張君勝, 解慧梅, 徐 盼, 倪黎綱, 陳恒光, 周春寶
(江蘇農牧科技職業學院, 江蘇 泰州 225300)
蘇姜豬是以姜曲海豬、杜洛克豬為親本培育而成的優質瘦肉型新品種豬,于2013年8月通過國家畜牧種質資源委員會審定,獲得了畜禽新品種證書[1]。保育豬是指從斷奶到70日齡的豬只。保育豬在斷奶后機體各方面的機能均發生很大的變化,這一時期豬抗寒能力差、消化機能不完善、抵抗力和器官生長發育迅速[2]。斷奶后保育豬會產生應激反應,再加上早期教槽和過分疫苗免疫等影響,對斷奶仔豬的生長發育及后期生長發育均產生非常不利的影響[3]。即使仔豬出生時的初生重和活力都合格,若產后飼養管理不當或其他原因,仔豬會逐漸消瘦形成后天弱仔[4],直接影響仔豬后期的成活率、料肉比以及健康狀況。為了使保育豬健壯生長,國內外進行了很多研究[5-6],但是針對弱仔豬與健壯仔豬器官發育差異的研究較少。因此,選擇同期斷奶體型與健壯狀況相似的仔豬,采用相同的飼養管理方法,分析達到保育結束時形成的弱仔與健壯仔豬的組織器官生長發育的差異,尋找弱仔形成的內在原因,為蘇姜豬弱仔預防和救治提供依據。
在江蘇蘇姜種豬有限公司正常飼養標準條件下,選擇出生日齡相近、同期斷奶、斷奶重與健壯狀況一致的豬只100頭。斷奶仔豬保育期飼養條件一致,全期采用嘉吉飼料有限公司全價保育料飼喂,營養充足,飲水正常,有合理光照時間和運動休息,保育期42 d,其間淘汰發病豬。
在保育期結束前1 d統一稱重,挑選活力充足,精神條件良好,體重最重的4頭仔豬作為健壯仔豬;選擇飼養過程中無明顯疾病且體重最小的4頭仔豬為弱仔豬;仔豬均斷食12 h后宰殺,宰前空腹稱重。仔豬采用頸靜脈放血法致死后,沿腹腔中線打開腹腔,并結扎賁門瓣、油燜瓣、直腸遠端、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸,然后取出心、肝、脾、肺、腎、胰腺、小腸、大腸、胃,其中,心、肝、脾、肺、腎、胰腺去除多余脂肪和組織,用吸水紙吸取血水后在電子天平上稱重。胃沖洗干凈,去除內容物后稱重,小腸和大腸各段去除內容物,處理干凈后稱重。稱重后立即取各器官的1 cm×1 cm×2 cm大小的組織加入盛有10%福爾馬林溶液的收集管中保存固定,制備組織石蠟切片。如器官表面血水過多,可先用0.9%的氯化鈉溶液沖洗后吸水干凈再進行稱重和其他處理。
對組織樣品進行切片的作HE染色,并在顯微鏡下進行結構觀察、圖像選擇、采集及分析。采集過程中,小腸粘膜和絨毛圖片要求絨毛排列、走向、伸展平直、整齊。測定胃、小腸、盲腸、直腸的粘膜厚度,小腸的絨毛長度(VL)和隱窩深度(CD),絨毛長度以腸腺開口至絨毛頂端垂直高度為準,隱窩深度以腸腺開口至最底部垂直深度為準。
以臟器指數、臟腦指數為指標,分析各器官發育差異。胃粘膜厚度、腸粘膜厚度、小腸絨毛長度、隱窩深度采用平均數±標準差表示,使用IBM公司的SPSS 19.0進行統計,差異顯著性分析采用t-檢驗分析,P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著。
臟器指數=臟器重量/體重
臟腦指數=臟器重量/腦重
