miR-636在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及臨床意義

袁新，嚴(yán)雨姮，王小平，余祖江

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 感染科，河南 鄭州 450052)

肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)在原發(fā)性肝癌中占比超80%，因其進(jìn)展迅速，治療效果不佳，目前是全球癌癥相關(guān)死亡的第四大原因[1]。雖然近年來各種治療方法(如化療、放療、無創(chuàng)放射技術(shù)等)取得了新進(jìn)展，使HCC患者整體生存率有了一定程度的提高，但治療效果仍不理想[2]。靶向治療是近年來腫瘤研究的熱點(diǎn)，研究促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的關(guān)鍵分子事件，有望實(shí)現(xiàn)HCC的精準(zhǔn)治療。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一般由18～25個(gè)核苷酸組成的內(nèi)源性單鏈非編碼RNA，已被證實(shí)參與多種類型癌癥的發(fā)生發(fā)展過程，通過與靶mRNA或長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)結(jié)合以抑制mRNA的翻譯，或者降解與miRNA結(jié)合的mRNA、lncRNA[3]。miR-636是miRNA的一種，作為癌基因或抑癌基因調(diào)控乳腺癌[4]、前列腺癌[5]和胰腺癌[6]等多種疾病。miR-636在HCC中的表達(dá)及與腫瘤臨床病理特征的相關(guān)性尚無完善的研究。

本研究通過癌癥基因組圖譜(the Cancer Genome Atlas，TCGA)數(shù)據(jù)庫收集HCC相關(guān)數(shù)據(jù)，分析miR-636在HCC中的表達(dá)情況及對(duì)HCC患者預(yù)后的影響，為明確miR-636與HCC的發(fā)生發(fā)展及患者預(yù)后的關(guān)系提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料HCC癌組織和正常組織的基因表達(dá)數(shù)據(jù)及患者相關(guān)臨床特征數(shù)據(jù)從TCGA數(shù)據(jù)庫(https://tcga-data.nci. nih.gov/tcga/)獲取[7]。對(duì)所提取的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和歸納，排除miR-636表達(dá)情況、患者臨床病理特征或預(yù)后資料不完整的病例，共納入345例。根據(jù)miR-636表達(dá)量的中位數(shù)將納入的病例分為miR-636高表達(dá)組和miR-636低表達(dá)組，并對(duì)有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分類處理，包括年齡、性別、TNM分期、血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)水平、病理學(xué)分級(jí)及預(yù)后等資料。

1.2 觀察指標(biāo)(1)HCC患者癌組織與癌旁正常組織中miR-636表達(dá)水平；(2)不同臨床特征的HCC患者癌組織miR-636表達(dá)水平；(3)miR-636表達(dá)水平與HCC患者預(yù)后的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁組織中miR-636表達(dá)水平比較癌旁組織和癌組織中miR-636表達(dá)量分別為11.284±0.512、11.841±0.655，癌組織樣本中miR-636表達(dá)水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.915，P<0.001)。

2.2 癌組織miR-636表達(dá)水平與臨床特征的相關(guān)性癌組織miR-636表達(dá)水平與患者TNM分期和血清AFP水平有關(guān)(均P<0.05)，與年齡、性別和病理分級(jí)無關(guān)(均P>0.05)。見表1。

表1 癌組織miR-636表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系(n)

2.3 癌組織miR-636表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系以患者死亡作為研究終點(diǎn)，以年齡、性別、TNM分期、AFP水平、Grade分級(jí)為自變量進(jìn)行Cox單因素回歸分析，結(jié)果顯示，TNM分期和miR-636表達(dá)水平與患者預(yù)后有關(guān)，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期和miR-636高表達(dá)者總生存期較短(均P<0.05)，見表2。將TNM分期和miR-636表達(dá)水平納入Cox多因素回歸分析，結(jié)果顯示，高TNM分期、miR-636高表達(dá)水平是HCC患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)，見表3。

