快速篩查膏霜類化妝品中41種非法添加糖皮質激素

（南通市食品藥品監督檢驗中心，江蘇 南通 226006）

糖皮質激素是一類母核為環戊烷駢多氫菲結構的甾體激素，具有抗炎、抗過敏、抗休克和免疫抑制等藥理作用，是臨床皮膚科領域應用最廣泛的外用藥物之一[1]。但長期使用糖皮質激素會產生激素依賴癥及其他副作用，甚至引發癌癥，對人體造成嚴重傷害。我國的《化妝品安全技術規范》（2015版）和歐盟化妝品法規中均明確規定化妝品中不得添加任何激素類藥物[2]。但因糖皮質激素對皮膚具有顯著的消炎祛痘、美白護膚功效，部分商家依然將其非法添加到化妝品中，以謀取不當利益[3]。消費者長期使用這類化妝品，其中激素類藥物會通過皮膚吸收進入人體，對消費者的身體健康造成嚴重影響[3-4]。

近年檢測化妝品中糖皮質激素的方法主要有液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法和液相色譜-高分辨質譜法。質譜法具有選擇性好、靈敏度高、抗干擾能力強等特點，目前已成為最主要的檢測手段[5]。與串聯質譜相比，高分辨質譜具有更強的定性能力和更高的靈敏度，但儀器成本高、普及率低。因此，對于大多數檢測機構而言，液相色譜-串聯質譜法更為適用。此外，已報道的方法大多采用固相萃取凈化樣品，方法耗時，成本高，且難以實現大批量樣品的同時處理[6-8]。本研究通過優化樣品前處理方法和色譜-質譜條件，建立了液相色譜-質譜同時快速測定膏霜類化妝品中41種糖皮質激素的分析方法。該方法可為化妝品中糖皮質激素的高通量分析提供技術支持，能極大地提高化妝品安全風險的監控水平。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Vanquish-F高效液相色譜儀（美國Thermo Scientific公司）；TSQALTIS質譜儀（美國Thermo Scientific公司）；BSA224S電子天平（德國Sartorius公司）；MIKRO 220R離心機（德國Hettich公司）；HN22-500A超聲波提取器（上海汗諾儀器有限公司）；Xcelvap氮吹濃縮儀（美國Horizon公司）。

1.2 試藥

曲安西龍（批號：FS1607684），40種糖皮質激素混標（批號：S018441，美國 A Chemtek Inc公司）；甲醇，乙腈（色譜純，美國Merck公司）；乙酸（色譜純，美國Sigma公司）；其余試劑為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。30批次膏霜類化妝品購自本市各美容院和小商品批發市場。

2 方法

2.1 色譜條件

Thermo Hypersil GOLD 色譜柱（100 mm×2.1mm，1.7 μm），流動相：0.1 %乙酸水溶液（A）-0.1 %乙酸乙腈溶液（B），梯度洗脫（0～6 min，68 %A；6～20 min，68 %A～25% A；20～22 min，25 %A；22～22.1 min，25 %～68 %A；22.1～25 min，68 %A），流速：0.3 ml/min，柱溫25 ℃，進樣量：2 μl。

2.2 質譜條件

電噴霧離子源（ESI），正離子掃描；電壓3500 V；離子源溫度320 ℃；脫溶劑氣溫度400 ℃；鞘氣壓力35 Arb；輔助氣壓力5 Arb；采集方式為多反應監測（MRM），相關質譜參數見表1。

表1 MRM參數

2.3 標準溶液的配制

精密稱取對照品曲安西龍2 mg，置入20 ml棕色量瓶，用甲醇溶解，并定容至刻度，配制成100 μg/ml儲備液。分別移取100 μl曲安西龍儲備液及40種糖皮質混標（100 μg/ml），置入10 ml棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，稀釋成濃度為1 μg/ml的混合對照品溶液。

2.4 樣品前處理

稱取1 g樣品，置入50 ml離心管，分別加入5 ml飽和氯化鈉溶液和5 ml正己烷，于渦旋混合器上混合使樣品分散，準確加入10 ml乙腈，充分渦旋2 min，超聲20 min，4 ℃下以10 000 r/min離心5 min，用針抽取中間層澄清液，轉移至氮吹管中，40 ℃下氮吹至近干，用1 ml乙腈溶解，渦旋1 min，過0.22 μm微孔濾膜，上機測定。

3 結果與討論

3.1 樣品的提取

膏霜類化妝品基質較為復雜，需選擇合適的提取溶劑。本實驗選擇丙酮、甲醇、乙腈、乙酸乙酯作為提取溶劑，系統地比較了這幾種提取溶劑的提取效率。經比較，丙酮對膏霜類化妝品中常用基質如油脂類、蠟類及組成這些成分的高級脂肪酸、高級醇類物質有很強的溶解能力[9]，因此，采用丙酮提取化妝品中糖皮質類激素，將會在提取液中帶入過多的雜質，對色譜柱及儀器造成損害；以甲醇為提取溶劑時，甲醇和水無法分層，溶液較為渾濁，造成過濾困難；以乙腈和乙酸乙酯為提取溶劑時，在加入鹽的情況下，乙腈和乙酸乙酯均能和水分層，但乙酸乙酯和正己烷互溶[10]，因此無法實現加入正己烷以進一步除去雜質的目的。因此，選擇乙腈為提取溶劑。另外，在加入提取劑乙腈之前，加入飽和氯化鈉和正己烷，能去除樣品基質中極性強的雜質（溶于水相）及非極性和部分弱極性的雜質（溶于正己烷相）[11]，達到較好的凈化效果。因此，本實驗選擇乙腈、飽和氯化鈉、正己烷三相溶劑體系，樣品能得到較好的快速提取與凈化。

