化痰祛濕法對自發(fā)性高血壓大鼠血管的保護(hù)作用*

劉方洲，張雪俠，楊丹丹，王曉麗，郭曉燕，王守富

(1.河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450004； 2.黃河中心醫(yī)院，河南 鄭州 450004)

高血壓是引起腦卒中、冠心病和腎功能損傷等的重要危險(xiǎn)因素。2018年修訂的《中國高血壓防治指南》指出，我國成年人高血壓患病率為27.9%[1-2]，且患病率與年齡呈正相關(guān)。高血壓屬中醫(yī)學(xué)“眩暈”“頭痛”等范疇[3]。很多中藥都有不同程度的降壓作用，單味中藥有川芎[4]、牛膝[5]、天麻[6]、地骨皮[7]、葛根[8-9]、山楂[10]、丹參[11]、無患子[12]、沙苑子[13]、萊菔子[14]等，中藥復(fù)方有天麻雙膝顆粒[15]、補(bǔ)益肝腎方[16]、化痰祛濕降壓湯[17]等。化痰祛濕法是王守富主任醫(yī)師臨床常用之法，處方主要由法半夏、陳皮、茯苓、白術(shù)、天麻、鉤藤等組成。本研究以自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)為研究對象，對化痰祛濕法的降壓機(jī)制和對血管的保護(hù)作用進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

SPF級自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)和近交系京都種Wistar(Wistar-Kyoto，WKY)大鼠，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號依次是1100111911000219，1100111911000221。

1.2 藥品、試劑與儀器

化痰祛濕法組方：法半夏 12 g，陳皮 15 g，茯苓 15 g，白術(shù) 15 g，天麻 10 g，鉤藤 30 g，蔓荊子 10 g，葛根 15 g，荷葉 10 g，川芎 15 g，澤瀉 15 g。藥材由河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院藥劑科提供，均為正品。藥材加8倍量水煎煮3次，每次1 h，最后濃縮至生藥含量為0.2 g/mL。馬來酸依那普利片，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)產(chǎn)品，批號18101611，10 mg/片； ET、AngⅡ、NO、SOD ELISA試劑盒，均為武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司產(chǎn)品，批號依次是2IQRK3KM4E、HQVQCZ12A3、H9YB8MBKW4、XG4A2K9Z3S。BP-2010 series 智能無創(chuàng)血壓計(jì)，北京軟隆生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；V-6振蕩器、LX-800掌上離心機(jī)，均為其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；JT-12J 自動(dòng)組織脫水機(jī)、JB-L5石蠟包埋機(jī)，均為武漢俊杰電子有限公司產(chǎn)品； RM2016病理切片機(jī)，上海徠卡儀器有限公司產(chǎn)品；KD-P組織攤片機(jī)，浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；DHG-9140A烤箱，上海慧泰儀器制造有限公司產(chǎn)品。

1.3 動(dòng)物分組與給藥

采用SHR作為模型鼠，隨機(jī)分為模型對照組、依那普利組、1/10依那普利組、化痰祛濕高劑量、化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組，以WKY大鼠作為空白對照組。各組分別給予相應(yīng)劑量藥物：依那普利組給予0.02 g/kg的依那普利， 1/10依那普利組給予0.002 g/kg的依那普利，化痰祛濕高劑量組給予中藥2 g/kg，化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組給予中藥 2 g/kg+0.002 g/kg的依那普利，WKY組和模型對照組分別給予相應(yīng)劑量的去離子水。每天上午灌胃西藥，下午灌胃中藥，連續(xù)給藥8周。

1.4 檢測指標(biāo)

每給藥兩周進(jìn)行1次血壓測量。末次給藥后，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100 g/L的 水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血，離心分離血漿，采用ELISA試劑盒檢測血管緊張素(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)、一氧化氮(nitrous oxide，NO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、內(nèi)皮素(endothelin,ET)的含量；取血后，分離胸主動(dòng)脈，剔除脂肪組織，用多聚甲醛固定，進(jìn)行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin staining，HE)染色，觀察胸主動(dòng)脈組織病理學(xué)改變。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠血壓對比

與WKY組對比，模型對照組大鼠各個(gè)時(shí)期血壓均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明高血壓模型成功。與模型對照組對比，依那普利組、1/10依那普利組、化痰祛濕高劑量組、化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組的基礎(chǔ)血壓均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說明具有可比性。從給藥開始到給藥8周，依那普利組、化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組各組血壓值均有不同程度的降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血壓對比

