新生兒溶血3項試驗與血型抗體IgG亞型的相關性分析

馬印圖 陳 莉 張 怡 董書文 楊曉亞 王少文 李莉華

母嬰血型不合新生兒溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)是由于胎兒和孕母之間血型不同而引起的新生兒免疫性溶血性疾病，孕期母親體內產生了針對胎兒紅細胞的血型特異性IgG抗體而導致胎兒紅細胞破壞，造成產后新生兒黃疸、貧血，嚴重者出現高膽紅素腦病等后遺癥甚至死亡等不良后果。因此，臨床上針對此類新生兒應盡早診斷，以利于積極治療。相關文獻報道，由于HLA基因多態性和不同的檢測方法之間的差異，母嬰血型不合HDN的發生率為30%～60%[1，2]。此外，產后新生兒高膽紅素血癥的危重程度與孕婦血清中IgG抗體亞型的含量密切相關[3]。目前，臨床上主要采用新生兒溶血3項試驗結合血液生化檢測指標進行HDN診斷，對其危重程度的評估尚缺乏更加有力的試驗數據，筆者采用新生兒溶血3項試驗與微柱凝膠技術檢測血型抗體IgG亞型的試驗結果進行比較，評價兩種方法的相關性以及IgG亞型檢測的臨床應用價值，為早期精確診斷和精準干預治療母嬰血型不合HDN提供理論指導，現將檢測結果報道如下。

資料與方法

1.病例資料：2018年7月～2019年7月在筆者醫院分娩的65例產前血型抗體高效價的孕婦進行產后新生兒血型血清學檢測，其中ABO系統56例，孕婦血清中免疫性抗A(B)效價≥512, Rh陰性孕婦9例，IgG抗D效價≥32，孕婦年齡22～41歲，平均年齡28.5歲，非近親結婚，無輸血史、過敏史和血液系統病史，分娩后的新生兒送病房進行溶血相關檢測和評估、治療。

2.試劑與方法：2-巰基乙醇(2-Me)、血型試劑和標準紅細胞懸液由上海血液生物醫藥公司提供，凝膠血型卡、抗篩卡及亞型抗體檢測卡、專用離心機和孵育器由江蘇力博醫藥生物技術股份有限公司提供。紅細胞血型鑒定、抗體篩選及效價測定、溶血3項試驗(直接抗球蛋白試驗、游離抗體試驗、抗體釋放試驗)均嚴格按照文獻[4]進行，HDN的臨床診斷符合規范標準[5]。如果母子之間ABO或Rh血型不同，需要進一步做抗體篩選和鑒定試驗，排除不規則抗體的存在，溶血3項試驗的結果作為診斷HDN的依據。IgG亞型檢測方法采用文獻報道的微柱凝膠技術(microcolum gel technology assay,MGTA),以出現“2+”凝集的最高稀釋度為IgG抗體亞型含量的結果[6]。

3.統計學方法：采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行統計分析。孕婦血型抗體效價與HDN發生率之間的關系采用χ2檢驗，新生兒血型抗體IgG亞型含量檢測結果以效價的方式表示，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1.孕婦血型抗體IgG效價與HDN的相關性：對65例高效價孕婦產后新生兒進行了血型鑒定，其中母子血型不合的新生兒有60例，5例新生兒ABO血型與母親相同，51例ABO系統不合的新生兒中有31例確診為HDN，發生率為60.78%，Rh系統9例，其中有7例確診，發生率為77.78%，新生兒HDN發生率隨孕母體內IgG抗體效價水平升高而上升，差異有統計學意義(P<0.05), 27例孕婦血型抗體效價同樣升高，但產后新生兒未出現HDN癥狀，作為對照組，結果見表1。

表1 60例母子血型不合孕婦產后HDN的發病情況(發病例數/總例數)

2.新生兒溶血3項試驗與HDN的相關性：新生兒溶血3項試驗對HDN的診斷具有確診作用，本回顧性研究中，60例分娩后母嬰血型不合的新生兒24h內進行了血液生化指標和血常規檢測，在溶血病3項試驗中，凝集反應以陰性(-)和陽性(+)表示，其中抗體釋放試驗最具診斷價值，根據患兒的臨床表現和血生化、溶血3項試驗的檢測結果，共計有38例母子血型不合高效價孕產婦分娩的新生兒確診為HDN，確診率為63.33%。對于溶血3項試驗均表現出強陽性的患兒提示溶血嚴重，高膽紅素血癥臨床病情進展快，必要時需要換血治療，溶血3項試驗結果與臨床HDN發病情況比較詳見表2。

表2 60例新生兒溶血3項試驗結果與HDN發病情況[發病例數/總例數(%)]

