豫南地區布魯氏桿菌的流行病學調查

陶長城

河南省信陽市動物衛生監督所，河南信陽464000

近年來，河南省很多地區布魯氏桿菌病感染率呈現逐年增加的趨勢，2016年達4 000 多例。為了防控布魯氏桿菌病傳播，2017年河南省動物強制免疫實施“兩進兩退”，把布魯氏桿菌作為牛、羊必免的疫病之一開始免疫接種。為了摸清布魯氏桿菌病在信陽地區的感染情況和危害程度，制定科學的防控措施提供技術支持，2016-2017年間，筆者在信陽七縣三區范圍內對牛、羊和豬開展布魯氏桿菌病的流行病學調查和采樣后進行實驗室檢測。

1 材料與方法

1.1 流行病學調查

2016-2017年，對信陽市七縣三區的年存欄50頭以上的養牛場94 個、年存欄100 頭以上的羊場63 個、5 個規模養豬場進行布魯氏桿菌病的流行病學調查，20 個牛場采集血樣，每個牛場隨機抽取5份血樣，還抽取3 個牛組織樣（來自有流產發生的2個牛場）；30 個羊場采集血樣，每個羊場隨機抽取10 份血樣，在有流產發生的羊場采集18 例組織樣；豬場采樣5 個場，每個場隨機抽取血樣20 份。

1.2 實驗室檢測

1）病原學檢測：采集流產胎兒或胎盤21 例，直接涂片鏡檢。其中牛3 例，羊18 例，牛的其中1 例采集地是浉河區，另2 例來自息縣，羊的18 例分布在各個縣區。

2）血清學檢測：初檢使用國標（GB/T18646-2002）虎紅平板凝集試驗，復檢使用國標（GB/T18646-2002）試管凝集試驗。

①材料與準備：抗原、標準陰性血清、標準陽性血清都是購自青島動物流調所，60 cm×60 cm 的干凈玻板3 塊（玻板上劃成4 cm×4 cm 的方格），吸管（1 滴0.03 mL），牙簽，一次性手套、口罩等防護用具。

②操作方法：在干凈的玻板方格中加注陰性血清、陽性血清、受檢血清，再在血清旁加1 滴抗原，用牙簽混勻。

③判斷：在陰性對照、陽性對照成立的情況下，對被檢血清進行判定，受檢血清4 min 內出現肉眼可見凝集現象判為陽性，無凝集現象成均勻粉紅色者判為陰性。

3）虎紅平板凝集試驗。虎紅平板凝集試驗陽性的受檢血清樣品帶回實驗室進一步做布病的試管凝集試驗。

①材料與準備：0.5%石碳酸、10%鹽溶液稀釋液，抗原、標準陰性血清、標準陽性血清都是購自青島動物流調所，凝集試管、試管架，吸管，恒溫培養箱，一次性手套、口罩等防護用具。

②以羊、豬為例稀釋受檢血清：第1 試管加入1.15 mL 的稀釋液，第2～4 試管各加入0.5 mL 稀釋液，然后用1 mL 吸管吸取被檢血清0.1 mL 加入第1 試管內混勻（混勻方法：將試管內混合液吸入吸管，再沿試管壁徐徐吹入試管中，如此吸入吹出3～4次充分混勻），用該吸管吸入0.25 mL 混合液棄去。再從第1 個試管內吸取0.5 mL 混合液加入第2 個試管，用該吸管如前法混合均勻，再從第2 試管內吸取0.5 mL 混合液加入第3 個試管，如此倍比稀釋至第4 試管，棄去0.5 mL 混合液，稀釋完畢后從第1～4 試管血清稀釋度依次為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。牛的血清稀釋法與上述基本一致，只是第1管加1.2 mL 稀釋液和0.05 mL 被檢血清。將0.5 mL 20 倍稀釋的抗原加入已稀釋好的血清管中并振搖均勻，羊和豬的血清稀比例釋依次是1∶25、1∶50、1∶100、1∶200，牛的血清稀釋比例依次是1∶50、1∶100、1∶200、1∶400。陰性對照、陽性對照稀釋和加抗原的方法與被檢血清相同，抗原對照：20 倍稀釋抗原液0.5 mL，再加0.5 mL 稀釋液觀察抗原是否有自凝現象。放置在37～40 ℃恒溫培養箱中24 h 取出檢查并記錄結果。

③判定：參照比濁管判定凝集度，比濁管的制備見表1。

表1 比濁管的制備

牛的1∶100 血清稀釋，豬、羊的1∶50 血清稀釋出現++凝集時受檢血清判為陽性；牛的1∶50血清稀釋，豬、羊的1∶25 血清稀釋出現++凝集時受檢血清判為可疑，可疑的家畜經3～4 周后重檢如果仍為可疑，牛、羊判為陽性，豬重檢可疑，可根據臨床癥狀和同場內有沒有大量陽性病例判定，如沒有則可判為陰性。

2 結果與分析

采集20 個養牛場100 份血清樣品，只有8 份陽性樣品，陽性率8%，陽性場有2 個，陽性率10%。根據流行病學調查和檢測結果表明信陽地區養牛場有布魯氏桿菌感染：采集20 個養牛場100 份血樣，只有8 份陽性，陽性率8%，陽性場有2 個，陽性率10%。養羊場病原學沒有發現陽性，血清學檢測30 個場，陽性場數21 個，陽性率70%，樣品陽性數126，樣品陽性率42%。養豬場病原學沒有發現陽性，血清學5 個場100 份樣，只有1 個陽性，陽性率1%。血清學檢測陽性是疫苗免疫的結果。

3 討 論

1）養牛場的2 個陽性場，一個是肉牛場，一個是奶牛場，其中奶牛場較為嚴重，5 份樣品2 次檢驗全是陽性，后來市、縣動物疫病預防控制中心的工作人員對該場進行普檢，檢出染疫牛20 多頭，全部撲殺。另一個肉牛場普檢查出2 頭陽性牛，也給予撲殺。

2）這2年國家要求對牛、羊布魯氏桿菌病實施強制免疫，從流行病學調查來看，養牛場執行并不理想，養羊場執行較好，但從免疫效果來看并不理想。而從免疫學和生態學上看，對牛羊實施強制免疫還要進一步調研。

3）養羊場也經常見到流產，但大部分是機械性流產、營養性流產、中毒性流產，也有疾病性流產，不過因布魯氏桿菌引起的流產很少見，可能有2 個方面的原因：一是信陽地區養牛的數量和規模都較小，二是與信陽人的生活習慣有關，信陽人大部分都比較喜潔凈，養殖場也很注重衛生和消毒。