梅山豬偽狂犬病凈化的研究

朱效俊，王 勃，丘沛炎，唐賽涌，衛(wèi)金良，甘葉青，姜琴芳，趙羽豐

（1.上海市嘉定區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 嘉定 201807；2.贛州傲新牧業(yè)開發(fā)有限公司，江西 贛州 341000）

豬偽狂犬病（PR）是由豬偽狂犬病病毒（PRV）引起的豬的一種急性、熱性、高度傳染性疫病，臨床癥狀隨感染豬年齡不同而有很大差異，斷奶前后仔豬主要表現(xiàn)呼吸系統(tǒng)癥狀，也有部分出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，拉稀、嘔吐，但以腹瀉為癥狀的相關(guān)報(bào)道較少[1]。PR的傳播途徑較多，經(jīng)消化道、呼吸道、損傷的皮膚以及生殖道均可感染。仔豬常因吃了感染母豬的奶而發(fā)病；懷孕母豬感染本病后，病毒可經(jīng)胎盤而使胎兒感染，引起流產(chǎn)和死產(chǎn)；病豬和隱性感染的豬可以長(zhǎng)期排毒，嚴(yán)重影響母豬的繁殖力。PRV主要通過公豬精液、母豬胎盤傳播，亦可以水平傳播[2]。

近年來(lái)大多數(shù)豬場(chǎng)偽狂犬病病毒感染隨著胎齡的增加而呈上升趨勢(shì)，PRV可感染各種年齡段的豬，易與豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬傳染性胸膜肺炎等疫病繼發(fā)或混合感染，又可致豬隱性感染，而隱性感染的帶毒豬是規(guī)模化豬場(chǎng)發(fā)生PR的主要傳染源之一[3]。梅山豬豬場(chǎng)使用豬偽狂犬病基因缺失疫苗對(duì)初生仔豬滴鼻通過黏膜免疫。占位效應(yīng)，讓疫苗先占領(lǐng)野毒侵害的位置，再配合肌肉注射，可以大幅減少仔豬感染野毒的幾率，從而減少豬場(chǎng)的發(fā)病率[4]。筆者研究的課題主要通過“加強(qiáng)免疫、擴(kuò)群、檢測(cè)、淘汰”等模式成功凈化豬群偽狂犬病，為其它相關(guān)豬場(chǎng)凈化防控PRV提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 豬偽狂犬病gB-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：GP547。豬偽狂犬病gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：JP793。熒光PCR試劑盒，購(gòu)自湖南潤(rùn)美基因科技有限公司，批號(hào)：19081501。

1.1.2 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)、試驗(yàn)豬與疫苗來(lái)源 2017年5月至2020年6月選擇嘉定區(qū)梅山豬育種中心全群種豬，在嘉定區(qū)嘉唐公路1991號(hào)進(jìn)行此試驗(yàn)。本試驗(yàn)針對(duì)梅山豬育種中心全群271頭種豬進(jìn)行凈化。生產(chǎn)數(shù)據(jù)來(lái)源于嘉定區(qū)梅山豬育種中心2016年368頭經(jīng)產(chǎn)母豬所產(chǎn)699窩8 354頭仔豬的分娩記錄、2017年235頭經(jīng)產(chǎn)母豬417窩4 989頭仔豬的分娩記錄、2018年179頭經(jīng)產(chǎn)母豬352窩4 453頭仔豬分娩記錄、2019年172頭經(jīng)產(chǎn)母豬334窩4 258頭仔豬的分娩記錄。疫苗來(lái)源：生產(chǎn)公母豬及其后備公母豬接種疫苗來(lái)自梅里亞有限公司法國(guó)生產(chǎn)廠，豬偽狂犬病基因缺失疫苗（Bartha株），疫苗批號(hào)：L447800。初生仔豬滴鼻接種疫苗和中豬接種疫苗均來(lái)自勃林格殷格翰動(dòng)物保健（美國(guó)）有限公司，豬偽狂犬病基因缺失疫苗（Bartha株）疫苗批號(hào)：1951137A。

1.1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與豬群免疫程序 對(duì)全場(chǎng)所有生產(chǎn)公母豬和后備公母豬全部進(jìn)行豬偽狂犬病gE有感染抗體的檢測(cè)，陽(yáng)性淘汰，陰性留用。定期消毒，加強(qiáng)免疫，生產(chǎn)公母豬每季度使用梅里亞偽狂犬病疫苗（Bartha株）接種1次，每次頸部肌肉接種2頭份。仔豬初生當(dāng)日使用勃林格偽狂犬病疫苗滴鼻通過黏膜免疫接種1頭份，45日齡、120日齡分別使用勃林格偽狂犬病疫苗免疫接種1頭份。后備種豬在配種前使用梅里亞偽狂犬病疫苗普免2次，每次1.5頭份，間隔3～4周。

