疫情無情 保種不停—記荷包豬遺傳材料采集工作

文│宋恒元（遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司）

張寶生 于哲（凌源禾豐牧業有限責任公司）

非洲豬瘟疫情發生后，國家高度重視地方豬遺傳資源保護工作，先后出臺了《國務院辦公廳關于加強農業種質資源保護與利用的意見》，印發了《農業農村部辦公廳關于加強地方豬遺傳資源保護工作的通知》，制定了《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》，要求加大地方品種收集力度，應保盡保，確保地方豬遺傳資源不喪失。

荷包豬是遼西山區一帶自然形成的原始優良地方品種，具有性成熟早、繁殖力高、抗逆性強、耐粗飼的優良特性，是我國寶貴的地方良種資源，已被列入《國家畜禽品種資源保護名錄》。筆者團隊承擔了荷包豬的遺傳資源保護工作，在接到任務后按照相關要求，積極開展推進遺傳材料采集制作工作，項目得到相關單位的多方支持與協助，在冷凍精液的遠距離跨區協作上進行了一些有益探索，并取得初步進展。

一、領導重視，部門支持

遼寧省現代農業生產基地建設工程中心（以下簡稱“省農業工程中心”）是項目承擔企業的上級領導單位，省農業工程中心黨組對該項工作非常重視。項目意向下達后，省農業工程中心和遼寧省畜牧部門領導第一時間分別與遼寧省農業發展服務中心及所屬單位遼寧省動物疫病預防控制中心溝通協調，最后達成一致意見，將荷包豬遺傳材料采集制作所要進行的病原檢測，列入遼寧省秋季豬疫病監測項目，既解決了荷包豬遺傳材料采集制作疫病檢測問題，又解決了項目經費不足的問題，使項目得以按計劃正常運行。項目資金到位后，召開了省農業工程中心黨組會，就項目的實施方案、進度和資金使用進行專門研究，形成會議紀要，并把項目作為2020年度的重點工作來抓。

二、任務分工，多方協作

項目承擔單位按照省農業工程中心要求，積極與相關協作單位就疫病監測、遺傳材料制作、供體物品籌措等具體細節問題進行協商，做好遺傳材料采集制作的前期準備工作。項目承擔單位負責方案制定、疫病監測協調、人員培訓、耗材采購、采集制作單位聯系詢價、簽訂技術服務合同、精液運送、遺傳材料入庫和數據收集與上報等工作。

凌源禾豐牧業有限責任公司荷包豬保種場負責種公豬飼養管理與調教、采精訓練、采精與精液稀釋、疫病監測采樣送檢、耳組織和糞便采集、供體豬系譜、測定數據和照片等工作。北京田園奧瑞生物科技有限公司負責荷包豬冷凍精液生產制作和保存工作。錦州醫科大學畜牧獸醫學院負責荷包豬體細胞采集培養制作工作。真正做到專業事交給專業人做，發揮各個方面的人員優勢，爭取高質量完成上級領導機關交付的工作。

三、做好技術培訓，嚴格經費管理

在正式開展遺傳材料采集制作工作前，承擔單位對參與項目的所有實際操作人員進行技術培訓，保證人員熟練掌握操作規程和技術規范要求，同時開展預試驗，保證項目實施效果。省農業工程中心計劃財務部負責資金使用把關，嚴格按照預算支出，專款專用。

四、做好種豬疫病防控，穩妥推進項目實施

2019年12月，遼寧省西部地區出現非洲豬瘟疑似病例，省市政府行政主管部門要求生豬養殖場采取嚴格的防控措施，保障豬場安全。凌源禾豐牧業有限責任公司荷包豬保種場位于該區域內，為了確保荷包豬保種場防疫安全，該場采取了嚴格的封鎖隔離措施，所有外部人員、器材設備絕不允許進入場區，打破了原計劃于2019年12月開始的制作冷凍精液和體細胞工作，從而影響了項目正常實施進度。2020年1月下旬，鑒于當地非洲豬瘟疫情形勢，為了解決問題，經過與保種場領導溝通，采取“一分為二、分群保種”管理模式，將核心群公母豬按照血統一分為二，將復制群種豬飼養于相距10千米外的獨立豬場，待春節后利用復制群的種豬開展遺傳材料采集制作工作，最大限度規避由于工作而帶來的疫情風險。

