Salusin-β 對血管內皮細胞氧化應激的影響

劉宣宣

（南京醫(yī)科大學康達學院生理與病生教研室 江蘇 連云港 222000）

Salusins 是由Shichiri 等于2003 年發(fā)現(xiàn)的一類內源性心血管調節(jié)肽，包含由28 個氨基酸殘基組成的Salusin-α 和20 個氨基酸殘基組成的Salusin-β[1]。Salusins 具有降低血壓、心率和心輸出量[1]、促進心肌細胞生長、保護心肌細胞、影響動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展、促進血管平滑肌細胞增殖和血管內皮細胞的炎癥反應等作用[2]。引發(fā)血管內皮功能障礙的原因主要有氧化應激、炎癥等[3]，因此，本研究通過體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內皮細胞（HUVECs），孵育Salusin-β 和Antisalusin-β，并測定細胞內ROS 含量和NADPH 酶含量變化，探討Salusin-β 在HUVECs 氧化應激中的作用。

1.材料與方法

1.1 細胞

人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）購自ScienCell Research Laboratories。

1.2 試劑

Salusin-β 購自Phoenix pharmaceuticals（Belmont，CA，USA），Anti-salusin-β 抗體購自Clound-Clone Corp 公司，光澤精和NADPH 均購自sigma 公司。

1.3 實驗方法

HUVECs 隨機分對照組（Saline），Salusin-β（10-7mol/L）組和Anti-salusin-β（10-7mol/L）組，孵育48 小時后，細胞勻漿后離心10 分鐘（4℃，3000rpm），取上清液用化學發(fā)光法測定超氧陰離子水平并用Bradford 法測定蛋白質含量。用加入SOD（350U/ml）的改良HEPES 緩沖液稀釋待測樣本的上清液，加入NADPH（100μM）和光澤精（5μM）后，用化學發(fā)光儀每隔1分鐘測一次發(fā)光值，共測10 次，計算出每分鐘每毫克蛋白的平均發(fā)光值。

1.4 統(tǒng)計學方法

用SPSS 20.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)以均值±標準差表示，組間差異采取單因素方差分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2.結果

2.1 Anti-salusin-β 抑制HUVECs ROS 和NADPH 酶表達

結果顯示（圖1）：Salusin-β 作用于HUVECs 后，細胞內NADPH 酶含量（圖A）和ROS 含量（圖B）無顯著變化，Antisalusin-β 作用于HUVECs 后，細胞內NADPH 酶含量（圖A）和ROS 含量（圖B）顯著降低（*P＜0.05，n=6）。

圖1 Salusin-β 和Anti-salusin-β 孵育HUVECs 48 小時后，細胞內NADPH 酶含量（圖A ）和ROS 含量（圖B）的變化。

3.討論

Salusin-β 在心血管、內分泌和免疫系統(tǒng)等發(fā)揮多種功能，是具有重要生理和病理生理學意義的內源性調節(jié)肽。研究顯示，血管內皮功能損傷是動脈粥樣硬化（AS）早期臨床表現(xiàn)，在動脈粥樣硬化斑塊中Salusin-β 高表達[4]，而氧化應激是動脈粥樣硬化發(fā)展的重要原因[5]，ROS 能夠增強細胞氧化應激，促進炎癥介質釋放、低密度脂蛋白氧化，破壞凝血功能平衡等。有研究表明，氧化應激在內皮功能障礙發(fā)生機制中起著重要作用[6]。因此，本實驗主要探究Salusin-β 是否介導HUVECs 的氧化應激，結果顯示，Salusin-β 對正常HUVECs 并未發(fā)現(xiàn)直接作用，但是用Anti-salusin-β 清除HUVECs 內源性Salusin-β 以后，細胞內ROS 和NADPH 酶的含量明顯下降，提示Salusin-β 對于HUVECs 的氧化應激可能具有一定的促進作用，具體機制有待進一步研究。