1.1.4 豬場(chǎng)偽狂犬病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)追溯分析 圖1是2013年起每年2次對(duì)梅山豬種群PR抗體檢測(cè)的數(shù)據(jù)，感染率分別為68.75%、60.00%、80.00%、70.00%、56.67%、43.33%、37.14%、34.29%、42.18%。圖1說明梅山豬母豬群體存在PRV野毒感染，說明豬場(chǎng)PR較為嚴(yán)重，PR感染比例較高，經(jīng)過加強(qiáng)豬群系統(tǒng)性的防控，并擴(kuò)大后備豬種群，逐步建立陰性豬群。2015—2017年感染狀況有下降趨勢(shì)，但需要淘汰指數(shù)較高。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 定期采集梅山生產(chǎn)公母豬、后備公母豬、商品豬血液、公豬精液、豬扁桃體和初生仔豬臍帶血。

1.2.2 測(cè)定方法 PRV gE抗體檢測(cè)和PRV gB抗體檢測(cè)，采用阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法和熒光PCR方法進(jìn)行：檢測(cè)到gE抗體陽(yáng)性的樣品可初步判斷該豬為PRV野毒感染，gE抗體陰性的樣品為健康豬；檢測(cè)到gB抗體為陽(yáng)性說明該豬有免疫抗體，gB抗體為陰性說明該豬免疫失敗。公豬精液和初生仔豬臍帶血采用熒光PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 飼養(yǎng)管理 自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出、多點(diǎn)式飼養(yǎng)。加強(qiáng)豬場(chǎng)門口來(lái)往人員、車輛的控制與消毒；限控飼養(yǎng)員、技術(shù)員等一線人員外出或串棚，場(chǎng)外人員不得進(jìn)去生產(chǎn)區(qū)。防止流浪犬貓等動(dòng)物串入場(chǎng)內(nèi)，采取嚴(yán)格的滅鼠措施，并定期開展滅蟲、滅蚊、滅蒼蠅等工作。每天保持欄舍干凈，每周全場(chǎng)徹底消毒1次，對(duì)豬舍、欄圈、內(nèi)外環(huán)境、用具、運(yùn)輸工具以及其它一切可能被污染的場(chǎng)所和設(shè)施、設(shè)備進(jìn)行嚴(yán)格消毒，并將消毒工作規(guī)范化、制度化。隔離病豬，淘汰感染無(wú)價(jià)值的病豬。對(duì)死亡豬只、死胎、流產(chǎn)物等進(jìn)行病原檢測(cè)和無(wú)害化處理。建立合理的免疫程序，嚴(yán)格執(zhí)行免疫接種的操作規(guī)程，選用高效優(yōu)質(zhì)疫苗，確保易感豬群始終得到疫苗抗體的保護(hù)。根據(jù)各階段豬的營(yíng)養(yǎng)需要，提供營(yíng)養(yǎng)均衡、適宜的飼料。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析方法 采用Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步分析，用SPSS軟件計(jì)算各指標(biāo)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行顯著性分析，當(dāng)P<0.05時(shí)表示差異顯著，P>0.05時(shí)表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 2017—2020年種豬PRVgE抗體和PRVgB抗體水平

表1是2017—2020年對(duì)種豬監(jiān)測(cè)情況，2017年5月份開展梅山豬PR的凈化，5月份共采集梅山豬生產(chǎn)公母豬及其后備公母豬血樣271份，檢測(cè)結(jié)果77份PRV gE陽(yáng)性，其中公豬8頭陽(yáng)性（杜洛克公豬2頭），陽(yáng)性率28.4%，按照凈化要求進(jìn)行全部淘汰處理。表1看出除2017年12月抽檢和2018年5月全群檢測(cè)各排查出1例，其它批次檢測(cè)PRV野毒陽(yáng)性率都為0，2018年10月之后全群抽檢PRV野毒陽(yáng)性頭數(shù)為0。2018—2019年抽檢PR gB抗體陽(yáng)性率分別為：100.00%、96.77%、90.00%、100.00%，說明近年來(lái)PR凈化工作見其效，免疫水平較高，還需繼續(xù)加強(qiáng)疫病防控工作，2018年10月至2020年已逐步轉(zhuǎn)陰，豬群較穩(wěn)定。

表1 2017—2020年種豬PRV-gE抗體和PRV-gB抗體水平

2.2 梅山種公豬精液及母豬扁桃體的熒光PCR檢測(cè)