五、做好新冠肺炎疫情防控，加快復工復產步伐

原計劃春節后北京田園奧瑞生物科技有限公司到保種場現場制作荷包豬冷凍精液，由于新冠肺炎疫情的影響這項工作不能正常進行，這種情況一直持續到2020年3月末。進入4月，盡管新冠肺炎疫情防控形勢有所好轉，人員流動逐漸放開，但是北京地區疫情防控形勢依然嚴峻，尤其是跨省人員流動管控非常嚴格，給工作帶來較大障礙。為及早完成冷凍精液制作工作，經上級主管部門—新冠肺炎疫情防控領導小組研究同意，筆者團隊采取特事特辦的工作思路，與冷凍精液生產企業協商，采取鮮精遠距離運送，冷凍精液實驗室固定生產的辦法，既滿足了新冠肺炎疫情防控要求，同時也加快了復工復產的步伐。體細胞、耳組織、新鮮糞便采集制作也陸續開展，為了搶進度，筆者團隊采取了遺傳材料采集制作與病原檢測同步進行，待檢測報告出來后決定留存個體遺傳材料的方法。

六、注重細節，保障安全

凌源禾豐牧業有限責任公司荷包豬保種場按照冷凍精液生產企業的技術要求、注意事項和提供的冷凍精液試劑進行采精、稀釋、分裝，由專車連夜行駛4小時送至350千米外的冷凍精液實驗室，使得從采精到凍精制作不超過20小時，保證凍前活力≥85%，當天順利完成冷凍精液制作。精液經液氮環境保存3天后解凍檢測，活力達到52.3%～81.1%，效果喜人。為了做好各方人員對新冠肺炎疫情的防控，采精、運輸、制作三方人員互不接觸，并全程戴口罩，設備嚴格消毒。運輸車輛配備兩名司機，接到鮮精后輪流開車，同時接受新冠肺炎疫情防控監測點的體溫檢查，中途不在飯堂用餐，避免交叉感染。有了此次成功經驗，下一步預計每隔7～10天采精一次，約需7次可以生產近8000支0.5毫升規格細管的冷凍精液，滿足保種要求。

七、豬冷凍精液生產過程簡析

盡管受到非洲豬瘟疫情以及新冠肺炎疫情雙重壓力影響，但筆者團隊保種工作一直沒有停下腳步，精液順利送到完成交接后，由北京田園奧瑞生物科技有限公司豬冷凍精液生產實驗室（唐山玉田站）實施后續的豬冷凍精液生產工作。

1.精液質量檢測與分析。對送到的精液質量使用精子質量分析系統盡快做出分析判斷，并做好相關記錄工作，如檢測精液活力、精子密度、采精量等，決定精液是否合格，能否繼續下一步的流程以備后續查詢比對。

2.精液降溫。采用17℃恒溫箱運輸，用溫度計監測精液溫度，為離心工作做準備。

3.精液離心。使用豬凍精專用離心機在17℃的環境下對豬精液進行離心工作，去掉上清液留下需要的富含精子部分。

4.加入冷凍保護試劑。加入配制好的冷凍試劑I液，使精子重新懸浮，給精子提供營養物質以及為冷凍保護做好基礎工作。

5.精液低溫平衡。把加入冷凍試劑I液的精液放入平衡儀中，按照設定好的降溫時間和速率降到4℃。

6.精液灌裝。平衡好的精液在低溫操作柜中完成冷凍試劑II液的添加，并使用細管灌裝封口一體機完成精液的灌裝，將灌裝好的精液細管碼放到冷凍儀細管托架上。

7.程序冷凍。載有精液細管的托架放入準備好的程序冷凍儀中，用電腦程序軟件控制降溫溫度、降溫速度和降溫時間，細管精液按照指定溫度曲線完成降溫。

8.凍精保存。制作好的冷凍精液經檢測合格后放入液氮罐長久保存，定時添加液氮，保證冷凍精液安全。

地方豬保種大多采用本交方式，采精困難。凌源禾豐牧業有限責任公司荷包豬保種場技術人員克服困難，采用發情母豬完成地方豬精液采集工作。由于不是規律采精，精液質量偏差較大，地方豬品種可用公豬選擇余地較小，筆者團隊在精液活力低、密度低的情況下積極做好了地方豬保種工作。