從表1看出,蘇姜豬保育豬的體重健壯仔豬極顯著重于弱仔豬。臟器重健壯仔豬的重于弱仔豬,其中,腎臟、脾臟和胸腺重健壯豬顯著重于弱仔豬。臟器指數中,腦、肝臟、脾臟、胃、心臟、肺臟、腎臟等健壯豬低于弱仔豬;腦指數健壯豬極顯著低于弱仔豬,脾指數健壯豬顯著低于弱仔豬。臟腦指數中,健壯豬的胸腺指數顯著大于弱仔豬,肝臟、胸腺、脾臟、胃、心、腎指數大于弱仔豬,胃和肺指數小于弱仔豬。

表1 弱仔豬與健壯仔豬體重、主要器官重量及指數
經對健壯豬與弱仔豬主要器官組織切片的顯微觀察,腦、肝臟、胃、腎臟、脾臟、心臟等組織結構基本正常,未見明顯病理變化。胸腺切片弱仔豬的胸腺邊緣區較薄,淋巴細胞較稀疏,凋亡小體較多;健壯豬的胸腺邊緣區較厚,淋巴細胞密集,凋亡小體較少(圖1)。弱仔豬的肺臟肺泡擴張,較多炎性細胞(圖2);健壯豬肺臟組織結構基本正常,可見局部充血和少量炎性細胞。
從表2看出,健壯仔豬胃腸道粘膜厚度極顯著高于弱仔豬;十二指腸、空腸、回腸的絨毛長度健壯仔豬極顯著高于弱仔豬,隱窩深度則是弱仔豬極顯著或顯著高于健壯仔豬。從圖3看出,健壯仔豬十二指腸腺體更加發達,絨毛膜的杯狀細胞(golblet cell,GC)較少。相比之下,弱仔豬組部分粘膜上皮細胞脫落、有炎性細胞增多,絨毛膜的杯狀細胞增多,弱仔豬組較健壯仔豬相比,杯狀細胞更加密。

表2 健壯仔豬和弱仔豬的胃腸粘膜厚度、絨毛長度和隱窩深度
斷奶仔豬的內臟器官特別是消化器官發育還不完善,在整個保育階段還處于快速發育期[7]。王宵燕等[8]研究發現,蘇姜豬各器官重量隨日齡的增加與體重呈正比。脾臟是豬體內最大的外周免疫器官,脾臟的發育受損將影響豬機體免疫功能的正常發揮[9]。胸腺是豬重要的中樞免疫器官,具有建立機體免疫功能及重建受損免疫功能的作用,豬的免疫抑制和胸腺破壞有關,如果胸腺發育受阻豬體將無法建立正常的免疫系統[10]。免疫器官質量的增加是生長發育快的表現,而免疫器官指數的提高則說明免疫系統成熟較快[11]。路兵龍等[9]研究發現,添加腸道保健劑能改善弱仔豬的生長性能,弱仔豬脾臟重量增加。陳佳力等[11]研究發現,苯甲酸提高斷奶仔豬生長性能的同時各種臟器重量均有所增加。本研究也表明,弱仔豬免疫器官重量顯著低于健壯仔豬,這也說明弱仔豬健壯水平低于健壯仔豬,容易發病。臟器指數受到體重的影響,體重越大,臟器指數越小,說明指數略大于健壯仔豬,說明弱仔豬的臟器發育對臟器指數的影響要小于體重影響。
腦作為機體的重要器官,腦重量受外界影響較小[12]。程光等[13]以大鼠為動物模型,研究模擬井下被困斷食后體重與腦重量相關性發現,斷食7 d前腦重量與正常腦重量間無顯著差異。本研究中,弱仔豬臟腦指數極顯著大于健壯仔豬,結合器官重量和體重差異分析,腦重量不易受外界因素影響,而弱仔豬體重極顯著低于健壯仔豬,故認為腦的臟器指數差異主要受體重影響,這一結論與孫建新等[12]觀點一致。臟腦指數方面,健壯仔豬與弱仔豬僅胸腺指數差異顯著,這與直觀的解剖結果一致,原因是健壯豬的胸腺往往發育良好,無病變,弱仔豬胸腺發育不良,形態較小。研究也表明,循環系統器官(肝臟,心臟,腎臟,肺臟)在臟器指數和臟腦指數方面差異不顯著,這也說明當豬早期生長發育受阻時,循環器官等內臟器官優先生長。
