冠心寧注射液安全藥理學(xué)研究

程振田，袁祥萍，武文斌，李曉亮,溫成泉

(1.濰坊市益都中心醫(yī)院，山東 濰坊 262500；2.青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266011)

中藥注射劑是我國獨(dú)有的制劑品種，也是中醫(yī)藥的重大突破和中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容。中藥注射液質(zhì)量因受藥材質(zhì)量、制劑工藝、成分復(fù)雜等多種因素影響導(dǎo)致其安全性較化藥低[1]。近年來中藥注射劑不良反應(yīng)事件頻頻爆發(fā)，在社會上引起較大爭議，對于中藥注射液的去留問題爭議頗多。2009年，我國啟動了中藥注射劑安全性再評價專項(xiàng)行動，2017年將中藥注射液再評價工作列為深化藥品醫(yī)療器械審評審批制度改革的重點(diǎn)工作之一。冠心寧注射液在臨床上廣泛應(yīng)用，其不良反應(yīng)常見胃腸道反應(yīng)、發(fā)熱、煩躁等，少見心慌、呼吸困難、皮膚瘙癢等[2-3]。目前國內(nèi)外文獻(xiàn)未見冠心寧注射液安全藥理學(xué)相關(guān)研究報道，故本實(shí)驗(yàn)在藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范(GLP)條件下對冠心寧注射液進(jìn)行了安全藥理學(xué)研究，檢測冠心寧注射液對血壓、心電、呼吸和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響，為臨床應(yīng)用及不良反應(yīng)檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及環(huán)境 KM小鼠(20±1)g，SD大鼠(220±10)g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司[合格證號：SCXK(京)2016-0006]；Beagle犬(9±1)kg，購自北京日新科技有限公司[合格證號：SCXK(京)2016-0004]。

大小鼠飼養(yǎng)于SPF級動物房；Beagle犬飼養(yǎng)于普通級動物房，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(魯)2018 0031。

1.1.2 藥品與試劑 冠心寧注射液(石藥銀湖制藥有限公司，批號：20160521)；戊巴比妥鈉(Sigma公司，批號：18706)。

1.1.3 儀器 DSI植入式遙測系統(tǒng)(美國 DSI公司)；YLS-1A多功能小鼠自由活動記錄儀(山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院)；JY2001型電子天平(奧豪斯儀器常州有限公司)；金屬棒(直徑1.4 cm，高80 cm)，自制。

1.2 方法

1.2.1 劑量設(shè)計(jì)依據(jù) 根據(jù)藥物臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則確定劑量組別[4]。冠心寧注射液臨床用藥日最大劑量為40 mL，按照等效劑量折算系數(shù)計(jì)算小鼠等效劑量約為5.2 mL·kg-1，大鼠的等效劑量約為3.6 mL·kg-1，犬等效劑量為1 mL·kg-1。安全藥理學(xué)劑量設(shè)計(jì)一般應(yīng)設(shè)3個劑量組，至少包括或超過動物藥效學(xué)的有效劑量。故將等效劑量設(shè)計(jì)為低劑量，低劑量的2倍和4倍作為中劑量和高劑量，則設(shè)計(jì)犬安全藥理劑量為1.0、2.0、4.0 mL·kg-1，大鼠劑量為4、8、16 mL·kg-1，小鼠試驗(yàn)劑量為5、10、20 mL·kg-1。

1.2.2 犬安全藥理遙測實(shí)驗(yàn)[5]取健康Beagle犬4只，雌雄各2只，將DSI(data sciences international)遙測植入子手術(shù)植入建立生理信號遙測動物模型。試驗(yàn)分溶媒對照組、冠心寧注射液1、2、4 mL·kg-1高中低劑量組，采用雙4×4拉丁方給藥，同一只犬兩次給藥間隔為14 d。各組犬靜脈注射給予相應(yīng)濃度藥物溶液4 mL·kg-1，每次給藥前，打開植入子采集Beagle犬穩(wěn)定狀態(tài)下的生理信號作為自身藥前基礎(chǔ)值，給藥后連續(xù)記錄12 h內(nèi)生理信號。試驗(yàn)結(jié)束后，使用Ponemah軟件對血壓指標(biāo)包括收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均壓(MBP)，心電指標(biāo)包括HR、R波幅度、ST段幅度、T波幅度、PR間期、QRS間期、QT間期進(jìn)行采集。對每只動物對給藥前和給藥后5 min、15 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h時間點(diǎn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.2 呼吸系統(tǒng)影響實(shí)驗(yàn) 取大鼠40 只，雌雄各半，按體重均衡地分為4組，分別為溶媒對照組和冠心寧注射液4、8、16 mL·kg-13個劑量組，各組動物靜脈注射給予相應(yīng)的藥物溶液16 mL·kg-1，溶媒對照組給予等容積的生理鹽水。每只大鼠在給藥前60 min放入全身體積描記箱中進(jìn)行適應(yīng)及呼吸頻率、潮氣量、每分通氣量等基礎(chǔ)數(shù)據(jù)采集。給藥后將動物立即放回全身體積描計(jì)箱，并持續(xù)采集給藥后至少2 h的數(shù)據(jù)。

