Cu(Ⅰ)-新亞銅試劑分光光度法間接測定硫普羅寧腸溶膠囊中硫普羅寧

(嘉應(yīng)學(xué)院 化學(xué)與環(huán)境學(xué)院，梅州 514015)

硫普羅寧化學(xué)名稱為N-(2-巰基丙酰基)-甘氨酸(結(jié)構(gòu)如圖1)，是一種含有巰基的甘氨酸衍生物，其主要通過側(cè)鏈具有游離活性的巰基對肝臟細胞進行保護，臨床上廣泛用于肝臟疾病的治療[1]。此外，硫普羅寧還能用于治療老年早期白內(nèi)障和玻璃體混濁[2]。但過量服用硫普羅寧會引起胃不適、味覺喪失等不良反應(yīng)[3]。因此，硫普羅寧含量的測定對于生命科學(xué)具有重要意義。

圖1 硫普羅寧分子結(jié)構(gòu)Fig.1 Molecular structure of tropronin

目前，測定硫普羅寧含量的標準方法[WS1-(X-054)－2002]為滴定法，其他主要測定方法包括分光光度法[4-6]、高效液相色譜法[7-9]、液相色譜-質(zhì)譜法[10-11]、氣相色譜-質(zhì)譜法[12]、拉曼光譜法[13]和流動注射光度法[14]等，與分光光度法相比，其他方法可能存在操作復(fù)雜、選擇性較差或儀器價格昂貴等缺點。

本工作通過試驗發(fā)現(xiàn)，硫普羅寧中的巰基(－SH)能將Cu2＋定量還原為Cu(Ⅰ)，而Cu(Ⅰ)能與2，9-二甲基-1，10-二氮菲(新亞銅試劑)形成黃色絡(luò)合物，通過測定絡(luò)合物的吸光度可間接測定硫普羅寧的含量，據(jù)此建立了Cu(Ⅰ)-新亞銅試劑分光光度法測定硫普羅寧含量的方法，以期為藥物中硫普羅寧含量的測定提供技術(shù)參考。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

島津UV-2401 型紫外可見分光光度計;722s型可見分光光度計。

硫普羅寧標準溶液:100.0 mg·L－1，稱取0.010 g硫普羅寧(分析純)，用水溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水定容，搖勻，置于4 ℃冰箱中避光保存，于48 h內(nèi)使用。其他所需質(zhì)量濃度均由此溶液稀釋制得，現(xiàn)配現(xiàn)用。

Cu2＋溶液:200.0 mg·L－1，稱取0.078 6 g五水合硫酸銅于100 mL 的燒杯中，用水溶解，加入3 mol·L－1硫酸溶液2.00 mL，轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

新亞銅試劑溶液:0.010 0 mol·L－1。

硫普羅寧腸溶膠囊(標示值200 mg·粒－1)。

乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH 4.8)。

所用試劑均為分析純;試驗用水為二次蒸餾水。

1.2 試驗方法

取出5粒硫普羅寧腸溶膠囊內(nèi)的藥粉并混合均勻，稱取0.2 g，用水溶解并定容至500.0 mL，得到硫普羅寧樣品溶液。在25 mL 比色管中加入硫普羅寧樣品溶液2.00 mL，再加入0.0100 mol·L－1新亞銅試劑溶液1.00 mL，水10.00 mL，搖勻，加入200.0 mg·L－1Cu2＋溶液1.00 mL，p H 4.8的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液4.00 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，在室溫中放置10 min。

同時做試劑空白。用1 cm 比色皿在分析波長為456 nm 處測量此反應(yīng)體系的吸光度A，以試劑空白作參比。

2 結(jié)果與討論

2.1 分析波長的選擇

以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了此反應(yīng)體系在波長為400～600 nm時的吸收曲線，結(jié)果見圖2。

圖2 反應(yīng)體系的吸收曲線Fig.2 Absorption curve of reaction system

由圖2 可知，反應(yīng)體系的最大吸收波長為456 nm，因此，試驗選擇分析波長為456 nm。

2.2 反應(yīng)溫度的選擇

以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了反應(yīng)溫度分別為20，30，40，50，60，70，80，90 ℃時對反應(yīng)體系吸光度的影響。結(jié)果表明:反應(yīng)溫度為20～80 ℃時，吸光度基本穩(wěn)定。試驗選擇反應(yīng)溫度為室溫。

2.3 反應(yīng)時間的選擇

以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了反應(yīng)時間分別為5，10，20，30，40，50，60，90，120 min 時對反應(yīng)體系吸光度的影響。結(jié)果表明，吸光度在選擇的反應(yīng)時間內(nèi)基本不變，綜合考慮，試驗選擇反應(yīng)時間為10 min。

