磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內藥物動力學試驗

劉錦妮，王向茹，吳海港，姬萬民

[1.信陽農林學院 信陽市獸藥新制劑研發與創制工程技術研究中心,河南 信陽 464000；2.瑞普(天津)生物技術股份有限公司，天津 空港 300308]

淮南麻鴨因原產于信陽市淮河以南、大別山以北的廣大地區而得名，屬麻鴨類，中等體型，蛋肉兼用，具有適應性強、抗逆性強、耐粗飼、早熟、繁殖力強、生長快等特點，1986年經河南省地方優良畜禽品種編委會正式命名為淮南麻鴨，列入《河南省地方優良畜禽品種志》，是河南省重點保護的優良地方品種之一[1]?；前粪奏もc是獸醫臨床中廣泛使用的一種磺胺類抗菌藥物[2]，其具有在血液中有效藥物濃度高，與血清蛋白結合率低，易通過血腦屏障等優點，在獸醫臨床上主要用于治療由革蘭陽性及陰性菌等敏感細菌引起的腦膜炎、肺炎、子宮內膜炎以及禽巴氏桿菌病、雛雞白痢等[3]。目前，國內外對磺胺嘧啶鈉在多種動物體內的藥動學進行了研究，主要包括磺胺嘧啶鈉在豬、羊、牛、家禽、兔子、鴕鳥、歐洲鰻鱺等動物體內的藥動學、血漿蛋白結合率及生物利用度等內容[4-10]。然而由于磺胺類藥物在不同種屬動物體內的代謝情況存在明顯差異性，即使同一種磺胺藥物在不同種類動物體內代謝過程也有顯著的差異，目前磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內藥物動力學的研究還未見報道。因此本試驗通過分析磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內的藥物動力學特征，為獸醫臨床中的磺胺嘧啶鈉科學合理使用提供理論參考依據。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 磺胺嘧啶鈉(含量≥90%，批號:170814)，由河南自然康生物技術有限公司饋贈；磺胺嘧啶鈉標準品(98%，批號：2089190),購自上海晶抗生物工程有限公司；10%磺胺嘧啶鈉注射液(10%，批號：220381634),購自四川恒通動物藥業有限公司；三氯醋酸、亞硝酸鈉、氫氧化鈉(均為分析純)，均購自上海國藥集團化學試劑有限公司；氨基磺酸銨(分析純)，購自上海易恩化學技術有限公司；麝香草酚(分析純)，購自成都市科龍化工試劑廠。

1.2 儀器 紫外可見分光光度計：北京普析分析儀器有限公司；JY2002型電子天平：上海精密科學儀器有限公司。

1.3 動物分組、給藥與采樣

1.3.1 試驗動物 16只健康成年淮南麻鴨，100日齡左右，體重1.5～2.3 kg，雌雄各半，試驗前按常規飼養1周，飼喂不含抗菌藥物的全價日糧，自由飲水。

1.3.2 給藥 16只健康成年淮南麻鴨，隨機分成2組，每組8只，雌雄各半，其中一組于翼下靜脈緩慢注射單劑量100 mg/(kg·bw)磺胺嘧啶鈉注射液，另一組按100 mg/(kg·bw)進行口服給藥磺胺嘧啶鈉溶液。

1.3.3 血漿樣品采集 給藥后，剝離出翅下靜脈血管，分別于0.08、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12 h和24 h采血1 mL左右，置于已加入肝素鈉的離心管中，以3 000 r/min離心5 min，取上清液于-20 ℃保存待測。

1.4 血漿樣品的處理 取待測血樣0.6 mL加入到含有20%三氯乙酸2 mL的離心管中，充分搖勻，3 000 r/min 離心5 min；取上清液加入0.5%亞硝酸鈉0.5 mL，充分搖勻；再加入0.5%麝香草酚1 mL搖勻。于530 nm波長處進行檢測分析。

1.5 標準工作曲線 向6支10 mL具塞離心管中各加入0.6 mL空白血漿，添加適量磺胺嘧啶鈉標準工作液，使得的藥物濃度依次為5、10、20、50、100 μg/mL和200 μg/mL血漿樣品。按照血漿樣品處理方法處理后進行分析。以磺胺嘧啶鈉吸光度(A)為橫坐標，磺胺嘧啶鈉在樣品中的濃度(C)為縱坐標，建立標準曲線，求出回歸方程以及相關系數(r)。

1.6 方法學驗證 取空白血漿，添加適量磺胺嘧啶鈉標準液，配制成含磺胺嘧啶鈉濃度分別為100、20 μg/mL和5 μg/mL 的血漿樣品，按照血漿的處理方法處理分析，每個濃度設置3個樣品以測定日內變異系數，連續重復3 d以測定日間變異系數。

