雛土雞肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌混合感染的診治

徐海軍，白雪梅，左瑞華，張圣堯，王廣林

(1.皖西學院 健康養殖與動物疫病監測預警工程技術中心，安徽 六安 237012；2.安徽金豐源畜牧科技有限公司，安徽 六安 237010；3.皖西學院分析測試中心，安徽 六安 237012)

近年來，我國優質土雞的飼養規模不斷擴大，成為農村新的經濟增長點。然而土雞由于采用開放飼養的養殖方式，非常容易受到環境中各種病原的侵害，嚴重阻礙了土雞養殖產業的健康發展。肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌是2種人獸共患的條件性致病菌，其在土雞身上的混合感染尚未見報道。本文報告了1例雛土雞肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌混合感染的病原鑒定和診治過程。

1 材料與方法

1.1 試劑和藥品 胰大豆蛋白胨瓊脂，購自北京奧博星生物技術有限責任公司；細菌藥敏試紙片，購自杭州微生物試劑有限公司；革蘭染色液，購自杭州天和微生物試劑有限公司；革蘭陰性菌和革蘭陽性菌檢測卡，購自法國梅里埃診斷產品(上海)有限公司；2.5%獸用恩諾沙星可溶性粉，購自鄭州世農獸藥有限公司。

1.2 病樣來源 2018年9月22日，淮南市壽縣保義鎮某土雞養殖戶送檢3只雛土雞(1只死亡，2只存活)。

1.3 方法

1.3.1 病史調查 通過詢問養殖戶，對整個發病過程進行調查。

1.3.2 臨床癥狀和病理剖檢觀察 觀察送檢存活病雞的臨床癥狀，然后進行剖檢，觀察病變。

1.3.3 細菌分離、鑒定 剖檢時無菌采集2只存活病雞的肝臟組織，涂布接種于胰大豆蛋白胨瓊脂平板，37 ℃培養18 h。對分離菌進行革蘭染色鏡檢，并用VITEK 2 Compact全自動微生物分析儀細菌學專家系統進行鑒定。

1.3.4 藥敏試驗 采用紙片法對分離菌進行藥敏試驗。藥敏試驗結果判斷標準：抑菌圈的直徑在20 mm以上時為極敏；直徑在15～20 mm為高敏；直徑在10～14 mm為中敏；直徑在10 mm以下時為低敏；直徑為0 mm時為耐藥。

1.3.5 防治措施 根據藥敏試驗結果選擇敏感藥物對土雞群進行治療，對病土雞進行隔離治療，同時對雞舍和周邊環境做好消毒。

2 結果

2.1 病史調查 該養殖戶飼養了5 000只土雞，發病時約1月齡。在送檢時已發病2 d，發病第1天有10多只發萎，3只死亡；發病第2天時死亡增加至5只，發萎雞數量也增加。

2.2 臨床癥狀和病理剖檢 送檢存活的病雞發蔫，縮頭蜷臥，雙翅下垂，閉眼，肛門周邊羽毛有黃綠色糞便污染。剖檢的主要病變包括肝腫脹，表面有少量出血點或不規則的黃綠色壞死灶；膽囊腫大，膽汁濃稠；腸道有點狀或條塊狀出血；胸腺表面有出血點；盲腸扁桃體出血；腎臟稍腫大，輸尿管充盈尿酸鹽；肺呈暗紅色、淤血；肌胃內容物常為綠色，嗉囊內有少量積液。

2.3 細菌分離、鑒定 從2只病雞的肝臟中均分離出2種細菌，其中細菌1菌落呈圓形、邊緣整齊、灰白色、不透明、隆起、表面濕潤、直徑約1mm，局部形成灰白色菌苔；細菌2分布于細菌1周圍，呈淺灰色、半透明、遷徙生長的菌苔，長滿整個平板。用接種環挑取單個細菌1的菌落用劃線法進行純化培養，由于細菌1和細菌2在初次分離時呈混合生長，所以經過6次純化，并且縮短培養時間至10 h，才最終獲得細菌1的單菌落。細菌2純化時由于其具有遷徙生長的特點，因此始終沒有獲得單菌落。

