頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用鑒定馬卡列丙揮發(fā)性成分*

馬潔瑤 ，史思林 ，羅貞貴 ，歐陽(yáng)敏 ，李凱琳 ，蔡 偉 ，，張?jiān)谄?△

（1.湖南醫(yī)藥學(xué)院·侗醫(yī)藥研究湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 懷化 418000； 2.湖南醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，湖南 懷化 418000）

馬卡列丙Duhaldea nervosa（Wallich ex Candolle）A.Anderberg為菊科旋覆花屬顯脈旋覆花的全草，又稱小黑藥、毛秀才等，廣泛分布于中國(guó)湖南、貴州、云南、廣西等地，在印度、尼泊爾、越南、緬甸等也有分布［1-2］。其常被制成食品香料，是緩解風(fēng)濕和治療跌打損傷的民間藥物，尤其在促進(jìn)骨折愈合方面有較好的功效［3］。研究表明，馬卡列丙主要由甾類、萜烯類、綠原酸和揮發(fā)性成分［4-7］組成，而揮發(fā)性成分被認(rèn)為是主要的活性成分［8-10］。本研究中采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜（HS-SPME-GC-MS）聯(lián)用技術(shù)分析馬卡列丙根和莖的揮發(fā)性成分。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Trace1300-ISQ型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Thermo Scientific 公司）；Supelco 固相微萃取裝置、75 μm CAR／PDMS萃取纖維頭、4mL頂空瓶（美國(guó)Supelco公司）。

1.2 試藥

馬卡列丙Duhaldea nervosa干燥根和莖于2018年12月購(gòu)于云南，經(jīng)湖南醫(yī)藥學(xué)院侗醫(yī)藥研究湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生藥學(xué)專家汪冶教授鑒定為正品，通過(guò)基原鑒定法、性狀鑒定法、顯微鑒定法鑒定為菊科顯脈旋覆花，根（編號(hào)為2018120401）和莖（編號(hào)為2018120402）標(biāo)本存于藥學(xué)院；C7-C30飽和烷烴（各組分含量為1000μg／mL，批號(hào)為L(zhǎng)RAC0353，Sigma-Aldrich公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

將75 μm CAR／PDMS固相微萃取纖維頭置氣相質(zhì)譜的進(jìn)樣口，300℃老化10 min；分別取馬卡列丙根、莖粉末10 mg，精密稱定，置4 mL頂空瓶中密封，固相微萃取頭插入密封的頂空瓶上部空間，65℃暴露30 min，吸收揮發(fā)物；將萃取頭抽出，迅速插入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）進(jìn)樣口，300℃解吸揮發(fā)性化合物5 min后拔出，檢測(cè)獲得馬卡列丙根莖揮發(fā)性成分的氣相色譜和質(zhì)譜信息。采用相同GC-MS條件檢測(cè)C7-C30正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品，得正構(gòu)烷烴的氣相色譜和質(zhì)譜信息。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜條件

氣相色譜條件：色譜柱為TG-5MS型5%苯基二甲基聚硅氧烷毛細(xì)管色譜柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫，初始溫度50℃（保持3min），以2℃ ／min的速率升溫至170℃（保持5 min），以10℃ ／min的速率升溫至280℃（保持5 min）；載氣為氦氣（純度為99.999%，流速為1 mL／min）；進(jìn)樣口溫度保持300℃，分流比為50 ∶1。

質(zhì)譜條件：電子電離（EI）源；電子能量為70 eV；離子源溫度為280℃；傳輸線溫度為250℃；掃描質(zhì)量范圍為 40～620 amu。

2.3 結(jié)果

從馬卡列丙的根和莖中分別鑒定出37種和38種化學(xué)成分，根據(jù)化合物色譜峰和C7-C30正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間計(jì)算保留指數(shù)（RI）［11］，采用峰面積歸一化法計(jì)算馬卡列丙根和莖揮發(fā)性成分的相對(duì)含量，分別占87.65%和89.10%，詳見(jiàn)表1。與質(zhì)譜NIST17庫(kù)檢索匹配，對(duì)化合物色譜峰進(jìn)行分析與鑒定，詳見(jiàn)圖1。

圖1 總離子流圖

3 討論

馬卡列丙根和莖中揮發(fā)性成分共檢出化合物43種，包括烯烴類18種，酯類8種，芳香族類4種，醚類3種，醇類2種，醛類2種，酚類2種，酸類1種，醌類1種，雜環(huán)類1種，硅烷類1種，與文獻(xiàn)［9-10］的報(bào)道揮發(fā)油主要成分基本一致。結(jié)果表明，馬卡列丙根和莖中的主要成分為 thymol，isobutyrate thymol和 thymol 2-methylbutanoate，這3個(gè)成分均有較好的抗炎和鎮(zhèn)痛作用［12-13］。對(duì)比根和莖，3種主成分在根中的百分含量均比莖中高。Thymol 2-methylbutanoate含量比文獻(xiàn)［11］報(bào)道的高，其主要原因可能是不同采收地點(diǎn)引起的。

表1 馬卡列丙的揮發(fā)性成分

采用HS-SPME-GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析馬卡列丙的根和莖的揮發(fā)性成分，可為進(jìn)一步研究馬卡列丙的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)奠定基礎(chǔ)。