氨基葡萄糖類產品中非法添加物的篩查

（惠州市食品藥品檢驗所，廣東 惠州 516000）

市售氨基葡萄糖類產品包括以氨基葡萄糖為主要成分的保健食品和藥品[1-5]。國內市場上，氨基葡萄糖類保健食品以氨糖軟骨素鈣片居多，主要成分為D-氨基葡萄糖鹽酸鹽（或硫酸鹽）、硫酸軟骨素和碳酸鈣，有增加骨密度、保護關節和預防骨質疏松癥等功能。國外市場上，氨基葡萄糖類保健食品多以D-氨基葡萄糖鹽酸鹽（或硫酸鹽）、硫酸軟骨素為主要成分，作為一種膳食補充劑備受消費者青睞[5]。同時，市場上還有以氨基葡萄糖為主要成分的藥品，用于治療原發性和繼發性骨關節炎等。

有些不法商家為了市場占有率和利潤最大化，有向此類產品中添加消炎鎮痛類藥物的可能性，消費者服用此類產品后[6-12]，雖然疼痛癥狀明顯減輕，但長期服用可能導致身體傷害。用于治療關節炎的消炎鎮痛類藥物有雙氯芬酸、吡羅昔康、布洛芬、對乙酰氨基酚等[7-9]，對于急性炎癥患者還可局部應用糖皮質激素，如地塞米松[12]。

近期我市有消費者在長期服用以氨基葡萄糖為主要成分的藥品后出現了“庫欣”綜合征癥狀，身體肥胖，出現“滿月臉”、“水牛背”等現象。該產品經篩查后發現含有糖皮質激素地塞米松和地塞米松醋酸酯。為此，本研究擬采用快篩試劑盒對市售氨基葡萄糖類產品中是否添加消炎鎮痛類化學藥物進行篩查，若發現可疑陽性樣品則用實驗室方法確證?？焖贉蚀_篩查氨基葡萄糖類產品中非法添加物，對于提高主管部門監督效率，保證食品藥品的安全性，進而保障人民群眾飲食用藥安全具有重要意義。

1 儀器與材料

1.1 儀器

色譜柱： Waters UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；GT-2227QTS智能超聲波清洗儀（廣東固特超聲股份有限公司）；LCMS8040液相色譜質譜聯用儀（日本島津）。

1.2 材料

氨基葡萄糖類保健食品購于當地藥店及網絡銷售平臺（京東、唯品會、天貓、淘寶），包括國內30個品牌（19個廠家）、國外20個品牌（產地含美國、澳大利亞、德國、日本、加拿大、英國）共計50個樣品。以氨基葡萄糖為主要成分的藥品購于當地藥店、網絡銷售平臺及市民送檢共計6個樣品。

雙氯芬酸（鈉）快速檢測試紙條（適用于抗風濕類中成藥和保健食品，批號19BHB121500002，樣品檢出限為100 μg/g），吡羅昔康快速檢測試紙條（適用于抗風濕類中成藥和保健食品，批號19BHB101100003，樣品檢出限為 6 μg/ml）購于深圳市易瑞生物科技有限公司；布洛芬快篩試劑盒（批號20190807），對乙酰氨基酚快篩試劑盒（批號20190807），吲哚美辛快篩試劑盒（批號20190805）和糖皮質激素類快篩試劑盒（批號20190815，地塞米松檢出限為1 ppm，潑尼松和丙酸倍氯米松檢出限為2 ppm）購于廣州安諾食品科學技術有限公司。

糖皮質激素類快篩試劑盒篩查成分包括地塞米松、氟米松、曲安奈德、潑尼松、潑尼松醋酸酯、氟米松醋酸酯、曲安奈德醋酸酯、地塞米松醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍氯米松、倍氯米松雙丙酸酯、倍他米松、倍他米松醋酸酯、倍他米松戊酸酯、倍他米松雙丙酸酯、氫化可的松、氫化可的松醋酸酯、氫化可的松丁酸酯、氫化可的松戊酸酯、曲安西龍、曲安西龍雙醋酸酯共計21種成分。