3.2 流動相的優化

分別考察了水-乙腈，0.1 %乙酸水溶液-乙腈，0.1 %乙酸水溶液-0.1 %乙酸乙腈溶液3種流動相體系梯度洗脫，結果顯示，在流動相中加入少量乙酸，有利于化合物離子化，提高靈敏度，以0.1 %乙酸水溶液-0.1 %乙酸乙腈溶液為流動相質譜響應最好，梯度洗脫可得到良好的分離效果和峰形。

3.3 質譜條件的優化

糖皮質激素是具有甾醇母核的一類化合物，化學結構相似，分離具有一定的難度。由于41種待測化合物均在正離子模式下有較強的質譜響應，因此選擇正離子掃描模式。通過對電壓、碰撞能量、離子源溫度、脫溶劑氣溫度、碰撞氣壓力等一系列質譜參數進行優化，確定最佳的質譜條件。最終在MRM模式下，使結構性質相近的上述各化合物能達到較好地分離，各通道之間無明顯干擾，使從膏霜類化妝品中快速提取檢測41種可能的非法添加化合物的方法成為可能。41種糖皮質激素的提取離子色譜圖見圖1。

圖1 41種糖皮質激素的提取離子色譜圖

3.4 專屬性試驗

分別考察了混合對照品工作液、陰性空白溶液和供試品溶液（氫化可的松、曲安奈德、氟米龍醋酸酯、倍氯米松雙丙酸酯陽性樣品）的色譜圖。結果顯示，陰性空白樣品的主要色譜峰在1 min之前，對41種糖皮質激素的篩查不存在干擾，典型色譜圖見圖2。有部分色譜峰保留時間較為接近，部分重合，尤其在4～5 min和14～15 min 之間，對于這幾種成分的疑似陽性樣品可通過超高效液相色譜-四極桿-串聯質譜進行確認。

3.5 線性關系、檢出限和定量限

圖2 專屬性色譜圖

用空白基質配制6個水平的混合標準工作溶液（1～200 μg/L），在優化的色譜-質譜條件下測定。以各化合物定量監測離子對色譜峰峰面積為縱坐標（Y），質量濃度為橫坐標（X）繪制標準曲線，得線性方程和相關系數（r）。結果表明 41種化合物在各自的質量濃度范圍內與色譜峰峰面積均呈良好的線性關系，r均大于0.99。在空白基質中添加一定濃度的41種糖皮質激素混合標準溶液，以3倍信噪比和10倍信噪比對應的質量濃度分別作為方法的檢出限（LOD）和定量限（LOQ），結果見表2。結果顯示，這41種待測物的LOD和LOQ分別為1～2 μg/kg和3～7 μg/kg。

3.6 回收率和精密度

在空白基質中添加41種糖皮質激素混合標準溶液，添加水平分別為10，20，100 μg/kg，每個添加水平平行測定6次，計算每個待測物的平均回收率和RSD，見表2。結果顯示，方法的平均回收率為73.8 %～104.6 %（n=6），RSD為3.6 %～9.7 %（n=6）。

表2 41種糖皮質激素線性方程、相關系數、LOD、LOQ、精密度及回收率

33 哈西奈德 y=2.963×105x+6.627×104 0.9993 1 3 8.4，7.9，5.7 89.7，92.8，94.4 34 阿氯米松雙丙酸酯 y=5×104x+3.174×104 0.9980 2 7 4.9，5.4，4.3 86.9，92.5，94.6 35 安西奈德 y=5.509×104x-2.054×104 0.9953 2 7 4.6，3.2，3.9 75.8，87.4，93.8 36 氯倍他索丙酸酯 y=7.273×105x+8.492×104 0.9981 1 3 8.8，7.1，5.3 83.7，92.7，97.9 37 氟替卡松丙酸酯 y=3.058×104x+1.019×104 0.9964 2 7 9.2，6.9，5.3 84.7，92.6，101.8 38 莫米他松糠酸酯 y=6.321×104x-2.319×104 0.9986 2 7 6.2，5.4，4.7 80.3，89.7，97.5 39 倍他米松雙丙酸酯 y=1.125×105x-2.259×104 0.9983 1 3 9.7，6.8，5.2 81.5，89.4，92.6 40 倍氯米松雙丙酸酯 y=1.912×105x+1.742×105 0.9994 1 3 6.7，7.2，5.7 76.2，86.9，94.3 41 倍氯他松丁酸酯 y=4.432×104x+2.999×104 0.9975 2 7 5.4，4.6，3.6 83.4，90.5，97.5

3.7 方法應用

利用本方法對購買的30批次的膏霜類化妝品進行篩查分析，在兩個批次樣品中檢出違禁添加的糖皮質激素，分別為倍他米松247 μg/kg，曲安奈德醋酸酯428 μg/kg。利用國標GB/T24800.2-2009 方法[12]同時對這30批次樣品進行測定，檢出結果與本方法一致，檢出的含量為倍他米松269 μg/kg，曲安奈德醋酸酯403 μg/kg，與本方法測定的含量差異較小。由此可見，利用本方法對膏霜類化妝品中糖皮質激素進行篩查和定量是可行的。

4 討論

本實驗利用超高效液相色譜-四極桿-串聯質譜對膏霜類化妝品中的41種糖皮質激素物質進行篩查，在25 min內完成了對41種糖皮質激素較好的分離，該方法前處理簡便、抗干擾性強，靈敏度高，可為批量快速檢測膏霜類化妝品中糖皮質激素提供方法參考和數據支持。