聯(lián)合檢測(cè)血清中長(zhǎng)鏈非編碼RNA Loc344887、GAS5、Linc00152對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值

張保友，史 建,王海龍,張貢獻(xiàn),孔勁松,汪國(guó)文

(宿州市第一人民醫(yī)院:1.胸外科;2.呼吸內(nèi)科;3.腫瘤內(nèi)科,安徽宿州 234000; 4.蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外科,安徽蚌埠 233004)

在全球預(yù)計(jì)癌癥死亡人數(shù)中，肺癌占男性患者死亡人數(shù)的29%，女性患者死亡人數(shù)的26%，在中國(guó)與癌癥相關(guān)的病死率方面位居首位[1]。肺癌的主要類型是小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)[2]。盡管傳統(tǒng)療法和新療法取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但NSCLC患者的總體生存率仍然很差，因?yàn)榇蠖鄶?shù)患者是在腫瘤轉(zhuǎn)移后才被診斷。因此，NSCLC的早期診斷十分必要。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)是非編碼RNA家族的重要新成員，其長(zhǎng)度超過200 bp[3]。據(jù)報(bào)道，越來越多的LncRNA在癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用[4]。此外，最近的研究證實(shí)，LncRNA的失調(diào)與各種腫瘤(如胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和NSCLC)的診斷和預(yù)后相關(guān)[5]。但是，大多數(shù)LncRNA的詳細(xì)生物學(xué)作用仍然未知。NSCLC患者血清中失調(diào)的LncRNA(Loc 344887[6]、GAS5[7]、Linc00152[8])作用已確定，但是LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152在早期NSCLC中的診斷價(jià)值仍然未知?；诖?，本研究旨在探討聯(lián)合檢測(cè)LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年12月至2019年12月宿州市第一人民醫(yī)院和蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院(后簡(jiǎn)稱“兩所醫(yī)院”)收治的早期NSCLC患者90例納入腫瘤組；其中男58例，女32例；年齡46～79歲，平均(56.21±23.40)歲；腫瘤直徑0.8～6.6 cm，平均(2.39±1.64)cm；分型：腺癌46例，鱗癌44例；TNM分期：Ⅰ期78例，Ⅱ期12例。另選擇同期兩所醫(yī)院收治的肺部良性疾病患者90例納入良性組；其中男45例，女45例；年齡39～77歲，平均(56.54±24.92)歲；其中肺結(jié)核77例，肺炎13例。90例早期NSCLC患者和90例肺部良性疾病患者均經(jīng)兩所醫(yī)院病理科證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)嚴(yán)重心、肝、腎功能損害者；(2)長(zhǎng)期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者；(3)患有精神疾病者；(4)患有其他癌癥者。同時(shí)選取同期兩所醫(yī)院體檢的體檢健康者90例納入對(duì)照組；其中男45例，女45例；年齡42～79歲，平均(56.32±22.44)歲。腫瘤組和良性組受試人員性別、年齡和吸煙史比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1，具有可比性。本研究經(jīng)兩所醫(yī)院倫理委員會(huì)研究通過，所有受試者均已簽署知情同意書。

1.2RNA的提取與實(shí)時(shí)熒光定量PCR 采集對(duì)照組人群、未治療的腫瘤組、良性組患者肘靜脈血5 mL。使用北京源暢致和生物科技有限公司的RNA提取試劑盒(RNA simple總RNA提取試劑盒，貨號(hào)：dp419)進(jìn)行總RNA提取。使用微克特銳生物科技(武漢)有限公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號(hào)：K1622)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。使用廣州鋮銨生物科技有限公司的SYBR green(貨號(hào)：AQ140-01)進(jìn)行LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152相對(duì)水平的檢測(cè)。所有反應(yīng)設(shè)置兩組重復(fù)試驗(yàn)，取中間值以2-ΔΔCt進(jìn)行mRNA相對(duì)水平的計(jì)算。

表1 一般臨床資料在腫瘤組和良性組患者間的比較

2 結(jié) 果

2.13組受試人員血清LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152相對(duì)表達(dá)水平比較 腫瘤組、良性組和對(duì)照組血清LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152的相對(duì)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 3組受試人員血清LncRNA Loc344887、GAS5、 Linc00152的相對(duì)表達(dá)水平比較

2.2LncRNA鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者的ROC曲線相關(guān)參數(shù) 為了評(píng)估血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152在鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者中的診斷價(jià)值，繪制ROC曲線。LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者的ROC曲線相關(guān)參數(shù)見表3。

2.3LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152鑒別早期NSCLC患者與體檢健康者的ROC曲線相關(guān)參數(shù) 為了評(píng)估血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152在早期NSCLC患者與體檢健康者中的診斷價(jià)值，通過軟件繪制ROC曲線。LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152鑒別早期NSCLC患者與體檢健康者的ROC曲線相關(guān)參數(shù)見表4。

