桔貝合劑的薄層色譜鑒別方法研究

沈立茹 ，李瑞宏 ，李敏

（1.唐山市食品藥品綜合檢驗(yàn)檢測中心，河北 唐山 063020；2.河北省兒童醫(yī)院藥劑科，河北 石家莊 050031；3.華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院，河北 唐山 063000）

0 引言

桔貝合劑是兒科臨床常用的中成藥復(fù)方制劑，含有中藥材桔梗、黃芩、甘草等，主要功效為潤肺止咳。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[1]中對桔貝合劑的質(zhì)量控制僅有性狀及檢查，過于簡單，關(guān)于有關(guān)組分的定性鑒別和含量測定均未涉及。有文獻(xiàn)[2]報(bào)道了方中浙貝母和枇杷葉的TLC鑒別，本作者也對方中的7個(gè)主要成分進(jìn)行了研究[3-4]，為進(jìn)一步提高桔貝合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證其質(zhì)量穩(wěn)定性及安全有效性，現(xiàn)增加桔梗、黃芩、甘草3味藥材的薄層色譜鑒別項(xiàng)。

1 儀器與試藥

黃芩苷、甘草苷對照品及桔梗對照藥材（批號分別為：110715-201117、111610-201106、121028-201612，中國食品藥品檢定研究院）；桔貝合劑（批號：18070001）市場采購自太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠有限公司；超聲波清洗儀（寧波新芝生物科技股份有限公司），硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）；所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 桔梗的TLC法鑒別

2.1.1 溶液的制備：

（1）對照藥材：取桔梗對照藥材粉末2.0 g，加水30 mL與7%硫酸乙醇10 mL的混合液20 mL，回流提取2h，放冷后，過濾，濾液用乙酸乙酯振搖提取，每次20 mL，共2次，合并提取液并蒸干，取殘?jiān)?，用甲醇溶解并定容?.0 mL，即得。

（2）供試品溶液：取桔貝合劑10 mL，加7%硫酸乙醇10 mL，混勻，用乙酸乙酯做提取液，振搖提取2次，每次10 mL，將提取液合并，置水浴上蒸干，殘?jiān)?.0 mL的甲醇溶解，即得。

（3）陰性對照溶液：同法取缺桔梗陰性樣品（自制），制成陰性對照溶液。

2.1.2 鑒別：照薄層色譜法[5]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，以三氯甲烷-甲醇（20:1）為展開劑，展開，取出，室溫晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱約5分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的紫色斑點(diǎn)，Rf值為0.22，陰性無干擾，見圖1。

2.2 黃芩的TLC法鑒別

2.2.1 溶液的制備：

（1）對照品溶液：取黃芩苷對照品10 mg，加甲醇溶解并稀釋至10 mL，即得。

（2）供試品溶液：取桔貝合劑2 mL，加甲醇10 mL，超聲提取30 min，過濾，取濾液蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?.0 mL，即得。

（3）陰性對照溶液：同法取無黃芩的陰性樣品（自制），制成陰性對照溶液。

2.2.2 鑒別：照TLC法試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸（5:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，分別顯相同顏色的墨綠色斑點(diǎn)，Rf值為0.30，陰性無干擾。結(jié)果見圖2。

2.3 甘草的TLC法鑒別

2.3.1 溶液的制備：

（1）對照品溶液：取甘草苷對照品10 mg，加甲醇溶解并稀釋至10 mL，即得。

（2）供試品溶液：取本品10 mL，正丁醇為提取液，振搖提取2次，每次10 mL，合并提取液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?.0 mL溶解，即得供試品溶液；

（3）陰性對照溶液：取自制的無甘草的陰性樣品，照上述方法制成陰性對照溶液。

2.3.2 鑒別：照TLC法試驗(yàn)，吸取對照溶液5μL，供試品和陰性對照溶液10μL，在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，以三氯甲烷-甲醇-水（20:5:0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，以5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的黃色斑點(diǎn)，Rf值為0.41，陰性無干擾。結(jié)果見圖3。

圖1 桔梗的薄層色譜 1.桔梗對照藥材 2.樣品 3.缺桔梗陰性對照；圖2 黃芩苷的薄層色譜 1.黃芩苷對照品 2.樣品 3.缺黃芩陰性對照；圖3 甘草苷的薄層色譜 1.甘草苷對照品 2.樣品 3.缺甘草陰性對照

3 討論

經(jīng)過查閱文獻(xiàn)資料[6-9]，本研究分別對桔貝合劑中的桔梗、黃芩、甘草3味藥材進(jìn)行了TLC鑒別研究。在桔梗的薄層色譜鑒別中，比較了三氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯的提取效果，結(jié)果乙酸乙酯提取雜質(zhì)少，斑點(diǎn)清晰；并比較了三氯甲烷-甲醇、三氯甲烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯等不同展開系統(tǒng)的展開效果，結(jié)果三氯甲烷-甲醇展開效果好，分離度好，陰性無干擾，因此可作為桔貝合劑中桔梗的鑒別方法。

在黃芩的薄層色譜鑒別中，參照文獻(xiàn)中含量測定的研究，選擇主成分黃芩苷作為對照品，甲醇超聲提取30分鐘，并參照藥典標(biāo)準(zhǔn)，選擇乙酸乙酯-甲酸為展開劑，考察了不同比例的展開效果，結(jié)果以比例為5:1最佳，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液顯色后，主斑點(diǎn)位置上顯墨綠色斑點(diǎn)，分離效果好。

在甘草的薄層色譜鑒別中，選取甘草中的主成分甘草苷作為對照品，比較甲醇、正丁醇、乙酸乙酯的提取效果，結(jié)果以正丁醇提取效果比較明顯；考察了正己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸及三氯甲烷-甲醇-水兩個(gè)展開系統(tǒng)不同組分比例的展開影響，結(jié)果以三氯甲烷-甲醇-水（40:10:1）最優(yōu)。試驗(yàn)中點(diǎn)樣量均按一定梯度點(diǎn)樣，選擇合適的點(diǎn)樣量。

4 結(jié)論

本研究建立的桔貝合劑中桔梗、黃芩、甘草的TLC鑒別方法，快捷有效，斑點(diǎn)清晰，經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)證明方法可靠，穩(wěn)定，陰性未見干擾，可用于桔貝合劑的質(zhì)量控制。