由表2可知，PRV gE抗體陽(yáng)性數(shù)為0，初步判斷抽檢豬群未感染PR野毒，豬群健康相對(duì)穩(wěn)定。

表2 梅山公豬精液及母豬扁桃體的熒光PCR檢測(cè)

2.3 初生仔豬臍帶血PRV野毒感染抗體PCR檢測(cè)

表3是從2017年5月份開始對(duì)剛初生仔豬臍帶血PRV野毒感染抗體進(jìn)行抽檢，每窩隨機(jī)采集2頭仔豬的臍帶血，共計(jì)148頭份。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果：PRV野毒感染抗體陰性，判斷為健康仔豬，母豬PRV野毒初步判斷為陰性。

表3 初生仔豬臍帶PRV野毒感染抗體PCR檢測(cè)

2.4 探索豬各階段抗體變化及其PRV感染狀況，制訂合理免疫程序

圖2是2018年12月對(duì)豬各階段主要免疫疫病抗體水平摸底，每階段采集20份血樣，合計(jì)180份。監(jiān)測(cè)表明豬瘟抗體水平全程整體較好，發(fā)生豬瘟的風(fēng)險(xiǎn)降低，偽狂犬病母源抗體維持到72日齡一直在較高水平，偽狂犬病疫苗免疫程序由原來(lái)42日齡改為80日齡。豬口蹄疫抗體水平在35日齡時(shí)是65%，之后抗體水平更較差，免疫失敗，感染疫病風(fēng)險(xiǎn)增加，應(yīng)及時(shí)調(diào)整免疫方案和追蹤監(jiān)測(cè)，將原有口蹄疫疫苗首免日齡由55日齡提到45日齡，二免日齡改為66日齡，三免100日齡。豬藍(lán)耳病抗體15日齡時(shí)是90%，應(yīng)該屬于母源抗體保護(hù)，之后抗體水平較差，到90日齡后抗體升高屬于疫苗抗體，120日齡補(bǔ)免后高抗體持續(xù)到肥豬，說明免疫失敗，疫病風(fēng)險(xiǎn)增加，應(yīng)該考慮疫苗接種時(shí)間和疫苗效價(jià)，及時(shí)追蹤免疫效果，將藍(lán)耳病疫苗免疫接種時(shí)間由原來(lái)28日齡改為17日齡。

2.5 商品豬PRV gE和gB抗體檢測(cè)

表4是2018年之后對(duì)商品豬血樣偽狂犬病抗體和感染抗體的監(jiān)測(cè)，商品豬共采集821份，其中2018年12月批次2頭商品豬感染，并且2批次抗體水平分別是28.5%、60.5%，說明豬群仍然存在豬偽狂犬病野毒，抗水平較差，應(yīng)加強(qiáng)免疫防控。2019年12月以后5批次399份樣品豬偽狂犬病感染抗體為0，其中抽檢2批次抗體水平分別95%、94.3%，說明防疫較好，2019年12月以來(lái)未檢測(cè)出偽狂犬病野毒感染，豬群轉(zhuǎn)陰。

表4 商品豬PRV gE和gB抗體檢測(cè)

2.6 凈化前后生產(chǎn)成績(jī)?cè)u(píng)估

表5是2016—2019年經(jīng)產(chǎn)母豬繁殖情況，由表5可見，2017年與2016年窩均產(chǎn)仔數(shù)和窩均產(chǎn)活仔數(shù)差異均不顯著（P>0.05），2018年、2019年窩均產(chǎn)仔數(shù)和窩均產(chǎn)活仔數(shù)與2017年和2016年相比差異顯著（P<0.05）。2016—2019年窩均產(chǎn)活仔數(shù)分別是10.88頭、10.91頭、11.97頭、11.99頭，凈化后2019年窩均產(chǎn)活仔數(shù)比2016年高1.11頭，提高了10.20%，凈化后生產(chǎn)指標(biāo)明顯高于實(shí)施疫病凈化前。

表5 2016—2019年梅山豬產(chǎn)仔情況

3 小結(jié)

試驗(yàn)研究依靠高效的偽狂犬病疫苗、合理免疫接種、提高生物安全等措施預(yù)防偽狂犬病野毒感染，提高全群抗體水平，抗體水平達(dá)到90%以上，阻斷PRV的傳播，經(jīng)檢測(cè)群體PRV轉(zhuǎn)陰，達(dá)到免疫凈化目的，窩產(chǎn)活仔數(shù)比凈化前2016年提高1.11頭。