2.2 各組大鼠血清AngⅡ、NO、SOD、ET含量對比

與WKY組對比，模型對照組大鼠血清中AngⅡ、ET含量升高，SOD、NO含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組對比，依那普利組和化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組的AngⅡ、ET含量降低、NO含量升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1/10依那普利組和化痰祛濕高劑量組的4個(gè)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 化痰祛濕法對SHR大鼠血清AngⅡ、NO、SOD、ET含量對比

2.3 各組大鼠胸主動(dòng)脈組織病理學(xué)表現(xiàn)對比

WKY組大鼠血管彈性膜排列整齊，血管壁各層膜結(jié)構(gòu)層次清晰，中膜無增厚現(xiàn)象。模型對照組SHR彈性膜排列紊亂，層數(shù)增加，與WKY組對比，中膜顯著增厚，部分出現(xiàn)內(nèi)膜損傷和外膜炎癥浸潤現(xiàn)象。各給藥組組織病理學(xué)改變較模型對照組均有明顯減輕，其中以化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組和依那普利組效果較為顯著。見圖1。

圖1 各組大鼠胸主動(dòng)脈組織病理學(xué)表現(xiàn)對比(HE染色，×400)

3 討 論

化痰祛濕法主要用于治療痰濕壅盛所致頭昏、頭沉、頭重如裹、頭痛、胸悶、嘔吐痰涎、心悸、失眠等癥，也可用于高血壓、腦動(dòng)脈硬化癥及高脂血癥見上證者。化痰祛濕方為痰夾風(fēng)邪上擾所致眩暈、頭痛而設(shè)，總的病機(jī)是脾虛生濕，濕痰壅遏為患。方中半夏性溫味辛、燥濕化痰，降逆止嘔，意在治痰；天麻味甘性平，入厥陰經(jīng)，擅長平肝息火而止眩，旨在治風(fēng)。兩味相伍，化痰息風(fēng)，為治痰夾風(fēng)邪上擾所致眩暈、頭痛之要藥。

本研究選用SHR為研究對象，其是由有顯著高血壓癥狀的遠(yuǎn)交WKY雄性鼠和帶有輕微高血壓癥狀的雌性鼠交配所得到的子代，子代又通過近交連續(xù)篩選最終得到的具有自發(fā)高血壓性狀的大鼠[18]，SHR育成后血壓達(dá)200 mmHg以上。此鼠除有高血壓自發(fā)率為100%特點(diǎn)外，還有高血壓性心血管病變，適于人類的原發(fā)性高血壓研究[19-20]。

血管纖維化是高血壓對靶器官危害加劇的病理基礎(chǔ)，血管纖維化組織病理學(xué)特征是彈力膜排列紊亂，中膜顯著增厚。本實(shí)驗(yàn)中，模型對照組大鼠胸主動(dòng)脈彈力膜排列紊亂、中膜增厚，各給藥組的這些組織病理學(xué)改變均減輕，其中以依那普利組和化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組效果較為顯著，提示化痰祛濕法對SHR靶器官血管損傷有一定的保護(hù)作用，且與西藥聯(lián)用效果更好。

AngⅡ是腎素-血管緊張素系統(tǒng)的主要活性物質(zhì)，是心血管功能重要的調(diào)節(jié)劑。NO是主要的舒血管物質(zhì)，具有舒張血管、清除氧自由基及抑制血小板聚集的作用[21]。SOD是機(jī)體內(nèi)天然存在的超氧自由基清除因子，可以轉(zhuǎn)化有害的超氧自由基。ET是目前為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)縮血管物質(zhì)，是引起與血管損傷相關(guān)疾病共同的致病因素。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與模型對照組對比，依那普利組和化痰祛濕高劑量+1/10依那普利組的AngⅡ、ET含量降低、NO含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);1/10依那普利組和化痰祛濕高劑量組血清中各個(gè)指標(biāo)均有相應(yīng)趨勢。此提示化痰祛濕法降壓的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)AngⅡ、ET和NO含量有關(guān)。少量的AngⅡ能使活性氧減少，減少氧化應(yīng)激的損傷，使NO含量升高，發(fā)揮舒血管的作用，從而達(dá)到降低血壓的作用。

綜上所述，化痰祛濕法與依那普利聯(lián)用可以降低血壓，同時(shí)減少了西藥依那普利的用量，提示該法與西藥聯(lián)用效果更好。