胸腺是豬最早發育的中樞免疫器官,是T 淋巴細胞分化、發育成熟的場所。胸腺實質由中心部分的髓質和外周部分的皮質組成,仔豬出生時胸腺皮質主要由大量淋巴細胞及少量上皮細胞組成[14],直到12月齡腺細胞數量有所減少,排列比較疏松[15]。FENG等[16]研究發現,斷奶仔豬在感染高致病性豬藍耳病毒后,胸腺萎縮顯著,且在感染的胸腺中發現有大量淋巴細胞凋亡,證明仔豬的免疫抑制與胸腺細胞凋亡有關[16]。本研究中,弱仔豬與健壯仔豬相比胸腺邊緣區較薄,淋巴細胞較稀疏,凋亡小體較多,說明弱仔豬存在胸腺萎縮現象,而胸腺萎縮導致弱仔無法建立正常的免疫系統,更容易感染疾病,死淘率增加。金文等[17]研究發現,蘇姜豬保育期是肺炎支原體的次高發期,這與本研究中蘇姜豬弱仔豬肺部均有不同程度的病變結果相同。當弱仔豬免疫受到抑制后肺部病變更加嚴重,而健壯仔豬病變很輕微。
豬的胃腸道粘膜具有消化吸收營養物質和粘膜免疫的功能,腸道功能完整性是豬達到最佳的胃腸道結構和功能的一種重要因素[18]。早期斷奶過程中豬的胃腸道會發生形態改變,胃腸粘膜的免疫屏障功能會受到不同程度的破壞[19],早期斷奶仔豬胃腸道粘膜被破壞后更容易腹瀉且生長性能降低[20],在胃腸道屏障、免疫和腸神經系統功能方面的胃腸道功能紊亂可持續到成年期[21]。王霄燕[22]研究發現,蘇姜豬仔豬胃粘膜厚度受到斷奶應激影響較大。本研究表明,弱仔豬胃腸粘膜厚度極顯著低于健壯仔豬,說明弱仔豬在斷奶過程中受到的應激可能更大,胃腸道粘膜系統損傷大,恢復慢,后期易發病。
小腸杯狀細胞(golblet cell,GC)是腸黏膜上皮中分泌黏液的細胞,GC對腸黏膜損傷后的修復重建起重要作用,當腸黏膜遭到嚴重損傷后,腸黏膜表面幾乎由GC代替脫落的腸絨毛,在腸黏膜損傷的后期,GC數量會出現下降[23],GC增生通常是疾病的主動感染或消退的組成部分[24]。胡艷欣等[25]研究發現,受到熱應激仔豬腸道粘膜受到嚴重損傷,GC顯著增加。顧憲紅等[26]研究發現,斷奶越早的仔豬斷奶時腸道GC增加越顯著。本研究發現弱仔豬腸道粘膜GC增多,也說明弱仔豬受到斷奶應急較大,腸道健壯狀況較差。小腸是營養消化和吸收的主要場所,小腸絨毛長度和隱窩深度是反映腸上皮細胞的成熟度及小腸營養吸收能力的最常用指標,絨毛越長、隱窩越淺代表腸道消化吸收營養物質的能力越強[27]。研究表明,弱仔豬小腸絨毛長度極顯著的低于健壯仔豬,隱窩深度極顯著的大于健壯仔豬,說明弱仔豬腸道消化吸收能力嚴重受損,消化吸收能力顯著低于健壯仔豬。
綜上所述,相較于健壯仔豬,蘇姜弱仔豬胸腺、脾臟、胃腸粘膜等免疫器官發育較差,機體免疫力差,更易感染疾病,腸道消化吸收能力較差,所以生長發育受阻。針對弱仔豬的救治和預防可采取粥料過度模式[28],或在飼料中添加谷氨酰胺、殼寡糖、維生素C、乳酸、益生菌制劑等[9,29-30]均可減小斷奶應急,促進仔豬內臟器官及胴體的生長發育,提高保育仔豬生長性能,增強免疫能力,而且能夠提高小腸絨毛長度、降低隱窩深度,有利于維護小腸黏膜的完整性、提高其消化吸收功能。因此,可參考上述方法以提高蘇姜豬的生長性能。