帕金森綜合征患者CD14mRNA與TLR4mRNA的表達及意義

劉靜靜 李素萍 王 青

焦作市第二人民醫院，河南 焦作 454002

帕金森綜合征(Parkinson syndrome，PS)是一種中老年人常見的低病死率、高致殘率的神經系統變性疾病，近年來，其發病率呈現增高趨勢。PS病人臨床表現為感覺障礙、嗅覺減退、睡眠障礙等非運動癥狀與及靜止性震顫、肌強直、運動遲緩、姿勢步態異常等運動癥狀，數據顯示約50%的患者伴有抑郁癥，若診治不當極有可能加重殘疾，引起嚴重并發癥，降低病人生活質量，加劇病人、家庭、社會負擔。目前臨床治療以改善癥狀、提高生活質量為原則，而焦慮、抑郁不良心理狀態、運動與非運動癥狀嚴重程度均會不同程度影響病人生活質量的提高。PS是一種神經系統漸進性疾病，隨著病程的發展，患者的認知及行為將受到顯著影響，嚴重降低了患者及其家屬的生活質量[1]。臨床研究發現帕金森引起的一系列并發癥與患者的神經元細胞受損密切相關，且神經元細胞損傷可能與機體固有因子的異常表達顯著相關[2-3]。單核細胞是機體血液中最大的白細胞，是機體防御系統最重要的組成部分，是CD14mRNA、TLR4mRNA表達的主要場所。臨床研究發現CD14mRNA、TLR4mRNA的異常表達會導致集體固有免疫因子的免疫抑制，嚴重時會導致神經元細胞的變性，導致帕金森癥狀加重[4-5]。臨床研究證實機體固有免疫系統與帕金森的發生、發展具有顯著相關性，為了深入探討CD14mRNA、TLR4mRNA的表達與帕金森綜合征的相關性，本研究以2018-02—11收治的80例帕金森綜合征患者以及80例健康志愿者為對象，探討CD14mRNA、TLR4mRNA 在帕金森綜合征患者中的表達及意義。

1 資料與方法

1．1一般資料以焦作市人民醫院2018-02—11收治的80例帕金森綜合征患者以及80例健康志愿者為研究對象，其中80例帕金森綜合征患者為實驗組，80例健康志愿者為對照組。診斷標準：中華醫學會帕金森病學組制定的帕金森綜合征臨床診斷標準。納入標準：(1)經臨床確診的帕金森病患者；(2)患者精神狀態正常，具有完全自主行為能力；(3)入組患者不合并其他器質性疾病；(4)患者及患者家屬對試驗內容知情，并自愿簽署知情同意書。排除標準：(1)合并其他器質性疾病的患者；(2)合并精神系疾病，且不具有完全自主行為能力的患者；(3)合并其他免疫缺陷性疾病或者癌癥患者；(4)近期有服藥免疫抑制劑或增強劑病史患者。2組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，本試驗經我院倫理委員會批準。2組患者一般資料見表1。

1．2方法根據CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平統計學分析2組性別、年齡、H-Y分期、病程、運動并發癥、服藥激素或L-DOPA類藥物。CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平測定根據2組受試者血液樣品檢測結果，采集2組受試者晨起空腹靜脈血，10 000 rpm離心5 min收集受試者血細胞，血細胞樣品加入TRIZOL裂解血細胞，按1：5的比例在裂解血細胞樣品加入氯仿劇烈振搖，室溫放置3 min后12 000 g，4 ℃，離心15 min，收集RNA樣品。按等體積比例在RNA樣品中加入異丙醇，-20 ℃靜置30 min，棄上清后樣品中加入75%乙醇1 mL，震蕩混勻后加入20 μL焦碳酸二乙酯，室溫下將樣品放置5 min待其完全溶解。在上述樣品中加入5 μL逆轉錄酶，先室溫孵育20 min，后置于37 ℃水浴箱孵育半小時。在孵育好樣品中加入5 μmol/L上游、下游引物，再加入逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)混合液5 μL，最后利用脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)稀釋至20 μL，反應條件：95 ℃ 3 min、95 ℃ 15 s、90 ℃ 5 s，共40個循環，堿基長度擴增為134 bp。

