中西藥聯合逆轉多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性分析

張輝

【摘 要】 目的：研究分析中西藥聯合逆轉多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性的效果。方法：收集赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿對 MDR-PA的 抑菌作用，并測試赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環丙沙星進行聯合藥敏試驗。結果：根據實驗結果分析，五倍子和小檗堿可以顯著逆轉 MDR-PA 的耐藥性，且P<0.05，具有統計學意義;同時亞胺培南和小檗堿聯合取得效果最強，孢他啶與五倍子聯合結果具有一定的效果。環丙沙星和中藥聯合無明顯作用，實驗過程中未發現拮抗作用。結論：中西藥聯合逆轉多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性可以取得一定的效果，具有一定的推廣和應用價值。

【關鍵詞】 中西藥聯合;多重耐藥銅綠假單胞菌;耐藥性逆轉

為了研究分析中西藥聯合逆轉多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性的效果，本次研究選取了赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿等五種中藥聯合西藥進行實驗。詳情可見正文。

1 材料與方法

1.1 實驗菌株

本次研究的菌株來源為2017年4月至2018年4月臨床分離鑒定的菌株，排除剔除重復分離菌株后共有多重耐藥銅綠假單胞菌（MDR-PA）50株，MDR定義為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）。對常見的抗菌藥物不敏感。

1.2 中藥水煎劑

本次研究使用的中藥水煎劑主材料為赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草，均于養和堂藥房進行采購），小檗堿來源為中國藥品生物檢定所。

1.3 方法

本次研究中草藥抗菌實驗使用中草藥抗菌實驗試管法，應用K-B法完成逆轉細菌耐藥性實驗，采用棋盤格法進行聯合藥敏試驗。

1.3.1 藥液倍比稀釋和加菌

藥液的倍比稀釋使用2倍稀釋法，使1至10管含有倍比稀釋的藥液（1：2，1：4，1：8等系列藥液）。MDR-PA菌株使用生理鹽水調節其至0.5麥氏濃度（1.5×108CFU/ml），在藥液稀釋30倍后，向兩倍稀釋完成的藥液1～11支試管置入100μl菌懸液，最終接種量為5×105CFU/ml，設置第十一管為陽性對照管，第十二管不加菌，設置為陰性對照管。

1.3.2 逆轉細菌耐藥性試驗

將赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿原液配制為低于最低抑菌濃度的藥液，將MDR-PA置于各藥液中，在35℃的環境下培育一天左右后利用生理鹽水離心洗滌配制為0.5麥氏濃度菌液，MH平板上使用K-B法完成藥敏試驗，同時以原菌株藥敏試驗為陰性對照，比較逆轉完成后抑菌圈直徑大小。

1.3.3 中西藥聯合藥敏試驗

聯合藥敏試驗采用棋盤格微量稀釋法完成，研究過程中共采用九個稀釋度，其中最高濃度為其MIC的4倍，依次倍比稀釋為1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256倍濃度，藥物分別在96孔培養板上按縱列、橫列進行聯合。實驗中接種菌量控制在5×105CFU/ml，于35℃的環境下孵育一天后觀察結果。

2 結果

2.1 五種中草藥對多重耐藥菌逆轉細菌耐藥性結果

本次實驗結果顯示，當抗菌紙片為阿米卡星時，赤芍最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（14.39±1.57）mm，五倍子最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（16.39±1.05）mm，野菊花最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（15.30±1.05）mm，魚腥草最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（15.09±1.01）mm，小檗堿最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（15.12±0.99）mm，陰性對照組為（15.05±0.92）mm。當抗菌紙片為慶大霉素時，赤芍最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（8.09±1.00）mm，五倍子最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（9.14±1.08）mm，野菊花最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（8.17±0.85）mm，魚腥草最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（8.12±0.69）mm，小檗堿最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（10.11±0.99）mm，陰性對照組為（7.85±0.56）mm。當抗菌紙片為哌拉西林時，赤芍最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（9.30±2.42）mm，五倍子最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（10.85±1.85）mm，野菊花最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（9.30±1.64）mm，魚腥草最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（8.12±0.64）mm，小檗堿最低濃度的中藥逆轉后的直徑為（10.13±0.89）mm，陰性對照組為（9.30±2.01）mm。根據實驗結果分析，五倍子與小檗堿對 MDR-PA 逆轉前后數據差異較大，具有統計學意義，P<0.05可以發揮一定程度逆轉作用。

赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環丙沙星進行聯合藥敏試驗。實驗結果顯示，亞胺培南和小檗堿聯合取得效果最強，18 株協同，12 株相加;頭孢他啶與五倍子聯合結果為9 株協同，15株相加;環丙沙星和赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿聯合無明顯作用，芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環丙沙星聯合未發現拮抗作用。

3 討論

近些年由于廣譜抗生素碳青霉烯類藥物的濫用，多重耐藥菌不斷增加甚至出現泛耐藥菌株，相關藥物隨著時間的推移治療效果逐漸降低，新藥的研發速度甚至無法追上細菌耐藥的速度，為相關的治療工作帶來了極大的困難。

本次實驗發現亞胺培南和小檗堿聯合取得效果最強，18 株協同，12 株相加;頭孢他啶與五倍子聯合結果為9 株協同， 15 株相加;環丙沙星和赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿聯合無明顯作用，芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環丙沙星聯合未發現拮抗作用。

綜上所述，中西藥聯合逆轉多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性可以取得一定的效果，中西藥聯合可以有效提高抗菌治療相關工作效果。

參考文獻

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