4 討論

本課題于2017年5月份正式啟動(dòng)和實(shí)施，課題實(shí)施前做了大量準(zhǔn)備工作，梅山豬育種中心通過采用“加強(qiáng)免疫、擴(kuò)群、檢測(cè)、淘汰”的疫病凈化模式，于2019年豬偽狂犬病經(jīng)檢測(cè)群體轉(zhuǎn)陰，迄今豬群豬偽狂犬病感染抗體維持陰性，該病在本場(chǎng)得到有效凈化，以下幾點(diǎn)總結(jié)可為其它豬場(chǎng)凈化豬偽狂犬病工作提供借鑒。

自繁自養(yǎng)型生產(chǎn)模式是保證豬場(chǎng)生物安全性的重要措施之一[5]。堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出等管理模式，嚴(yán)格引種制度，引種來(lái)源應(yīng)屬于陰性豬場(chǎng)，并經(jīng)檢測(cè)合格后再引種，引種后要隔離飼養(yǎng)30 d后，確定偽狂犬病、豬瘟、非洲豬瘟、藍(lán)耳病等傳染性疫病為陰性方可入場(chǎng)，從種源上杜絕病原傳入。隔離病豬，淘汰感染無(wú)價(jià)值的病豬。對(duì)死亡豬只、死胎、流產(chǎn)物等進(jìn)行病原檢測(cè)和無(wú)害化處理。

加強(qiáng)豬場(chǎng)門口來(lái)往人員、車輛的管控與消毒措施；限制生產(chǎn)區(qū)人員流動(dòng)，需要外出人員做好消毒隔離，方可入場(chǎng)，場(chǎng)外人員不得進(jìn)去生產(chǎn)區(qū)。每天做好豬舍環(huán)境衛(wèi)生，保持圈舍干燥，做好夏季防暑降溫和冬季保暖工作，加強(qiáng)通風(fēng)，防止氨氣過重誘發(fā)呼吸道疾病，影響疫病防控效果。每周定期對(duì)豬舍、欄圈、內(nèi)外環(huán)境、用具、運(yùn)輸工具以及其它一切可能被污染的場(chǎng)所和設(shè)施、設(shè)備進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，并制定消毒制度。定期驅(qū)除豬體內(nèi)外及其環(huán)境中的寄生蟲，禁止犬貓等動(dòng)物進(jìn)入場(chǎng)內(nèi)。由于豬偽狂犬病的傳染鏈有鼠類參與，給該病的凈化帶來(lái)相當(dāng)大的難度，因此做好防鼠滅鼠工作是規(guī)模化豬場(chǎng)控制凈化PR的關(guān)鍵[6]。采取定期的滅鼠措施，并開展滅蟲、滅蚊、滅蒼蠅等工作。

疫苗是防控PR感染與傳播的重要手段[7]。雖然現(xiàn)使用疫苗對(duì)PRV變異毒株的保護(hù)力減弱，但有研究表明增加現(xiàn)使用PRV疫苗的免疫次數(shù)對(duì)變異毒株仍具有一定的保護(hù)效果[8]。對(duì)陽(yáng)性豬場(chǎng)，加強(qiáng)母豬免疫的同時(shí)還需要仔豬滴鼻通過黏膜免疫和肌肉注射相結(jié)合，滴鼻能建立黏膜免疫，并且起到占位效應(yīng)，阻斷偽狂犬病病毒對(duì)呼吸道的攻擊，又能有效避免母源抗體的干擾，但是肌肉注射的免疫方式受母源抗體影響較大，甚至導(dǎo)致免疫失敗[9]。有文獻(xiàn)顯示，偽狂犬病母源抗體最高能維持8～12周[10]，因此要根據(jù)豬場(chǎng)實(shí)際情況，摸索抗體變化規(guī)律，并建立合理的免疫程序，選擇優(yōu)質(zhì)疫苗，嚴(yán)格免疫接種的操作規(guī)程，確保易感豬群始終得到疫苗抗體的保護(hù)，依靠疫苗毒壓制野毒，控制野毒排放，阻斷垂直傳播，使豬場(chǎng)相對(duì)穩(wěn)定，然后加強(qiáng)監(jiān)測(cè)力度，通過實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)、隔離淘汰陽(yáng)性豬。

預(yù)防飼料霉菌毒素的危害，做好免疫抑制性疫病的防控，定期檢測(cè)藍(lán)耳病與圓環(huán)病毒病的感染動(dòng)態(tài)。盡量減少試驗(yàn)以外因素的干擾，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。還要根據(jù)各階段豬的營(yíng)養(yǎng)需要，提供營(yíng)養(yǎng)均衡、適宜的飼料。