液基薄層細胞學檢查聯合免疫細胞化學法對肺癌病理類型的診斷價值

陶璐

(平頂山市第一人民醫院 病理科，河南 平頂山 467000)

肺癌為常見肺原發性惡性腫瘤，發病率較高且逐年上升，吸煙、環境污染、職業粉塵、遺傳等均為其致病因素，患者多存在咳嗽、咳痰、胸悶等癥狀，隨著病情的進展可出現肝、腦等其他器官的轉移，腦轉移或因壓迫誘發腦疝，嚴重威脅患者生命安全[1-3]。早期診斷可避免患者錯過最佳治療時間，有利于臨床制定有效治療方案。不同類型肺癌治療方案不同，采用病理活檢明確肺癌分型準確度高，但部分患者不適合或不愿接受手術病理活檢，故尋找其他檢查方法明確肺癌分型，對保證臨床治療效果、改善患者預后也具有重要價值。基于此，本研究選取平頂山市第一人民醫院74例肺癌患者，探討液基薄層細胞學檢查(thinprep cytologic test，TCT)聯合免疫細胞化學法(immunocytochemistry，ICC)的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年9月至2019年3月平頂山市第一人民醫院收治的74例肺癌患者，其中男49例，女25例，年齡為25～76歲，平均(47.12±8.56)歲，病程為2～10 a，平均(7.56±1.03)a，體質量指數為17～25 kg·m-2，平均(22.15±1.06)kg·m-2。本研究經平頂山市第一人民醫院醫學倫理委員會審批通過。

1.2 納入及排除標準

1.2.1納入標準 (1)經胸部CT、骨掃描檢查、組織病理學檢查確診為肺癌；(2)存在咳嗽、咳痰、痰中帶血等癥狀；(3)一般資料完整。

1.2.2排除標準 (1)合并其他惡性腫瘤者；(2)妊娠期或哺乳期女性；(3)伴有精神疾病、認知障礙、溝通障礙者。

1.3 檢測方法

1.3.1標本采集 利用B超定位，常規消毒鋪巾，行胸腔穿刺，抽取100 mL胸腔積液，靜置5 min，取沉淀液20 mL，混勻，儲存送檢。

1.3.2檢測抗體 所用抗體為p63、細胞角蛋白7(cytokeratin 7，CK7)、突觸素(synaptophysin，Syn)、CK5/6、甲狀腺轉錄因子-1(thyroid transcription factor 1，TTF-1)、神經細胞黏附分子1(neural cell adhesion molecule 1，NCAM-1)，均購自美國Dako公司。

1.3.3TCT檢查 將胸腔積液標本放入離心管，離心處理，棄上清液，置漩渦混合器上震蕩30 s，加入5 mL緩沖液，進行2次離心，棄上清液，置漩渦混合器上震蕩30 s，進行薄層細胞涂片，采用體積分數為95%的酒精固定10 min，巴氏染色，制片2張，置于-20 ℃的冰箱中存儲，用于ICC染色。

1.3.4ICC檢測 將標本從冰箱取出，使用蠟筆劃分出6個區域，放入丙酮中固定4 h，取出標本，于55 ℃烤箱中加熱20 min，采用體積分數為50%的乙醇固定2 min，用去離子水沖洗，微波抗原修復10 min，使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗，每次2 min，共沖洗3次；5%～10%血清室溫封閉15 min，棄血清，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗，每次2 min，共沖洗3次。加入抗體p63、CK7、Syn、CK5/6、TTF-1、NCAM-1，置于-4 ℃冰箱中12～24 h，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗，每次2 min，共沖洗3次。采用二氨基聯苯胺顯色溶液顯色(5～10 min)，用蒸餾水終止化學反應，復染，封固，鏡檢。