將細菌1和細菌2涂片、革蘭染色后鏡檢，發現兩者均為革蘭陰性菌(見中插彩版圖1和圖2)。其中，細菌1呈卵圓形或球桿狀，單個散在或兩兩相連，有莢膜；細菌2兩端鈍圓，呈單個或成對的球狀、球桿狀、長絲狀或短鏈狀的多形性桿菌，以桿狀為主，多單在。經VITEK 2 Compact全自動微生物分析儀細菌學專家系統鑒定，細菌1為肺炎克雷伯菌(正確率為98 %)，細菌2為奇異變形桿菌(正確率為99 %)。

2.4 藥敏試驗 對2種菌分別進行藥敏試驗，結果見表1。從表1可見，肺炎克雷伯菌對頭孢拉定極敏，對氧氟沙星、磷霉素、丁胺卡那霉素高敏，對強力霉素、多黏菌素中敏，對氟苯尼考耐藥。奇異變形桿菌對氧氟沙星、磷霉素極敏，對丁胺卡那霉素、頭孢拉定高敏，對氟苯尼考低敏，對強力霉素和多黏菌素耐藥。

表1 藥敏試驗結果

2.5 治療方法 根據藥敏試驗結果，選擇氧氟沙星的同類藥物恩諾沙星(因為獸用氧氟沙星自2016年12月31日起，停止經營、使用于食品動物)作為治療藥物，按使用說明，每1 L水用本品2 g，2次/d，飲水給藥，連用4 d。1周后回訪得知用藥后已控制病情，雞群恢復正常。

3 討論

肺炎克雷伯菌是一類廣泛分布于人和動物皮膚、呼吸道、消化道等部位及環境中的重要條件致病菌，可以引起人和動物的多種感染[1-5]。有學者認為肺炎克雷伯菌已成為僅次于大腸桿菌、綠膿桿菌，引起感染死亡率較高的條件致病菌[6]。我國關于雞感染肺炎克雷伯菌的報道還較少[7-9]，這可能與臨床上一般很少對病原菌進行鑒定有關，導致一些疾病治愈后也未能確診病原。肺炎克雷伯菌感染動物后可引起肺炎、腸炎、子宮炎、腹膜炎，甚至引起敗血癥[9-10]，可見其引起的癥狀和病變十分廣泛，缺乏特異性，這給基層獸醫對該病的確診帶來了一定的困難。

奇異變形桿菌廣泛分布于自然界及人與動物的體表，也是一種較常見的人獸共患條件致病菌。雞奇異變形桿菌病是近些年來國內新發現的一種急性熱性細菌性傳染病[11-15]。本病的特征是呼吸困難、咳嗽、體溫升高、腹瀉，病雞主要表現為菌血癥、敗血癥，一側性或兩側性癱瘓或水樣腹瀉，各種日齡的雞群都可感染本病，但以7周齡以下的雛雞最易感[15]。奇異變形桿菌用常規培養方法很難獲得單個菌落，但在含 0.1%石碳酸或 0.4%硼酸的培養基上，該菌遷徙生長受到抑制，可形成單個菌落[14]。

本病例中，肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌發生混合感染，尚未見類似報道。2種菌混合感染也加劇了臨床癥狀和病變的復雜性，單純通過流行病學、臨床癥狀和剖檢病變難以作出確診，必須通過細菌分離和鑒定才能獲得確診。由于這2種菌廣泛存在于環境中，甚至也存在于動物(包括人)機體中，對它們的危害應引起足夠重視。孫秋艷等(2006年)對來自于河南、安徽、山東、廣西等省的雞血清進行了流行病學調查，結果表明，奇異變形桿菌抗體陽性率普遍較高[12]。由于這2種菌感染后缺乏特異性的臨床癥狀和病變，而基層獸醫一般缺少細菌分離鑒定的條件，因此，這2種病的實際發生率可能遠遠高于人們的現有認識。研制這2種細菌感染的快速診斷方法，對于臨床正確診斷和評估這2種細菌病的流行情況有重要作用。