表3 LncRNA鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者的ROC曲線相關(guān)參數(shù)

表4 LncRNA鑒別早期NSCLC患者與體檢健康者的ROC曲線相關(guān)參數(shù)

2.4LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152對(duì)NSCLC的聯(lián)合診斷 以Loc344887的陽(yáng)性臨界值1.914、GAS5的陽(yáng)性臨界值0.620、Linc00152的陽(yáng)性臨界值1.868為診斷閾值，三者均滿足為聯(lián)合診斷陽(yáng)性，反之則為聯(lián)合診斷陰性?；加性缙贜SCLC的為真陽(yáng)性，未患有早期NSCLC的為真陰性。采用以上標(biāo)準(zhǔn)對(duì)兩所醫(yī)院就診的324例肺部疾病患者進(jìn)行聯(lián)合診斷，血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc 00152聯(lián)合對(duì)早期NSCLC的診斷結(jié)果為陽(yáng)性117例(其中病理結(jié)果陽(yáng)性101例、陰性16例)、陰性207例(其中病理結(jié)果陽(yáng)性7例、陰性200例)。因此，三者聯(lián)合診斷的靈敏度為0.863(101/117)，特異度為0.926(200/216)，準(zhǔn)確度為0.929(301/324)。

3. 討 論

肺癌是全球最常見的癌癥。癌癥統(tǒng)計(jì)資料顯示，2015年中國(guó)約有429.2萬例新癌癥病例和281.4萬例癌癥死亡病例，其中肺癌是導(dǎo)致癌癥死亡的主要原因[9]。NSCLC約占肺癌病例的85%，其中包括鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、大細(xì)胞癌和其他幾種類型[10]。盡管已經(jīng)取得了一些癌癥治療進(jìn)展，但NSCLC患者的5年生存率仍然未能令人滿意[11]。目前，癌胚抗原(CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和糖類抗原19-9(CA19-9)等傳統(tǒng)NSCLC生物標(biāo)志物的靈敏度已不能令人滿意[12]，因此，迫切需要找到新的非侵入性的敏感生物標(biāo)志物，以補(bǔ)充和改善當(dāng)前的NSCLC篩選方法。

腫瘤細(xì)胞可以向外周血釋放大量RNA，并且RNA的水平足以進(jìn)行定量分析[13-14]。據(jù)報(bào)道，血清中的LncRNA可以反映癌癥患者的病理和生理變化。現(xiàn)階段，許多研究將關(guān)注點(diǎn)集中于LncRNA[15-16]。LncRNA是一種轉(zhuǎn)錄物，長(zhǎng)度超過200個(gè)核苷酸，保守性很差，不能翻譯成蛋白質(zhì)[17]。研究表明，LncRNA在許多生物學(xué)過程中，特別是在腫瘤生物學(xué)中起至關(guān)重要的作用[18]。例如，血清中的LncRNA HULC可以作為胃癌的新型生物標(biāo)志物[19]。在本研究中，發(fā)現(xiàn)血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152聯(lián)合檢測(cè)對(duì)早期NSCLC診斷靈敏度為0.863，特異度為0.926，準(zhǔn)確度為0.929。具有良好的診斷效能。

腫瘤組、良性組和對(duì)照組血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152的相對(duì)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Loc344887、GAS5、Linc00152水平鑒別腫瘤組與良性組的靈敏度分別為0.86、0.87、0.87，特異度分別為0.85、0.88、0.88。Loc344887、GAS5、Linc00152水平鑒別腫瘤組與對(duì)照組的靈敏度分別為0.96、0.94、0.96，特異度分別為0.96、0.85、0.94。Linc00152是一種位于2p11.2的新型LncRNA，已被證明在胃癌、肝細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、結(jié)腸癌和膽囊癌中表達(dá)失調(diào)[20-21]。此外，最近的研究表明，Linc00152可以作為食管鱗狀細(xì)胞癌和胃癌的血清生物標(biāo)志物[22-23]。WU等[24]的一項(xiàng)研究報(bào)道了Loc344887在膽囊癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)明顯升高。體外測(cè)定表明Loc344887通過調(diào)節(jié)誘導(dǎo)膽囊癌的上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化來抑制遷移、侵襲和增殖。GAS5位于1q25.1，包含12個(gè)外顯子，只有一個(gè)短的開放閱讀框，不能編碼功能蛋白[25]。GAS5的高表達(dá)豐度可以通過mTOR途徑與NMD途徑之間的相互作用來解釋[26-27]。提示mTOR途徑與NMD途徑可能在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用。

4 結(jié) 論

綜上所述，血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152的相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)可作為早期NSCLC的潛在標(biāo)志。