雙氯芬酸鈉（100.0 %），吡羅昔康（100.0 %），布洛芬（99.9 %），對乙酰氨基酚（100.0 %），吲哚美辛（100.0 %），地塞米松（99.8 %）對照品，均來源于中國食品藥品檢定研究院。甲醇（Dikma，色譜純 ）；乙腈（Merk，色譜純）。

2 方法

2.1 初步篩查

雙氯芬酸鈉、吡羅昔康、布洛芬、對乙酰氨基酚、吲哚美辛、糖皮質激素類型（21種成分）的初步篩查按快篩試劑盒的使用說明書操作。

2.2 初步篩查結果確證

2.2.1 對乙酰氨基酚、吡羅昔康、地塞米松

對照品溶液制備：分別稱取對乙酰氨基酚、吡羅昔康、地塞米松對照品適量，加甲醇制成1 ml含10 ng的溶液。

供試品溶液制備：取供試品1 g（片劑去除包衣；膠囊劑取內容物），研細，加甲醇50 ml，超聲處理10 min，放置至室溫，過濾作為供試品溶液。

色譜條件與系統適用性試驗（UPLC）：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相A為乙腈，流動相B為0.1 % 甲酸水，按表1程序梯度洗脫；流速0.3 ml/min，柱溫40 ℃，樣品室溫度15 ℃，進樣量1 μl。

表 1 液相色譜質譜梯度洗脫程序

質譜條件：電噴霧電離源為ESI+；毛細管電壓為3.5 kV；離子源溫度為250 ℃；脫溶劑溫度為400 ℃；脫溶劑氣體流速為900 L/h；孔氣體流速180 L/h；碰撞氣體為高純氬氣；數據采集模式為多反應監測（multiple reaction monitoring，MRM）。質譜參數見表2。

結果判定：供試品色譜中，應不得檢出與對照品保留時間相同的色譜峰。若出現保留時間相同的色譜峰，且選擇的離子對質荷比一致，供試品定性離子相對豐度與對照品相比較，相對偏差不得超過表3規定的范圍，否則供試品中存在該組分。

表2 對乙酰氨基酚、吡羅昔康、地塞米松的質譜參數

表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

2.2.2 雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛

對照品制備：分別稱取雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛對照品適量，加甲醇制成1 ml含10 ng的溶液。

供試品制備：同2.2.1項供試品制備。

色譜條件與系統適用性試驗（UPLC）：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相A為乙腈，流動相B為水，梯度洗脫流程同表1；流速0.3 ml/min，柱溫40 ℃，樣品室溫度為15 ℃，進樣量為1 μl。

質譜條件：電噴霧電離源為ESI-；毛細管電壓為3.5 kV；離子源溫度為250 ℃；脫溶劑溫度為400 ℃；脫溶劑氣體流速為900 L/h；孔氣體流速為180 L/h；碰撞氣體為高純氬氣；數據采集模式為MRM。質譜參數見表4。

表4 雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛的質譜參數

結果判定：同2.2.1項。

2.3 糖皮質激素類型“疑似陽性”樣品進一步確證

參照《GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質激素的測定 液相色譜、串聯質譜法和薄層層析法》[13]中的液相色譜-串聯質譜法，對“疑似陽性”樣品進一步確認。41種糖皮質激素藥物名稱見標準中表1，對照品的制備參照標準中4.2.11項，標準混合工作液制備參照標準中4.2.12項，供試品的制備參照標準中4.4.1.1項下膏霜類化妝品。液相色譜及質譜條件見該標準4.5部分，41種糖皮質激素藥物的質譜測定參數見標準中表3部分。定性結果判定：在相同實驗條件下測定標準溶液和樣品溶液，如果樣品溶液中檢出色譜峰的保留時間與標準溶液某種組分峰的保留時間一致，并且所選擇的兩對子離子的質荷比一致，樣品定性離子相對豐度與濃度相當標準工作溶液的定性離子的相對豐度進行比較時，相對偏差不超過標準中表 4規定的范圍，則可判定樣品中存在該組分。

