血清可溶性酪氨酸蛋白激酶對乳腺癌的診斷及預后評估價值

費 翔,李 立,崔建春

(遼寧省人民醫院甲狀腺乳腺外科,遼寧沈陽 110016)

乳腺癌是女性發病率最高的惡性腫瘤，WHO調查顯示，全球每年約有160萬乳腺癌新發病例，發病率和病死率居各類惡性腫瘤首位[1]。國外1項調查顯示，Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌5年存活率達90%以上，而Ⅲ～Ⅳ期僅為35%[2-3]。由于乳腺癌發病早期較為隱匿，近40%以上的患者就診時已進入中晚期，錯過了最佳治療時機，患者預后較差。生物學指標在疾病早期篩查、預后評估方面有明顯優勢。有研究證實，酪氨酸蛋白激酶(Axl)在惡性腫瘤中呈高水平表達，通過多種機制在惡性腫瘤進展中發揮作用[4]。陳立婷等[5]研究發現，Axl在惡性腫瘤組織中表達與患者預后有關。目前，關于Axl在乳腺癌中表達的研究尚少見相關報道，本研究檢測乳腺癌患者血清可溶性Axl(sAxl)水平，探討其對乳腺癌早期診斷及預后評估的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2016年3月至2019年3月本院甲狀腺乳腺外科收治的103例乳腺疾病患者的臨床資料，均經穿刺活檢或手術病理切片檢查確診，分為乳腺癌組58例，年齡34～71歲，平均(45.9±11.5)歲，體質量指數19～25 kg/m2，平均(22.3±2.4)kg/m2；乳腺纖維腺瘤組45例，年齡34～70歲，平均(46.1±11.2)歲，體質量指數20～25 kg/m2，平均(22.6±2.2)kg/m2。根據乳腺癌患者血清sAxl水平中位數(63.49 ng/mL)又可將乳腺癌患者分為sAxl高水平組(>63.49 ng/mL)27例和sAxl低水平組(≤63.49 ng/mL)31例。乳腺癌組納入標準：(1)臨床資料完整，有隨訪記錄者；(2)未進行放療、化療或其他抗癌治療者；(3)各項檢查均知情同意者。乳腺癌組除圍術期嚴重并發癥或術中死亡病例，合并其他惡性腫瘤患者。乳腺癌患者腫瘤分期參照美國癌癥聯合委員會與國際抗癌聯盟關于乳腺癌病理分期標準(第7版)[6]，Ⅰ期17例，Ⅱ期30例，Ⅲ期11例。乳腺纖維腺瘤組排除標準：近3個月行大型手術治療，乳腺腫塊手術切除復發者。兩組患者年齡、體質量指數等一般資料比較，差異均無統計學意義(t=0.088、0.652，P=0.465、0.258)，具有可比性。本研究經本院倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1血清標本采集 兩組患者入院后次日清晨空腹12 h采集肘靜脈血3 mL，采用美國貝克曼庫爾特AllegraX-30多功能臺式離心機以2 500 r/min離心20 min，靜置后抽取上層血清，將血清標本編號置于-70 ℃超低溫冰箱內保存備用。血清sAxl水平檢測采用酶聯免疫吸附試驗，檢測儀器為美國Thermo公司APPLISKAN型酶標儀，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司；試驗操作步驟簡述如下：將標本從-70 ℃冰箱取出室溫融解，分別設置標準品孔和標本孔，標準品孔加入不同水平的標準液，待測標本孔中加入稀釋后的待測標本。向標準品孔和標本孔中加入辣根過氧化物酶標記親和素工作液，封板，室溫孵育45 min；再向每孔加入相應底物，室溫暗處孵育15 min。加終止液終止反應，450 nm處測各孔吸光度值，通過繪制吸光度曲線計算標本sAxl水平。

1.2.2臨床資料收集 收集乳腺癌患者臨床資料，包括年齡、腫瘤分期、腫瘤大小、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、淋巴結轉移、絕經狀態、Ki-67標記指數(Ki-67)等。

1.3隨訪 隨訪時間從乳腺癌患者術后第2天開始計算，終末時間為末次隨訪日期或復發轉移日期或死亡日期。本研究乳腺癌患者隨訪6～60個月，中位隨訪41個月。

2 結 果

2.1兩組患者血清sAxl水平比較 乳腺纖維腺瘤組血清sAxl水平為(48.85±17.02)ng/mL，乳腺癌組為(60.19±23.05)ng/mL，乳腺癌組血清sAxl水平明顯高于乳腺纖維腺瘤組，差異有統計學意義(t=10.270,P<0.001)。

2.2血清sAxl水平與乳腺癌患者臨床資料的關系 血清sAxl水平與腫瘤大小、淋巴結轉移有關；腫瘤直徑>5 cm患者血清sAxl水平明顯高于腫瘤直徑≤5 cm患者；有淋巴結轉移患者血清sAxl水平明顯高于無淋巴結轉移患者，差異有統計學意義(P<0.05)；血清sAxl水平與患者年齡、腫瘤分期、ER、PR、絕經狀態、Ki-67均無關(P>0.05)，見表1。