2.4 緩沖溶液酸度的選擇

以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了乙酸-乙酸鈉緩沖溶液的pH 分別為3.6，4.0，4.4，4.8，5.0，5.2，5.6時對反應(yīng)體系吸光度的影響。結(jié)果表明，吸光度在pH 為3.6～5.6時基本不變。綜合考慮，試驗選取緩沖溶液的pH 為4.8。

2.5 緩沖溶液用量的選擇

以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了乙酸-乙酸鈉緩沖溶液的用量分別為0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，7.00，8.00，9.00 mL時對反應(yīng)體系吸光度的影響。結(jié)果表明，吸光度在緩沖溶液用量為3.00～9.00 mL時有較大值且基本不變。綜合考慮，試驗選取緩沖溶液的用量為4.00 mL。

2.6 Cu2＋溶液用量的選擇

以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了Cu2＋溶液的用量分別為0.50，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00，2.20，2.40，2.60 mL時 對反應(yīng)體系吸光度的影響。結(jié)果表明，吸光度在所選擇的Cu2＋溶液用量范圍內(nèi)基本不變。綜合考慮，試驗選擇Cu2＋溶液的用量為1.00 mL。

2.7 新亞銅試劑溶液用量的選擇

以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了新亞銅試劑溶液用量分別為0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00 mL時對反應(yīng)體系吸光度的影響，結(jié)果見圖3。

圖3 新亞銅試劑溶液用量對吸光度的影響Fig.3 Effect of amount of neocuproine solution on absorbance

由圖3可知:反應(yīng)體系吸光度在新亞銅試劑溶液用量為0.60～2.00 mL 時基本不變。綜合考慮，試驗選擇新亞銅試劑溶液用量為1.00 mL。

2.8 共存物質(zhì)的影響

選取了對本方法可能造成干擾的葡萄糖、蔗糖、D-果糖、L-谷氨酸、DL-蘋果酸、L-絲氨酸、L-腈氨酸、L-精氨酸、D-甘露醇、淀粉、乳糖等11種物質(zhì)進行試驗，相對誤差需控制在±5% 以內(nèi)。以100.0 mg·L－1硫普羅寧標準溶液為分析對象，試驗考察了以上11種共存物質(zhì)對反應(yīng)體系吸光度的影響。結(jié)果表明:1 000倍的葡萄糖、蔗糖、D-果糖、L-谷氨酸、DL-蘋果酸、L-絲氨酸、L-腈氨酸，100倍的L-精氨酸、D-甘露醇，200倍的淀粉，500倍的乳糖對硫普羅寧的測定無干擾。

2.9 標準曲線和檢出限

按照試驗方法對0.800 0，1.600，2.400，3.200，4.000，4.800，5.600，6.400，7.200，8.000，8.800，9.600，10.40，11.20，12.00，12.80，13.60，14.40，15.20，16.00，16.80，17.60，18.40，19.20，20.00 mg·L－1標準溶液系列進行測定，以硫普羅寧的質(zhì)量濃度為橫坐標，其對應(yīng)的吸光度為縱坐標繪制標準曲線。硫普羅寧的質(zhì)量濃度在0.800 0～20.00 mg·L－1內(nèi)符合朗伯-比爾定律，摩爾吸光系數(shù)(ε)為8.7×103L·mol－1·cm－1，線性回歸方程為y＝0.042 01x＋0.005 4，相關(guān)系數(shù)0.999 8。

按照試驗方法對試劑空白進行11次平行測定，以3倍測定值的標準偏差(s)和標準曲線斜率(k)的比值計算得檢出限(3s/k)，以10s/k計算測定下限，檢出限和測定下限分別為0.057，0.19 mg·L－1。

2.10 精密度和準確度試驗

按照試驗方法測定硫普羅寧腸溶膠囊中硫普羅寧的含量，平行測定5 次，平均測定值為200.31 mg·粒－1，與標示值(200 mg·粒－1)相符，且與國家藥品標準方法[WS1-(X-054)－2002]分析結(jié)果(198.05 mg·粒－1)結(jié)果基本吻合;測定值的相對標準偏差(RSD)為0.20%。

2.11 回收試驗

按照試驗方法對硫普羅寧腸溶膠囊進行加標回收試驗，并計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收試驗結(jié)果Tab.1 Results of test for recovery

本工作建立了Cu(Ⅰ)-新亞銅試劑光度法測定硫普羅寧腸溶膠囊中硫普羅寧含量的方法，該方法設(shè)備簡單、樣品無需特殊前處理，操作便捷、靈敏度高、選擇性好，其測定結(jié)果與標準方法的相近，具有一定的實用價值。

致謝：本工作是在嘉應(yīng)學(xué)院化學(xué)與環(huán)境學(xué)院溫欣榮老師指導(dǎo)下完成的，在此深表謝意。