3.新生兒IgG亞型含量與HDN的相關性：對60例母嬰血型不合新生兒血清中總IgG和各IgG亞型抗體含量進行檢測，分娩后的新生兒有31例發生了ABO系統HDN,7例Rh系統HDN，血清總IgG含量均值為9.68±0.73g/L，27例未出現HDN癥狀的對照組新生兒血清IgG含量均值為4.97±0.55g/L，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)，新生兒體內IgG抗體亞型高效價組HDN發生率為63.33%(38/60)，與正常新生兒發生率比較，差異有統計學意義(P<0.01)，結果見表3。

表3 新生兒血清總IgG以及各亞型檢測結果比較

4.新生兒溶血3項試驗與血型抗體IgG亞型含量相關性：在38例經溶血3項試驗確診為HDN的患兒中有23例血清中檢出IgG1和IgG2的含量升高, 15例檢出IgG1和IgG3的含量升高,均以IgG1升高為主,患兒及其母親血清中各IgG亞型的含量比較，差異無統計學意義(P>0.05),新生兒紅細胞上結合的IgG亞型抗體越多，高膽紅素血癥的發病越早，其血清中IgG1和IgG3的含量,尤其是IgG1的含量與血型不合引起的HDN存在較大的相關性, 其中換血治療的12例(ABO 7例、Rh 5例)重度高膽紅素血癥新生兒體內IgG3亞型含量明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，結果見表4。

表4 新生兒溶血3項試驗與體內IgG亞型含量的比較

討 論

早期診斷母嬰血型不合HDN對預防和治療高膽紅素腦病的發生具有重要意義，新生兒血清膽紅素水平及溶血3項試驗為臨床診斷HDN提供了有力依據[7，8]。其中直接抗球蛋白試驗(DAT)又稱Coomb′s試驗是臨床診斷自身免疫性溶血性疾病的重要依據，目的是檢測新生兒紅細胞上有無不完全抗體以及結合抗體數量多少的指標，反映孕期胎兒在母體內的致敏情況；游離抗體試驗是檢測游離于新生兒血清中的不規則抗體情況，檢測結果有利于評估溶血的持續性和換血治療效果；抗體釋放試驗是判斷新生兒紅細胞被IgG抗體致敏最敏感和準確的方法，對HDN具有確診價值。在新生兒溶血3項試驗中，單項DAT試驗陽性而發生高膽紅素血癥的概率低于DAT和抗體釋放試驗兩項均陽性的新生兒，而新生兒溶血3項試驗均陽性與高膽紅素血癥的發生具有顯著一致性[9]。然而，筆者在臨床實踐中發現，有些孕產婦產前血型IgG抗體效價很高，產后新生兒溶血3項試驗結果均呈陽性，但臨床溶血癥狀并不嚴重，進一步研究發現與新生兒體內IgG亞型的含量有密切關系。

母嬰血型不合HDN的發病機制主要是胎兒紅細胞表面的血型抗原與母親產生的抗體反應而引起的紅細胞破壞，理論上，胎兒紅細胞上結合的抗體越多，溶血破壞的越多，新生兒出現高膽紅素血癥的病程越短、癥狀越重。實際上，紅細胞溶血的輕重與血型抗體效價、孕母免疫狀態、胎兒營養狀況和血型物質含量等多種因素有關[10,11]。相關研究顯示，HDN的危重程度與IgG亞型關系密切[12，13]。IgG抗體在體內含量最多，也是唯一可以通過胎盤屏障的免疫球蛋白，在血清中的濃度高低依次為IgG1>IgG2>IgG3>IgG4，激活補體的能力IgG1>IgG3>IgG2>IgG4。國內文獻報道母體內IgG1和IgG3的含量,特別是IgG1的含量與ABO系統的HDN密切相關[14，15]。國外研究顯示，IgG1是Rh系統HDN的主要致病抗體,但病情的嚴重程度和進展與IgG3有直接關系，提示在分析新生兒溶血試驗結果的同時，如果檢測到新生兒體內IgG1含量也升高，則新生兒受累的可能性較大，若IgG3同步升高，則提示新生兒病情嚴重、進展快，換血的概率大大提高，如果僅是IgG2和(或)IgG4升高，則新生兒病情輕微，可能不需要過多干預治療[16]。

基于以上回顧性分析，本研究結果證實了新生兒溶血3項試驗與體內血型抗體IgG亞型具有一定的相關性。前者對高膽紅素血癥具有診斷價值，但嚴重程度與體內IgG亞型，特別是IgG1和IgG3亞型關系密切。在臨床實踐中，有必要針對溶血3項試驗陽性的新生兒進一步檢測IgG亞型,有助于對新生兒發生高膽紅素血癥的概率和危重程度進行精確判斷，為臨床提供參考，二者聯合檢測對于早期精準治療母嬰血型不合HDN具有重要意義，值得臨床實驗室推廣應用。