表2 影響HCC患者預(yù)后的Cox單因素回歸分析

表3 影響HCC患者預(yù)后的Cox多因素回歸分析

3 討論

全球每年有近70萬人死于肝癌，其中以HCC最為常見，患者大多在晚期才確診，常伴有門靜脈癌栓、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及其他疾病，預(yù)后極差[8]。影響HCC發(fā)生進(jìn)展的常見因素包括炎癥、肝纖維化、氧化應(yīng)激和慢性肝硬化等，其分子機(jī)制尚不完全清楚。目前，AFP常作為肝癌篩查的腫瘤標(biāo)志物，但其只是晚期肝癌或肝部分切除術(shù)后復(fù)發(fā)的一個(gè)標(biāo)志。因此，在分子層面繼續(xù)對(duì)HCC進(jìn)行探索，挖掘分子生物標(biāo)志物作為預(yù)后指標(biāo)、診斷工具，或者治療靶點(diǎn)，對(duì)HCC的診斷和治療具有重要意義。

近年來，miRNA對(duì)腫瘤的調(diào)控機(jī)制受到了廣泛關(guān)注。有研究表明，在HCC中，miR-26a/-34a/-122/-138/-195/-497表達(dá)下調(diào)，其對(duì)細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的控制能力降低[9]。與之相反，miR-21/-148a/-216a/-221/-222/-519d表達(dá)上調(diào)，使PTEN抑癌基因下調(diào)，從而影響P13K/MAPK通路的關(guān)鍵控制點(diǎn)[10]。由此可見，HCC中miRNA表達(dá)異常可影響其參與的凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控、DNA修復(fù)、血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移的靶mRNA的表達(dá)，從而發(fā)揮調(diào)控作用。

miR-636是miRNA的一種，已知其在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中產(chǎn)生影響。據(jù)報(bào)道，miR-636的作用靶點(diǎn)為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6(cyclin-dependent kinase 6，CDK6)和B細(xì)胞淋巴瘤因子2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)，可通過靶向CDK6/Bcl-2抑制宮頸癌細(xì)胞存活[11]。miR-636還能通過降低Kruppel樣因子9(Kruppel-like factor 9，KLF9)在其mRNA的3’UTR上的表達(dá)，促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的增殖[12]。盡管已知miR-636可促進(jìn)或抑制多種類型癌癥的發(fā)生發(fā)展，但其在HCC中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響仍待研究。

本研究通過TCGA數(shù)據(jù)庫獲取miR-636相關(guān)資料，包括miR-636表達(dá)水平及患者臨床資料等，對(duì)比HCC癌組織與癌旁正常組織中miR-636表達(dá)情況，并分析了miR-636表達(dá)水平與患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。研究結(jié)果顯示，癌組織中miR-636表達(dá)水平高于癌旁組織，癌組織中miR-636表達(dá)水平與患者年齡和性別無關(guān)。TNM分期越高，miR-636表達(dá)水平越高，表明miR-636可能對(duì)HCC的發(fā)生發(fā)展起促進(jìn)作用，有望成為HCC的治療靶標(biāo)。此外，Cox單因素回歸分析結(jié)果顯示，TNM分期高、miR-636表達(dá)量高的患者，總生存期短，提示TNM分期和miR-636表達(dá)量是HCC患者生存時(shí)間的危險(xiǎn)因素。Cox多因素回歸分析表明，miR-636表達(dá)水平是HCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。以上結(jié)果提示，檢測(cè)miR-636表達(dá)水平有助于判斷HCC患者預(yù)后，可用于指導(dǎo)臨床。

miR-636過表達(dá)與炎癥有關(guān)。有關(guān)肺部囊性纖維化的研究發(fā)現(xiàn)，miR-636可與IL1R1、RANK和IKBKB發(fā)生相互作用，導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子受體IL1R1表達(dá)水平下降，RANK蛋白表達(dá)水平升高，以及NF-κB通路中的主要蛋白IKKβ表達(dá)水平下降[13]。由此可見，miR-636可通過調(diào)節(jié)炎癥因子水平、信號(hào)通路等多種途徑影響疾病的發(fā)生發(fā)展過程，可以推測(cè)miR-636表達(dá)水平在疾病的診治及預(yù)后判斷方面具有巨大潛在價(jià)值。

綜上所述，miR-636可能參與HCC的發(fā)生與發(fā)展，有望成為一種新的HCC預(yù)后生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，其與lncRNA、mRNA等的相互作用及在HCC中的具體調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。