1.2.3 小鼠協(xié)調(diào)運(yùn)動和自主活動實(shí)驗(yàn)[6]取篩選合格雌雄小鼠各20只，按活動次數(shù)均衡地分為溶媒對照組和冠心寧注射液5、10、20 mL·kg-13個劑量組，各組動物靜脈注射給予相應(yīng)的藥物溶液20 mL·kg-1，溶媒對照組給予等容積的生理鹽水。每只小鼠給藥后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、3 h 放置于垂直豎立的光滑金屬棒頂部，使小鼠頭部向下，自然向下爬行，進(jìn)行協(xié)調(diào)運(yùn)動測試。協(xié)調(diào)運(yùn)動測試后的小鼠立刻放入小鼠自由活動箱中，每箱一只，記錄5 min 內(nèi)小鼠自主活動次數(shù)。

1.2.4 小鼠閾下劑量戊巴比妥催眠實(shí)驗(yàn)[7]小鼠分組給藥方法同“1.2.3”項(xiàng)下。每只小鼠給予相應(yīng)劑量的冠心寧注射液后15 min按體重腹腔注射0.3%戊巴比妥鈉溶液30 mg·kg-1。注射后立即開始觀察，記錄小鼠翻正反射消失時間和入睡數(shù)。如超過1 min則為發(fā)生睡眠，記錄15 min內(nèi)翻正反射消失超過1 min的小鼠數(shù)量。

2 結(jié)果

2.1 對Beagle犬血壓、心電指標(biāo)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與溶媒對照組比較，冠心寧注射液1、2、4 mL·kg-13個劑量組Beagle犬給藥后30 min內(nèi)血壓和心率緩慢降低，其中30 min時減低最顯著(P<0.05)，之后逐漸恢復(fù)，1 h后已無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。SBP、MBP、DBP、HR、R波幅度、ST段幅度、T波幅度、PR間期、QRS間期、QT間期等心電指標(biāo)均無明顯差異(P>0.05)。藥后30 min Beagle犬主要檢測指標(biāo)見表1和表2。

表1 冠心寧注射液單次給藥對Beagle犬血壓的影響

表2 冠心寧注射液單次給藥對Beagle犬心電的影響

2.2 對大鼠呼吸系統(tǒng)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與溶媒對照組比較，冠心寧注射液4、8、16 mL·kg-13個劑量組大鼠給藥后各個時間點(diǎn)呼吸頻率、潮氣量和每分通氣量無明顯變化(P>0.05)。藥后30 min的呼吸指標(biāo)見表3。

表3 冠心寧注射液對大鼠呼吸系統(tǒng)的影響

2.3 對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與溶媒對照組比較，冠心寧注射液5、10、20 mL·kg-13個劑量組小鼠給藥后15、30 min自主活動次數(shù)降低(P<0.05)，其余時間無明顯變化。對協(xié)調(diào)運(yùn)動等級和給藥后30 min睡眠率均無明顯差異(P>0.05)。藥后30 min小鼠自主活動次數(shù)、協(xié)調(diào)運(yùn)動等級及睡眠率見表4。

表4 冠心寧注射液對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響

3 討論

安全藥理學(xué)主要研究藥物在治療劑量及以上對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響[4]。目前一般采用DSI植入式遙測系統(tǒng)研究藥物對血壓和心電影響；用小鼠自主活動、協(xié)調(diào)運(yùn)動和閾下劑量戊巴比妥鈉催眠實(shí)驗(yàn)研究藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響；用大鼠全身體積描記系統(tǒng)研究藥物對呼吸系統(tǒng)的影響。本實(shí)驗(yàn)同樣采取以上實(shí)驗(yàn)研究了冠心寧注射液對三大系統(tǒng)的影響，結(jié)果顯示冠心寧注射液1、2、4 mL·kg-1劑量下可使Beagle犬在給藥后30 min內(nèi)血壓和心率逐漸降低，對心電其他指標(biāo)無明顯影響；在4、8、16 mL·kg-1劑量下對大鼠呼吸頻率、潮氣量和每分通氣量無明顯影響；在5、10、20 mL·kg-1劑量下可使小鼠在藥后15 min和30 min自主活動次數(shù)降低；而對小鼠的協(xié)調(diào)運(yùn)動等級和睡眠率無明顯影響。

冠心寧注射液是丹參和川芎提取物的復(fù)方制劑，具有活血化瘀、通脈養(yǎng)心之功效，對冠心病和心絞痛具有較好的療效[8]。丹參具有減慢心率、增強(qiáng)心肌的收縮力、擴(kuò)張冠脈并增加冠脈流量、降低血液黏度、抗凝血等作用[9]；而川芎的作用主要為擴(kuò)張血管、增加動脈血流量、抗血小板聚集、改善微循環(huán)等作用[10]。分析冠心寧注射液的減慢心率作用主要為丹參作用所致，而降低血壓作用主要為川芎擴(kuò)張血管所致，以上作用皆為其藥效作用，非毒性作用。而小鼠自主活動次數(shù)減少則可能為心率減慢和血壓降低后導(dǎo)致的。