1.7 統計分析 藥物動力學模型采用3P97藥動學軟件進行擬合；藥時曲線圖和消除動態圖采用Excel軟件繪制；方法學驗證考察數據采用SPSS 18.0軟件分析處理。

2 結果

2.1 標準曲線及線性范圍 本試驗所建立的血漿標準工作曲線相關性好，線性范圍5～200 μg/mL，回歸方程C=180.8A-15.97，相關系數為0.990以上。

圖1 磺胺嘧啶鈉在血漿中標準曲線Fig.1 Calibration curve of SD-Na in plasma

2.2 方法學結果 參照1.5所描述的方法，在淮南麻鴨血漿中添加藥物，所測回收率及精密度數據見表1。采用本方法，磺胺嘧啶鈉血漿中的回收率為77.64%～90.03%，日內變異系數均小于5%，日間變異系數均小于10%，方法具有較好的精密度。

表1 淮南麻鴨空白血漿中添加磺胺嘧啶鈉的方法學考察結果Table 1 The result of method validation of SD-Na in Huainan patridge duck plasma (n=3)

2.3 藥物動力學數據分析 分別給淮南麻鴨以100 mg/(kg·bw)的劑量單次口灌和靜脈注射磺胺嘧啶鈉以后，血藥濃度的數據見表2，藥物在血漿中的藥-時曲線見圖2。經3P97藥動學軟件房室模型的模擬，其中有吸收二室模型的赤池信息量準則(AIC)和加權平方和(WSS)最小。所得的藥物動力學參數見表3，靜脈注射給藥后，其血藥濃度-時間數據均符合無吸收二室開放模型。其理論方程為C=52.91e-1.12t+72.86e-0.22t。該藥物經靜脈注射后分布很快，分布半衰期(t1/2α)為(0.62±0.08)h；消除半衰期(t1/2β)為(3.21±0.98)h；藥時曲線下面積(AUC)為(385.14±13.52) (μg/mL)·h；口服磺胺嘧啶鈉后其血藥濃度-時間數據均符合吸收二室開放模型，其理論方程為C=80.66e-0.15t+34.70e-0.10t-115.36e-0.48t。該藥物經口服后吸收迅速、分布快，分布半衰期(t1/2α)為(4.61±0.94)h；消除半衰期(t1/2β)為(6.66±0.74)h；藥時曲線下面積(AUC)為(395.06±24.03)(μg/mL)·h；達峰時間(Tp)為(3.71±0.84)h；峰濃度(Cmax)為(49.97±5.66)μg/mL。

表3 磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內的藥物動力學參數Table 3 Pharmacokinetic parameters of sulfadiazine sodium in Huainan patridge duck

表2 磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內的血藥濃度Table 2 SD concentrations in plasma following oral administration and intravenous injection in Huainan patridge duck plasma (n=8)

3 討論

目前針對磺胺嘧啶等磺胺類藥物分析方法主要有微生物法、免疫分析方法、分光光度法、酶聯免疫分析法及色譜法等，其中色譜法應用最為廣泛，而分光光度法則是一種較為成熟、快捷、高效的方法[11-13]。本試驗利用磺胺嘧啶鈉在酸性條件下能夠發生重氮化反應的特點，建立了分光光度法測定淮南麻鴨血漿中磺胺嘧啶鈉的含量，該方法測定方法簡便，重現性好，所建立的標準曲線相關性好，相關系數達0.990以上，平均回收率在75%以上；日內變異系數小于5%，日間變異系數小于10%，能夠滿足樣品檢測及分析的要求。

種屬不同等因素影響磺胺嘧啶的藥物動力學參數，文獻報道磺胺嘧啶鈉在不同動物體內的半衰期不同，其中在豬體內半衰期為0.5～0.8 h、綿羊體內的半衰期為4.03 h，狗為9.9 h，家禽類中的鵝為5.68 h、雞為4.5 h、鴨為5.88 h。而在歐洲鰻鱺體內的半衰期為104.27 h[14]。本試驗中靜脈注射和口服消除半衰期(t1/2β)分別為3.21 h和 6.66 h，和上述文獻報道存在一定差異，其原因可能是由物種間的差異、動物年齡、性別或營養狀況不同造成的。此外給藥途徑、制劑工藝等條件同樣會影響磺胺嘧啶鈉的藥物動力學參數，張曉曉等報道，單次口服復方磺胺嘧啶混懸液在肉雞體內的半衰期為3.82 h，參比制劑的半衰期為3.09 h[15]。而本試驗中不同給藥途徑，其藥物動力學參數也不相同，這可能和血漿蛋白結合率及腎小管重吸收有關。此外文獻中報道磺胺類藥動學研究多為一室開放模型[16]。本試驗中磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內血藥濃度-時間數據符合二室開放模型，其中靜脈給藥為無吸收二室開放模型，口服給藥為有吸收二室開放模型，這同樣表明磺胺嘧啶鈉的動力學模型對動物有種屬差異和分布差異。