，與其他年齡段患者比較，>60歲患者組真陽(yáng)性率較低，即體檢人群、產(chǎn)科患者及>60歲患者梅毒篩查假陽(yáng)性較多，這部分患者報(bào)告在審核時(shí)需要格外注意。分析造成這部分人群假陽(yáng)性較多的原因可能如下：不同的生理病理狀態(tài)下如妊娠期、老年期或者疾病時(shí)，體內(nèi)產(chǎn)生某些物質(zhì)，會(huì)和試劑發(fā)生非特異反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；試劑不夠成熟，可以和TP抗體以外的成分發(fā)生反應(yīng)，其特異性有待于進(jìn)一步完善[18～20]。

綜上所述，邁瑞CL6000-i檢測(cè)TP抗體重復(fù)性較好，檢測(cè)結(jié)果中隨著檢測(cè)標(biāo)本的S/CO值增加，檢測(cè)真陽(yáng)性率增加。建議工作中，對(duì)于標(biāo)本檢測(cè)S/CO在1～10的樣本，因?yàn)榇嬖谝欢ǖ募訇?yáng)性情況，為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，此類標(biāo)本報(bào)告前需要加做TPPA，而S/CO>10的樣本不存在假陽(yáng)性情況，這類樣本不需做TPPA，可直接報(bào)告陽(yáng)性。對(duì)于體檢人群、妊娠患者及>60歲患者，因?yàn)槊范韭菪w抗體篩查真陽(yáng)性率較低，這部分患者的報(bào)告在審核時(shí)需要格外注意。