普洱茶揮發性成分分析方法對比研究

吳娜 董毅 田先嬌 楊新周

關鍵詞：普洱茶;揮發性成分;分析方法;對比

普洱茶具有“越陳越香”的特點，發酵的時間越長，產生的醇就越多，品質越來越佳[1]。另外，茶葉中含有多種對人體健康有益的活性成分，可以預防多種疾病的功效，深受國內外消費者的關注與青睞[2]。此外，普洱茶的加工和生產方法不同，即口感也稍有變化，其香氣特征也不同[3-4]。因此，普洱茶揮發性成分分析方法研究具有重要意義。對于普洱茶的相關研究較多，包括主要化學成分分離、農藥殘留量和重金屬含量測定等，其揮發性成分研究多是其風味評價[5]。將指紋圖譜技術引用于普洱茶的研究相對較多[6-9]，但是這些指紋圖譜的分析，重在主成分分析及其各成分的百分含量分析。

文中利用指紋圖譜技術評價比較揮發性成分的提取、分離系統、檢測器等，達到快速鑒別的作用，打破多用感官審評方法鑒定普洱茶品質的格局[10-11]，填補感官審評對因人而異、無統一標準的空白，用科學的數據進行分析評價，以期達到質量控制和摻偽鑒別。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜質譜儀（GC/MS-QP2010，日本島津）;

索氏提取器;

旋轉蒸發儀（EYELA OSB-2100）;

數顯電子天平（梅特勒--托利多儀器（上海）有限公司）;

丙酮（AR，天津市風船化學試劑科技有限公司）。

1.2 材料

大益七子餅茶7542普洱生茶（106批次，2011年）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品的處理

稱取2g普洱茶樣品，研細，以丙酮為提取劑進行索氏法回流提取17次，過濾，旋轉蒸發儀濃縮至2mL，用有機相濾膜過濾至進樣瓶中，得待測液。

1.3.2 儀器條件

進樣口和檢測器溫度：250℃，不分流進樣，進樣量：0.3μL，載氣：氮氣，純度為99.999%，柱流量：1.5mL/min，123-1031-JW·DB-1（30.0m×0.32mm×0.1μm）色譜柱分離，不分流進樣，初始溫度80℃，保持1min，以10℃/min升至280℃并保持5min。質譜儀條件：Scan掃描，EI源，離子源溫度200℃，離子掃描范圍35～1000。

1.3.3 樣品檢測

將待測液按1.3.2檢測。

2 結果與討論

2.1 檢測條件的優化

2.1.1分流與不分流模式的選擇

將提取液在相同升溫程序、相同檢測溫度和相同柱流量下，采用分流模式（分流比為20：1）和不分流模式進樣分析，不分流模式下進樣分析，檢測沒有達到飽和狀態，且化合物相對較多;在分流模式（即分流比為20：1）檢測的化合物相對較少。因此，選擇不分流模式對樣品進行檢測分析。

2.1.2分離系統起始溫度的選擇

通過實驗得出，程序升溫的初始溫度為80℃和50℃時色譜峰結果一致，但進樣口溫度為80℃不影響結果分析且縮短了檢測時間。因此，進樣口溫度為80℃較好。

2.2 索氏提取法回流次數對普洱茶揮發性成分指紋圖譜的影響

考察回流次數（1、2、3、5、8、12、17、25次）對揮發性成分指紋圖譜的影響，通過實驗得出，回流17次所提取的物質種類是最多的，所以選擇回流17次來提取普洱茶的揮發性成分。

2.3 不同色譜柱對普洱茶揮發性成分指紋圖譜的影響

考察了不同色譜柱，123-5031·DB-5（30.0m×0.32mm×

0.1μm）毛細管色譜柱、123-1031-JW·DB-1（30.0m×

0.32mm×0.1μm）毛細管色譜柱、RXi17（RESTEK）（30.0m×

0.25mm×0.25μm）毛細管色譜、ZB-multi Residue-2（30.0m×

0.25mm×0.2μm）毛細管色譜柱對普洱茶揮發性成分指紋圖譜的影響，結果表明123-1031-JW·DB-1色譜柱分離效果最好。

2.4 不同檢測器對普洱茶揮發性成分指紋圖譜的影響

以丙酮為提取溶劑，采用優化的索氏提取法提取普洱茶中的揮發性成分，比較探討了不同檢測器（FID和質譜檢測器）對普洱茶揮發性成分指紋圖譜的影響。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統A版和SPSS Statistics 17.0版軟件對不同色譜柱分離的指紋圖譜進行相似度評價分析和主成分分析。結果表明，質譜檢測器的相似度（達0.935）和累積貢獻率高（53%），主成分綜合得分一致（均為0.196），說明在主成分分析方面具有相似性，且靈敏度高，質譜檢測器相對較好。

3 結論

在優化檢測條件的基礎上，通過采用不同色譜柱和不同檢測器對提取液的揮發性成分進行分離測定，對得到的指紋圖譜進行比較優化建立普洱茶揮發性成分指紋圖譜的最佳條件為：索氏提取法回流17次;不分流模式對樣品進行檢測分析;升溫程序為初始溫度80℃，保持1min，以10℃/min升至280℃并保持5min;123-1031-JW·DB-1色譜柱分離;質譜檢測器檢測;建立了普洱茶揮發性成分指紋圖譜分析方法。

參考文獻：

[1]寧井銘，張正竹，谷勛剛.基于高效液相色譜的普洱曬青毛茶指紋圖譜識別方法[A].農業工程學報，2010，3（6）：102-110.

[2]呂海鵬，鐘秋生，林智.陳香普洱茶的香氣成分研究[J].茶葉科學，2009，29（3）：219-224.

[3]薛水英，張勇.普洱茶的主要化學成分及其保健作用的研究[J].農業與技術，2008，28（5）：50-61.

[4]施夢南，龔淑英.茶葉香氣研究進展[J].中國茶葉，2012，26 （8）：50-60.

[5]張靈枝，王登良，陳維信.不同貯藏時間的普洱茶香氣成分分析[J].園藝學報，2007，34（2）：160-175.

[6]劉敏，胡成蕓，陸繹瑋.普洱茶香氣成分研究進展[J].中國茶葉加工，2013，15（2）：38-41.

[7]韓曄華.中藥指紋圖譜研究的某些進展與展望[J].色譜， 2008，17（8）：40-56.

[8]張春鳳，張永清.氣相色譜及其在中藥質量標準現代化中的應用[J].山東醫藥工業，2002，21（4）：32-34.

[9]唐一春，包云秀，劉德和.佛香茶香氣成分的研究[J].云南農業大學報，2001，16（1）70-84.

[10]劉英，吳曙光，尹州，曹麗芬.指紋圖譜技術在茶葉研究上的應用[J].茶葉科學，2013，33（1）：13-20.

[11]田力.關于氣相色譜儀檢測器的探討[J].科技情報開發與經濟，2007，35（2）：101-108.

作者簡介：

吳娜（1985- ），女，彝族，講師，碩士，從事中藥材與食品中農藥殘留檢測分析及中藥材指紋圖譜分析。

通信作者：

楊新周（1986- ），男，碩士，副教授，研究方向為民族藥物及分離分析化學研究。

基金項目：云南省應用基礎研究計劃青年項目（2018FD099）;國家自然科學基金項目（21366011）。