大腸桿菌O157∶H7的風險監測

文│韓海燕 蔡擴軍（新疆維吾爾自治區烏魯木齊市動物疾病控制與診斷中心）

王承（新疆維吾爾自治區獸藥飼料監察所）

大腸桿菌O157∶H7血清型是腸出血性大腸桿菌的代表菌株，為革蘭氏染色陰性菌，具有較強的耐酸性，可產生大量的Vero毒素，是主要的致病因子，能引起人的出血性腹瀉和腸炎，患者大多數急性起病，嚴重的感染者一周后可發生溶血性尿毒綜合征，并可出現竇性心動過緩、驚厥和血小板減少性紫癜等并發癥，可導致死亡。該病多發生于夏秋兩季，主要以散發性為主。大腸桿菌O157∶H7的攜帶者可能是海鷗、羊、豬、馬、鹿、鴿子、牛、雞等動物，畜禽肉食品供應鏈中牛肉是主要的傳播載體。

為了解大腸桿菌O157∶H7在新疆維吾爾自治區烏魯木齊地區畜禽肉供應鏈中的存在風險，本研究用熒光PCR方法對畜禽肉供應鏈的肉品以及環境拭子中的大腸桿菌O157∶H7進行監測，以期為保障本地區畜禽肉食品安全提供技術支撐。

一、材料與方法

1.主要試劑。大腸桿菌O157∶H7熒光PCR檢測試劑盒；細菌基因組DNA提取試劑盒；改良EC肉湯。

2.主要儀器。熒光PCR儀（ABI 7500型）；全自動核酸提取儀；II級生物安全柜；恒溫培養箱；高壓滅菌器。

◎圖1 熒光PCR檢測結果

3.取樣環節及數量。畜禽肉供應鏈的五大環節一共取樣量588份，各個環節取樣數量見表1。

二、實驗室檢驗

1.增菌。將肉類樣品（100克）放入一次性培養皿，用彎剪和鑷子取樣品的中間和四周，剪碎，取25克樣品加入到含有225毫升EC肉湯增菌液的均質袋中，于（36±1）℃培養18～24小時。

表1 各個環節取樣數量表 份

取環境拭子或糞便樣品時，提前將6毫升EC肉湯在無菌操作臺內分裝至離心管。在采樣地點，將離心管蓋子快速打開，將涂抹好的環境拭子或糞便快速放入，蓋上蓋子，運輸至實驗室后在（36±1）℃培養箱內培養18～24小時。

2.熒光PCR檢驗。取1～5毫升菌液，按照細菌基因組DNA提取試劑盒說明書提取細菌基因組DNA作為模板，根據大腸桿菌O157∶H7熒光PCR試劑盒說明書對DNA模板進行PCR擴增，并對結果進行判定。

三、檢驗結果

經熒光PCR檢測，588份樣品中均未檢出大腸桿菌O157：H7。說明在此次檢測過程中所取樣品未發現受大腸桿菌O157：H7污染。

四、結論

所取的588份樣品均未檢出大腸桿菌O157：H7，說明目前該地區在養殖、屠宰、運輸、貯存、銷售等環節上大腸桿菌O157：H7污染的風險較低。但是有其他省市分離鑒定出大腸桿菌O157：H7相關文獻報道，鑒于大腸桿菌O157：H7的對食品安全造成的危害性較大，需要密切關注。在實地研究過程中發現，屠宰環節是畜禽肉供應鏈中食源性病原微生物污染風險最高的環節，如果操作不規范很容易造成細菌的交叉污染，相關部門和企業應加強對畜禽肉供應鏈涉及人員的宣傳培訓。同時，建議有關部門建立畜禽交易市場、農貿市場、超市的清洗消毒規范，尤其對畜禽肉類直接接觸的環境和物品進行規范的清洗和消毒，減少食源性病原微生物傳播的概率。