對比實時熒光定量PCR檢測TB-DNA與痰涂片在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用

姜趙華 肖勇武

【摘要】目的：對比實時熒光定量PCR檢測TB-DNA與痰涂片在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用。方法：選擇我院2016年10月-2019年10月敦煌市醫(yī)院收治的6230例門診和住院擬行肺結(jié)核篩查的患者為研究對象，均采用TB-DNA與痰涂片兩種方式檢測，其中TB-DNA運用實時熒光定量PCR檢測技術(shù)，應(yīng)用金標準對兩種檢查技術(shù)的準確性加以評價。結(jié)果：納入本次研究的6230例肺結(jié)核篩查者采用金標準共檢出455例，占比7.30%，TB-DNA檢出437例，靈敏度為96.04%，特異度為99.68%;痰涂片檢出382例，靈敏度為83.95%，特異度為98.75%，TB-DNA檢出率、靈敏度、特異度均較痰涂片檢測顯著提高（P<0.05）。結(jié)論：肺結(jié)核采用TB-DNA實時熒光定量PCR檢測診斷具有較高的診斷準確性，其敏感性較痰涂片方法顯著增加，有助于早期診斷肺結(jié)核，減少漏診率，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】實時熒光定量PCR檢測;TB-DNA;痰涂片;肺結(jié)核

[中圖分類號]R521;R440 ? [文獻標識碼]A ? [文章編號]2096-5249（2020）15-0-02

胸部X線、CT等影像學(xué)檢查為肺結(jié)核早期診斷最常見的檢查方式，但臨床進一步確診還需結(jié)合實驗室檢查結(jié)果，并根據(jù)信息綜合評估[1]。以往臨床多采用痰液培養(yǎng)檢查，至痰抗酸桿菌或抗酸桿菌培養(yǎng)呈陽性便可確診，但鑒于部分患者臨床癥狀不明顯，胸部影像學(xué)也不典型的特點，結(jié)核桿菌常發(fā)生某些生物學(xué)特性的變異，常規(guī)予以痰涂片檢查或痰液培養(yǎng)，結(jié)核桿菌往往不能完全檢出[2-3]。此外，痰液中含菌量較少時，或者肺部病灶呈局灶性改變等因素影響下，單獨痰液涂片病原菌的檢出率不高，臨床對高靈敏度檢測方式需求迫切。本文進一步分析了TB-DNA實時熒光定量PCR檢測在肺結(jié)核疾病診斷中的應(yīng)用價值，以為臨床診斷肺結(jié)核提供更為可靠的參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇我院2016年10月～2019年10月敦煌市醫(yī)院收治的6230例門診和住院擬行肺結(jié)核篩查的患者為研究對象，其中男3120例，女3110，年齡28～64歲，平均年齡（47.64±2.51）歲，所有患者均應(yīng)用痰涂片與TB-DNA實時熒光定量PCR檢測兩種方式實施檢測，同時與檢測金標準進行比對，分析檢測一致性，同時探究兩種檢測方式的靈敏性以及特異性。

1.2儀器與方法 （1）儀器與試劑：本次研究所應(yīng)用儀器為全自動醫(yī)用pcr分析儀（SLAN-96P），所應(yīng)用試劑為由圣湘生物公司提供的結(jié)核分枝桿菌核酸檢驗試劑盒，采取的方法為pcr熒光探針法。（2）TB-DNA實時熒光定量PCR檢測方法如下：采集患者清晨痰液，將5ul處理好的痰樣本、陰性對照、陽性對照、陽性參考品和40ul的PCR-mix至PCR反應(yīng)管中，然后應(yīng)用SLAN-96P予以DNA擴增。特異性與敏感性采用如下標準予以評價，總結(jié)熒光定量PCR擴增后的曲線的規(guī)則性，如曲線呈對數(shù)方式增長，Ct值≤39，且內(nèi)標檢測為陽性，結(jié)果判定為陽性，Ct值>40或CT值無顯示，且內(nèi)標檢測為陽性，結(jié)果判定為陰性，此外，CT值介于39-40之間，且擴增曲線以對數(shù)方式增長，則需要對樣本進行重復(fù)測定，如仍顯示Ct值介于39～40之間，則結(jié)果判定為陰性。（3）痰涂片檢測方法如下：指導(dǎo)患者收集清晨痰液，常規(guī)方法涂片后予以抗酸抗菌染色，并于顯微鏡高倍鏡下觀察菌落，100倍高倍鏡視野下發(fā)現(xiàn)菌落為3個或以上，則檢測結(jié)果為陽性，否則為陰性。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用（n，%）表示，χ2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

納入本次研究的6230例肺結(jié)核篩查者采用金標準共檢出455例，占比7.30%，TB-DNA檢出437例，靈敏度為96.04%，特異度為99.68%;痰涂片檢出382例，靈敏度為83.95%，特異度為98.75%，TB-DNA檢出率、靈敏度、特異度均較痰涂片檢測顯著提高（P<0.05）。見表1.

3 討論

肺結(jié)核在我國的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增加態(tài)勢，早期診斷有助于盡早制定聯(lián)合用藥方案，對于改善肺結(jié)核患者預(yù)后具有一定價值[4]。目前臨床用于診斷肺結(jié)核的方法較為多樣，但早期篩查與診斷的精準性仍是臨床關(guān)注的重要課題。以往臨床多采取痰涂片檢測法，在肺結(jié)核診斷中，發(fā)揮了一定的價值，具有操作簡單，出具結(jié)果迅速等優(yōu)勢，但該檢測存在一定的主觀性，且對涂片、染色等步驟的要求較高，操作不規(guī)范，則會導(dǎo)致誤差出現(xiàn)，進而影響檢測的準確性。培養(yǎng)皿為痰培養(yǎng)的主要培養(yǎng)器材，致病菌菌落的培養(yǎng)成為了臨床診斷的金標準，但在實際運用中發(fā)現(xiàn)，菌群培養(yǎng)的周期較長，且對于肺部以外其他器官的檢測過程繁瑣[5-6]。通過實踐應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，TB-DNA實時熒光定量PCR檢測在結(jié)核病的診斷中獲得了良好收效，通過熒光化學(xué)物質(zhì)對PCR循環(huán)產(chǎn)物的檢測，能夠有效定量分析樣品中某種特定DNA的序列，大大提高了PCR的敏感性與特異性。本次研究結(jié)果提示TB-DNA運用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測的靈敏度與特異度均處于較高水平。值得注意的是，該方法雖然提高了檢測的準確性，但仍有一定的漏診幾率，因此，尚不能將其作為肺結(jié)核明確診斷指標，但該檢測手段對于早期篩查與預(yù)防指導(dǎo)，仍具有較高價值。

綜上，肺結(jié)核采用TB-DNA實時熒光定量PCR檢測診斷具有較高的診斷準確性，其敏感性較痰涂片方法顯著增加，有助于早期診斷肺結(jié)核，減少漏診率，值得推廣。

參考文獻

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