表1 2組患者一般資料對比

1．3觀察指標觀察2組受試者CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平，CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與患者性別、年齡、H-Y分期、病程、運動并發癥、服藥激素或L-DOPA類藥物的關系作為觀察指標。

2 結果

2．12組CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平對比實驗組基因CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平均顯著高于對照組(P<0.05)，CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平見表2。

2．2CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與PD患者臨床分期的關系H-Y>2，CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平均較低，且與對照組差異無統計學意義(P>0.05)。H-Y=2.5，實驗組CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平與H-Y=2時相比顯著升高(P<0.05)，且隨著患者H-Y分期的加重，CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平逐漸升高，且各病理分期患者CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平與隨著病情的增加而顯著增加(P<0.05)。CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與PD患者臨床分期的關系見表3。

表2 2組CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平對比Table 2 Comparison of the expression levels of CD14mRNAand TLR4mRNA in the two

表3 CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與PD患者臨床分期的關系

2．3CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與PD患者臨床資料回顧性分析對患者CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與患者一般資料相關性回顧性分析顯示，CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與患者性別、年齡、病程、運動并發癥有無、是否服用受體激動劑或L-DOPA類藥物差異無統計學意義(P>0.05)。CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與PD患者臨床資料回顧性分析見表4。

3 討論

PD是一種中老年人常見的神經系統退化性疾病，臨床癥狀表現為震顫、肌強直以及運動減少、記憶力減退以及認知障礙等，嚴重降低了患者的生活質量[6-11]。臨床研究發現機體固有免疫系統與PD患者的病情發生、發展具有顯著相關性[12-15]。目前臨床針對PD的研究大多數僅與中樞神經系統免疫機制相關，很少參與外周相關固有免疫機制[16-20]。臨床研究發現，隨著PD患者病情的加重，患者外周單核巨噬細胞前體細胞逐漸增多，且顯著高于健康受試者。結果表明PD的發生、發展與患者免疫機制有很大的相關性[21-23]。

表4 CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與PD患者臨床資料的關系

3．1CD14mRNA、TLR4mRNA在PD患者體內表達水平CD14即內毒素受體抗體，是一種脂質體受體，主要在單核巨噬細胞表達。TLR4即Toll樣受體，是固有免疫的病原體相關分子模式受體，主要表達于髓源性細胞。固有免疫異常是PD患者病情惡化的主要危險因素之一，其中臨床研究表明CD14mRNA、TLR4mRNA表達產物是影響PD患者病情的主要因素[24-26]。CD14/TLR4表達產物分別為CD14mRNA、TLR4mRNA的表達產物，兩種表達產物具有協同作用，能夠特異性識別革蘭陰性桿菌脂多糖，并且通過參與基因下游信號通路的激活參與PD患者的固有免疫應答[27-29]。相關研究通過構建動物模型對機體固有免疫機制對PD病情的影響進行了研究，結果顯示PD模型組動物體內CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平顯著高于正常模型組[30-34]。

3．2CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平與PD患者H-Y分級相關性分析PD患者CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平顯著高于健康受試者(P<0.05)，且PD患者隨著H-Y病理等級的加重，CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平逐漸升高。H-Y>2 時CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平均較低，且與健康受試者無顯著差異(P>0.05)。H-Y=2.5時，實驗組CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平與H-Y=2時相比顯著升高，差異顯著(P<0.05)。隨著患者H-Y分期的加重，CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平逐漸升高，且各病理分期患者CD14mRNA、TLR4mRNA表達水平與隨著病情的增加而顯著增加(P<0.05)。

3．3CD14mRNA、TLR4mRNA表達與患者性別、年齡等一般資料相關性分析對患者CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與患者一般資料相關性回顧性分析結果顯示，CD14mRNA、TLR4mRNA的表達水平與患者性別、年齡、病程、運動并發癥有無、是否服用受體激動劑或L-DOPA類藥物差異無統計學意義(P>0.05)。

CD14mRNA、TLR4mRNA在帕金森綜合征患者體內表達水平隨著患者病情的加重逐漸增加，因此通過檢測CD14mRNA、TLR4mRNA在帕金森綜合征患者體內表達水平的差異可有效檢測患者病情的發生、發展，同時為臨床治療提供參考依據。