3 結果與分析

3.1 快篩結果

結果見表5。

表5 氨基葡萄糖類產品中雙氯芬酸鈉等化學成分的快篩結果

3.2 初步篩查結果的確證

為了驗證快篩結果的準確性，參照原國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件（2009025）[14]中抗風濕類中成藥中非法添加氫化可的松等13種化學藥品的篩查和驗證，建立了氨基葡萄糖類產品中雙氯芬酸鈉、吡羅昔康、布洛芬、對乙酰氨基酚、吲哚美辛、地塞米松共計6種化學藥品的液相色譜質譜定性及定量檢測方法。

50個氨基葡萄糖類保健食品中均未檢出雙氯芬酸鈉、吡羅昔康、布洛芬、對乙酰氨基酚、吲哚美辛和地塞米松，2個布洛芬可疑陽性樣品經液相色譜質譜確證為陰性樣品。6個以氨基葡萄糖為主要成分的藥品，除糖皮質激素可疑陽性樣品檢測出含地塞米松外（見圖1和圖2），其他樣品均未檢出含有上述6種化學成分。

圖 1 標準物質的總離子流圖（TIC）

圖2 疑似陽性樣品的總離子流圖（TIC）

3.3 糖皮質激素類型疑似陽性樣品的進一步確證

為了進一步篩查該樣品中是否添加了地塞米松以外的其他糖皮質激素藥物，參照《GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質激素的測定液相色譜、串聯質譜法和薄層層析法》中的液相色譜-串聯質譜法對疑似陽性樣品進一步分析。結果表明，樣品中檢出色譜峰的保留時間及母離子、子離子等信息與標準物質中的地塞米松和地塞米松醋酸酯相一致。由此可見，糖皮質激素疑似陽性樣品除了含地塞米松外，還含地塞米松醋酸酯，且地塞米松醋酸酯的含量遠高于地塞米松，圖譜見圖3和圖4。

圖3 41種糖皮質激素標準物質（濃度為0.2 μg/ml）的總離子流（TIC）圖

圖4 糖皮質激素疑似陽性樣品提取的總離子流（TIC）圖

4 討論

4.1 雙氯芬酸鈉等化學成分快速篩查結果的準確性

常見的藥品快速篩查方法包括近紅外光譜法、拉曼光譜法、化學快速檢測方法、薄層色譜法等，而快篩試劑盒作為快速檢測方法的一種，因其具有操作簡便、檢測快速、易于攜帶等適于現場篩查的特點，在基層日常監督檢查中被廣泛應用[15-16]?？焖贆z測雖然鑒別結果并非最終確定的檢驗結論，但可起到初步篩查的作用，從而達到“快速篩查、靶向抽樣、目標檢驗”的目的。

本研究采用市售快篩試劑盒（理化和膠體金）對氨基葡萄糖類產品中是否添加了雙氯芬酸鈉等藥物進行篩查，并建立了目標組分定性鑒別的液相色譜質譜法?？旌Y結果中布洛芬可疑陽性樣品為2個，經液相色譜質譜法確證為陰性，而膠體金試劑盒篩查時未發現假陽性的現象。布洛芬快篩試劑盒為理化鑒別，理化鑒別是依據理化反應的特點，成分只要功能團相同，即均有發生正反應的可能性，故專屬性差，這可能是篩查結果出現假陽性的主要原因。與基于理化鑒別的快篩試劑盒相比，膠體金試劑盒操作更為簡便、結果更為直觀，可避免因基質等影響而出現的結果判定困擾。

4.2 現有檢測方法的局限性

目前，氨基葡萄糖類產品中非法添加消炎止痛及激素類藥物篩查和驗證方法，可參照原國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件（編號為2009025），該補充檢驗方法適用于抗風濕類中成藥中非法添加氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、雙氯芬酸鈉等13種化學藥品的篩查和驗證，但該標準也有一定的局限性，如標準僅針對雙氯芬酸鈉、對乙酰氨基酚等非甾體類抗炎藥，對于危害性更大的糖皮質激素類藥物也只能篩查氫化可的松、醋酸潑尼松和地塞米松3種[17-20]。本研究篩查的糖皮質激素陽性樣品經液相色譜質譜確證為地塞米松和地塞米松醋酸酯，進一步表明參照上述方法存在漏篩的可能性[17]。隨著目前添加手段越來越隱蔽，添加成分越來越復雜，檢測方法需不斷更新和完善。政府應加大對此類產品的監管力度，保證人們的飲食用藥安全。