1.4 觀察指標(1)診斷結果和診斷符合率；(2)p63、CK7、Syn、CK5/6、TTF-1、NCAM-1抗體在不同類型肺癌中的表達。(3)細胞學涂片表現。

1.5 統計學方法采用SPSS 22.0統計軟件分析數據，計數資料以率(%)表示，行χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 診斷結果和診斷符合率74例肺癌患者中，病理結果證實，鱗癌33例，腺癌29例，小細胞癌12例。采用TCT聯合ICC正確診斷出鱗癌31例，腺癌25例，小細胞癌11例。TCT聯合ICC診斷肺癌病理類型的診斷符合率為90.54%(67/74)。

2.2 6種抗體在不同類型肺癌中的表達在鱗癌、腺癌與小細胞癌中，各種抗體的陽性率相比，差異有統計學意義(均P<0.05)。p63、CK5/6在鱗癌中陽性率較高，分別為93.94%、90.91%；CK7、TTF-1在腺癌中陽性率較高，均為96.55%；Syn、NCAM-1在小細胞癌中陽性率較高，均為83.33%。見表1。

表1 6種不同抗體在不同類型肺癌中的表達[n(%)]

2.3 細胞學涂片表現p63在鱗癌中表達為(4+)，CK7在腺癌中表達為(4+)，Syn在小細胞癌中表達為(4+)，CK5/6在小細胞癌中表達為(3+)，TTF-1在腺癌中表達為(4+)，NCAM-1在小細胞肺癌中表達為(3+)。

3 討論

相關統計數據顯示，每年新增肺癌患者17%，每年因肺癌死亡患者占約25%[4-8]。早期診斷治療是改善患者預后的關鍵。不同類型肺癌臨床治療方案和治療重點不同，選用合適的診斷方法，提高診斷準確度，明確肺癌病理分型，是指導臨床選擇最佳治療方案的關鍵。通過手術切除標本病理雖可準確判斷病理分型，但部分患者不適合手術活檢，此種診斷方法臨床應用有一定局限性。

胸腔積液脫落細胞學檢測為早期診斷肺癌的重要方法之一，因具有無創、簡便、可重復操作等優點在肺癌篩查和臨床診斷中得到廣泛應用，但傳統胸腔積液制片方法存在細胞涂片厚度不一、背景模糊等不足，易遮蓋腫瘤細胞，導致漏診。TCT可最大限度利用標本，并能通過離心將炎癥細胞、腫瘤細胞分離，涂片背景干凈、細胞分布較為均勻，能清晰呈現細胞結構及染色情況，可依照TCT結果初步篩選可疑標本，在TCT基礎上聯合ICC可通過抗體表達情況有效實現疾病鑒別和肺癌分型[9]。本研究以74例肺癌患者為研究對象，探討TCT聯合ICC的診斷價值，結果顯示，TCT聯合ICC診斷肺癌的診斷符合率為90.54%，可見該診斷方法診斷符合率較高。p63在機體中的表達具有廣泛性和選擇性，其在鱗癌中呈高表達；CK7多作為腺癌分化類型的客觀指標；CK5/6主要表達于鱗狀上皮基底細胞及導管上皮基底細胞，可用于鱗癌、腺癌的鑒別；TTF-1為終末呼吸單位細胞、腫瘤標志物，主要表達于小細胞肺癌和腺癌中；NCAM-1為小細胞肺癌、非小細胞肺癌鑒別標志物[10]。此外，鑒于病理分型是臨床實施針對性治療的基礎，不同類型肺癌各個抗體表達水平、陽性率存在差異，本研究進一步觀察6種抗體在不同類型肺癌中的表達，研究數據表明p63、CK5/6在鱗癌中陽性率較高，CK7、TTF-1在腺癌中陽性率較高，Syn、NCAM-1在小細胞癌中陽性率較高，進一步證實p63、CK7、Syn、CK5/6、TTF-1、NCAM-1抗體在不同類型肺癌中的表達存在差異，臨床可根據各種抗體在肺癌中的陽性率判斷患者腫瘤分型，以科學實施治療。

綜上所述，TCT聯合ICC對肺癌病理類型的診斷符合率較高，各種抗體在不同類型肺癌中陽性率不同，可為臨床診斷和分型提供信息支持。