表1 血清sAxl水平與乳腺癌患者臨床資料的關系(n)

2.3ROC曲線分析血清sAxl水平對乳腺癌的診斷效能 ROC曲線分析顯示，血清sAxl水平鑒別乳腺癌和乳腺纖維瘤的曲線下面積(AUC)為0.874，根據最大約登指數(0.642 1)確定截斷值為46.09 ng/mL，靈敏度為80.5%，特異度為86.0%(95%CI:0.807～0.940,P=0.001)，見圖1。

圖1 血清sAxl水平對乳腺癌的診斷效能

2.4不同血清sAxl水平乳腺癌患者的生存曲線 生存曲線分析顯示，血清sAxl高水平組和低水平組5年生存率分別為44.4%和87.1%。血清sAxl高水平組5年生存率明顯低于低水平組，差異有統計學意義(χ2=8.139,P<0.01)，見圖2。

注：a為低水平組；b為高水平組。

2.5Cox回歸分析影響乳腺癌生存的危險因素 Cox多因素回歸分析顯示，血清sAxl是影響乳腺癌生存預后的危險因素(P<0.05)，見表2。

表2 Cox回歸分析影響乳腺癌生存預后的危險因素

3 討 論

Axl是Tyro3受體酪氨酸激酶亞家族中的重要成員之一，是由胞外區、胞內區及跨膜區組成的單次跨膜蛋白。Axl在正常機體組織均有不同程度表達，在心肌、甲狀腺、骨骼肌、造血系統、結腸黏膜中呈高水平表達，而在外周血淋巴系統中表達較低。有研究顯示，Axl信號途徑在抑制腫瘤細胞凋亡、促進腫瘤細胞轉移、新生血管形成中參與惡性腫瘤發生、發展[7]。DAVIES等[8]研究證實，超過56%的前列腺癌患者、70%的肺癌患者、65%的直腸癌患者腫瘤組織中Axl表達增強。有學者發現，Axl高水平表達是Ⅱ期胰腺癌遠端轉移和死亡的獨立危險因素，這可能與Axl促進胰腺癌細胞增殖和侵襲性增強有關[9]。Axl不僅與惡性腫瘤不良預后相關，還參與了腫瘤細胞耐藥性的形成。劉志等[10]從拉帕替尼BT474細胞分離耐藥的ER陽性、人表皮生長因子受體-2陽性乳腺癌細胞中發現，Axl過度表達是乳腺癌的耐藥機制。因此，對Axl的靶向治療是惡性腫瘤治療的方向。

馬興聰等[11]研究證實，乳腺癌組織中Axl陽性率明顯高于相配對的癌旁組織，進一步研究發現Axl表達與乳腺癌浸潤程度、腫瘤分期有關。Axl不僅可存在于細胞表面蛋白組織中，亦可以sAxl形式存在于血清中。在血清中sAxl可減緩Gas6釋放，延長半衰期，以提高生物利用度，可增強Gas6局部及系統性作用。有研究表明，sAxl可促進細胞膜受體Axl的活化，促進細胞轉移及下游信號激活[12]。

目前，關于血清sAxl與惡性腫瘤關系的報道較少，在部分腫瘤中發現血清sAxl水平異常。劉艷艷等[13]報道顯示，上皮卵巢癌組血清中sAxl水平高于卵巢良性上皮腫瘤組和正常卵巢組，提示sAxl可作為上皮卵巢癌早期診斷和預后評估的腫瘤標志物。本研究觀察了血清sAxl與乳腺癌臨床資料的關系，結果發現，血清sAxl水平與腫瘤大小、淋巴結轉移有關，提示血清sAxl與乳腺癌腫瘤進展和轉移有關，可作為乳腺癌患者診斷和預后的評估指標。本研究進一步探討sAxl對乳腺癌診斷的意義，結果顯示，血清sAxl鑒別乳腺癌和乳腺纖維瘤的AUC為0.874，說明血清sAxl有望作為乳腺癌早期篩查和病情監測的指標。

在對宮頸癌和結直腸癌患者的研究中發現，通過上調sAxl與Gas6表達，可促進腫瘤細胞侵襲和轉移，進一步證實sAxl可能參與乳腺癌細胞的轉移并引起不良預后[14]。成琳等[14]報道，乳腺癌患者血清sAxl水平明顯升高，sAxl高水平是乳腺癌生存期較短和復發的獨立預測因子。本研究隨訪結果顯示，sAxl高水平組5年生存率明顯低于低水平組，sAxl水平升高是乳腺癌生存預后的獨立危險因素，提示血清sAxl可作為乳腺癌預后的評估指標，sAxl水平升高表明生存率較低。

綜上所述，乳腺癌患者血清sAxl水平明顯升高，高水平sAxl與患者腫瘤大小、淋巴結轉移相關，血清sAxl可作為乳腺癌早期診斷、臨床預后的評估指標。