氟尿嘧啶血藥濃度監測差異化分析

陳釗宇 李代程 譚竹川 李朋征

（達州市大竹縣人民醫院 四川 達州 635100）

5-FU 是常用的抗癌藥物，可顯著降低患者的病死率。大量臨床研究結果顯示，不同患者間5-FU 的療效和毒性存在較大的個體差異。不同患者進行氟尿嘧啶血藥濃度監測可產生100 倍左右的血藥濃度差距。若患者5-FU 血藥濃度值超出范圍，其發生Ⅲ～Ⅳ度骨髓抑制、Ⅲ～Ⅳ度腹瀉、腸道黏膜炎等不良反應的發生率明顯升高。這些都揭示出5-FU 的血藥濃度與療效、毒性密切相關。

1.一般資料

我院60例經病理確診的大腸癌患者，采取FOLFOX方案化療，且每位患者的化療周期均≥4 周期。血樣采取定于每周期化療第2 天早上6 點統一采血，然后由科室護士專人負責送到藥學部，采用高效液相色譜法（HPLC）對5-FU 血藥濃度進行檢測，取各周期的血藥濃度均值，根據5-FU 血藥濃度預測可信區間分為A組（≤20mg/L）、B 組（20 ～40mg/L）和C 組（＞40mg/L），比較三組患者的化療療效以及不良反應發生情況。

2.方法

2.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（Waters e2695）

2.2 色譜條件

色譜柱：Waters-C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液（5：95），等度洗脫8min，檢測波長265nm，柱溫25 攝氏度，流速為1 mL/min，進樣量體積為10μL。

2.3 對照品溶液制備

精密稱取5-氟尿嘧啶（5FU）及5-溴尿嘧啶（5Br）對照品適量，以50%甲醇水定容于10mL 容量瓶中，得1mg/mL 5-氟尿嘧啶和5-溴尿嘧啶儲備液。從儲備液中取適量5-氟尿嘧啶和5-溴尿嘧啶，用50%甲醇水定容于10mL 容量瓶中，得20μg/mL 的5-氟尿嘧啶和5-溴尿嘧啶的對照品溶液，置4℃冰箱保存。取5-氟尿嘧啶對照品溶液適量，分別配置成1、2、4、8、12、16、20μg/mL 的5-氟尿嘧啶工作液，同時在工作液中加入100 μL 5-溴尿嘧啶的對照品溶液。

2.4 標準曲線繪制

用5-氟尿嘧啶樣品峰面積與5-溴尿嘧啶內標峰面積比（R）對樣品濃度（c）作線性回歸，計算回歸方程。

2.5 血漿樣品處理

取1mL血樣于4℃，3500轉，離心10分鐘，取100μL上清液，加入100μL 5-溴尿嘧啶的對照品溶液，再加入3 mL 甲醇，渦旋1 分鐘，置于離心機以4℃，10000 轉，離心10 分鐘，取上清液，50℃氮氣吹干，1mL 甲醇復溶，重復吹干三次后，用1mL 50%甲醇溶解，過0.22μm 微孔濾膜，即得血漿樣品，置4℃冰箱保存。

2.6 實驗結果

對照品色譜圖

2.7 對照品測定數據

樣品濃度μg/mL 5FU 峰面積 5FU 平均峰面積 5Br 峰面積 5Br 平均峰面積 R（5FU/5Br）2 69648 69792.5 41175 41611 1.68 69937 42047 4 132697 132236 41559 41657.5 3.17 131775 41756 8 255037 255261 41656 41579 6.14 255485 41502 12 369042 369025.5 40432 40372 9.14 369009 40312 16 485545 486942 41589 41769 11.66 488339 41949 20 544516 547249 36125 36197 15.12 549982 36269

2.8 對照品標準曲線

3.結果

3.1 5-FU 與療效相關性分析

見表1。

表1 三組化療療效比較（x±s，%）

3.2 三組化療后不良反應比較

C 組的骨髓抑制、黏膜炎等不良反應總發生率73.33%（11/15） 高于A、B 組的17.65%（3/17）、25.00%（7/28），差異具有統計學意義（P＜0.05）；但B、C 組在手足綜合征發生率及胃腸反應比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

4.影響氟尿嘧啶血藥濃度監測結果分析

納入60 例結直腸癌患者。5-FU 高濃度組（AUC ＞40ug/ml）的客觀緩解率、疾病控制率低于低、中濃度組（AUC ≤20ug/ml 和20 ～40ug/ml），且高濃度組患者疾病進展率是顯著高于低濃度和中濃度組的患者，中濃度組患者客觀緩解率、疾病控制率高于低濃度組，且疾病進展率低于低濃度組，差異具有統計學意義（P＜0.001），表明中濃度組患者AUC 在20 ～40 ug/ml 范圍其能得到較好的控制，降低患者疾病進展的幾率；同時隨著AUC 增加，其骨髓抑制的發生率升高，高、中濃度組患者骨髓抑制反應發生率高。按骨髓抑制程度分級，Ⅰ～Ⅱ級和Ⅲ～Ⅳ級骨髓抑制反應程度在各組之間差異無顯著性（P＞0.05），但骨髓抑制的發生率是隨著AUC 的增加而呈增高趨勢的；5-FU高濃度組（AUC ＞40ug/ml）的患者Ⅲ級以上惡心嘔吐反應的發生率是顯著高于低、中濃度組（AUC ≤20ug/ml 和20 ～40ug/ml），差異具有統計學意義（P=0.006）；腹瀉、脫發以及手足綜合征等不良反應隨著AUC 的增加，其發生率呈增高趨勢，但病例數少，未能做統計學分析。表明5-FU 穩態血藥濃度與毒性反應（骨髓抑制、惡心嘔吐反應）是呈正相關的。由以上結果可知，中濃度組患者治療療效效果高于低濃度組和高濃度組，而中濃度組患者毒性反應發生率和Ⅲ級以上毒性反應發生率低于高濃度患者。本試驗結果顯示，約82%的患者AUC 高于目標值，僅約15%的患者能達到目標范圍，部分患者高于警戒值，并且個體間存在較大的藥代動力學差異。

結合臨床研究推測我院5-FU 檢測值偏高可能有以下原因：（1）患者自身情況；（2）是否正確給藥：患者使用靜脈泵化療時，泵入時間長達48 小時，部分患者私自調整輸液泵速度加快5-FU的輸入速度從而使血液中藥物濃度升高；（3）化療中存在合并用藥：結直腸癌患者在治療時，合并使用多種輔助藥物，其中可能存在藥物的抑制和相互作用，如腫瘤科常用藥西咪替丁、多潘立酮、氟喹諾酮類等；（4）基因的多態性；（5）樣本處理與保存。

5.結論

結直腸癌是常見惡性腫瘤之一，NCCN 指南和中國結直腸癌診療規范推薦5-FU 作為晚期結直腸癌患者的基礎治療。5-FU 本身無抗癌活性，由其活性代謝產物發揮抗癌作用。5-FU半衰期短，其體內過程符合非線性藥代動力學消除模式，以持續靜脈滴注方式給藥，監測其穩態血藥濃度，計算出AUC。

6.展望

目前國內對DPYD、MTHFR 和UMPS 基因多態性與5-FU 血藥濃度及臨床毒性反應之間關系研究較少，且多集中探討某一代謝酶基因多態性與5-FU 毒性反應之間的相關性，局限性較大，同時且不同研究間的結論往往相悖。藥物體內過程是多個基因的多重影響下的結果。因此多基因的多態性及5-FU 血藥濃度對療效與毒性反應之間的研究是未來5-FU 研究的發展趨勢。