秦州大櫻桃副產物—葉中黃酮提取的研究

楊勸生 張軍蘭 趙金鳳 趙強

【摘要】以黃酮的含量為評價指標，采用正交設計建立秦州大櫻桃葉的提取工藝。

【關鍵詞】秦州大櫻桃葉? 黃酮? 提取? 研究

櫻桃葉是櫻桃的主要副產物，富含多種人體有益成分，尤以黃酮類化合物蘆丁（Rutin）含量較高，黃酮類化合物具有抗氧化、保護心腦血管系統、抗癌、止血等生理活性，且低毒。在食品工業中可用作抗氧化劑、色素等。在醫學上可以用于清除自由基、治療冠心病和腦血栓等一系列疾病。

本研究以秦州大櫻桃葉為原料，通過正交實驗設計，以乙醇回流提取大櫻桃葉黃酮類化合物，建立并優化了秦州大櫻桃葉中蘆丁提取工藝，HPLC法測定秦州大櫻桃葉中黃酮類化合物的含量，以確定最佳提取工藝參數，為大櫻桃副產物中有效成分的提取分離提供了一定的參考。

一、材料與儀器

（一）藥材

“紅燈”大櫻桃葉（經天水師范學院趙強教授鑒定），2018年6月采集于天水市秦州區煙鋪村，經自然風干，粉碎，過篩。

（二）儀器

Agilent 1100 Series型高效液相色譜儀、KQ-500D型數控超聲波清洗器、RE52-99型旋轉蒸發儀、UV751GD型紫外-可見分光光度計、JY系列電子天平、色譜工作站為CAG Bootp Serier、色譜柱為Eclipse×DB–C18柱等。

（三）試藥

蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：11844-200505

），95%乙醇、NaOH，以及其它分析純試劑。

二、方法與結果

（一）對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品0.0251 g，用25 mL 80%乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，搖勻，得質量濃度為25.1 mg/mL的蘆丁對照品溶液。

（二）供試品溶液的制備

稱取上述櫻桃葉粉末10.0 g，加入不同體積分數的乙醇，在室溫下浸泡5-7 h后，經300W超聲波50℃處理80min。將超聲處理過的物質全部轉移索氏提取器中加熱回流提取，得到回流液。用旋轉蒸發儀將回流液減壓濃縮至無醇味之后立即將濃縮液轉入100mL錐形瓶中，得抽濾樣品液。重復此操作三次，將三次實驗的抽濾樣品液合并，減壓濃縮至粘稠狀，趁熱移入150mL錐形中，加入質量分數為10%NaOH調pH至8-10，密封靜置24h。經減壓抽濾，將濾液移入100mL容量瓶中，加入95%乙醇定容至刻度，封口4℃保存備用。

（三）黃酮含量測定色譜條件

檢測器：Eclipse×DB–C18柱（4.6 mm×250mm），波長：254 nm，流動相：甲醇∶1%冰醋酸=60∶40（v/v），柱溫：30℃，進樣量：20μL，流速1.0mL/min。

（四）正交提取結果與分析

取45%、60%、75%不同體積的乙醇，液料比7.51、12.51、17.51 mL/g，提取溫度40℃、60℃、80℃，設定正交試驗表，考察黃酮含量的提取率，結果取3次試驗結果的平均值。結果顯示提取率在1.08%～1.32%之間，方法可行，工藝可靠。

（五）驗證試驗

再按選出的工藝進一步驗證試驗，分別稱取櫻桃葉5份，各30g，以櫻桃葉黃酮含量為驗證指標進行試驗，黃酮含量平達1.250mg/g，穩定性和重現性好，可建立櫻桃葉中黃酮的提取工藝。

三、結論

本實驗以秦州大櫻桃“紅燈”的葉子為實驗材料，在單因素實驗的基礎上進行L9（33）正交實驗，優選乙醇體積分數、料液比、提取溫度等主要影響因素，確定了最佳提取工藝（乙醇體積分數60%、料液比12.51、提取溫度70℃），黃酮類化合物含量可達1.250mg/g，并發現三種影響因素之間存在一定的交互作用。由于大櫻桃葉來源廣泛、綠色天然無污染，廉價易得，葉中所含黃酮類化合物有較強的抗氧化能力，且在機體內低殘留，可作為較理想的自由基清除劑，用于保護機體健康和食品安全領域，并有望開發成為一種新型的食品添加劑。通過一系列研究，為當地大櫻桃產業深入開發和研究提供理論依據。

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基金項目：2019年天水市科技計劃項目（18JR3RE244）。

作者簡介：楊勸生（1974-），男，主任中藥師（教授），研究方向：中草藥化學分析以及食品、保健品、新藥研發等。