高效液相色譜法測定蘇佛順氣顆粒中橙皮苷含量

彭藝飛，李佳霖

（四川省樂山市中醫(yī)醫(yī)院，四川 樂山 614000）

蘇佛順氣顆粒為樂山市中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，由佛手、紅參、川貝母、檀香、木蝴蝶、紫蘇梗等中藥材組方，為棕色顆粒，氣微香，味微苦，主要用于治療胃脘脹滿、食欲不振、大便溏薄等癥［1-3］，用于氣虛型胃炎，癥見神疲乏力。佛手為方中主藥，性溫，味辛、苦、酸，歸肺經(jīng)、脾經(jīng)、肝經(jīng)［4-6］。橙皮苷為佛手的主要化學(xué)成分，其含量能有效反映佛手的質(zhì)量差異。為更好地控制蘇佛順氣顆粒的質(zhì)量，建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，參考文獻(xiàn)［7-10］，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法對其主藥佛手中指標(biāo)性成分橙皮苷進(jìn)行了含量測定。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；ESJ220-4A 型電子分析天平（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司，精度為萬分之一）；MJ100 型超聲波清洗機(jī)（無錫市美極超聲設(shè)備有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）；PH-1C 型pH 計（上海智光儀器儀表有限公司）；恒溫水浴鍋（上海析達(dá)儀器有限公司）。

1.2 試藥

橙皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定研究院，批號為181033-101125，純度為96%）；甲醇（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；冰乙酸、乙醇（成都市科龍化工試劑廠）；蘇佛顆粒（四川省樂山市中醫(yī)醫(yī)院自制，批號分別為190329，190407，190418，190426，190507，190516）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

稱取橙皮苷對照品10 mg，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加入甲醇使其溶解，并稀釋至刻度（質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL），搖勻，放置，作為對照品貯備液。取1 mL，置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液（質(zhì)量濃度為100 μg/mL）。稱取樣品5 g，精密稱定，研碎，放入瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)瓷鲜龇椒ɡ^續(xù)提取2 次，合并濾液，即得供試品溶液。另取不含佛手樣品的其他組分中藥材，按院內(nèi)制劑處方工藝及生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，制備不含佛手成分的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-冰乙酸-水（33 ∶65 ∶2，V/ V/ V，pH=7.6）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：28 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，分別取2.1 項(xiàng)下3 種溶液進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果陰性對照品溶液在橙皮苷出峰處無相應(yīng)色譜峰。色譜圖見圖1。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取0.2，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0 mL 對照品溶液，分別置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋定容，搖勻，分別取10 μL 注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1 995X-135.8，r=0.999 5（n=6）。結(jié)果表明，橙皮苷質(zhì)量濃度在2.0 ～4.0 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：取同一對照品溶液，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6 次，記錄色譜圖。結(jié)果的RSD為1.34%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品（批號為190329）適量，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h 時按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定。結(jié)果的RSD為2.07%（n=6），表明供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號為190329）適量，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定，記錄峰面積，計算橙皮苷含量。結(jié)果平均含量為3.201 mg/g，RSD為1.66%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取同一批（批號為190329）樣品6 份，每份0.3 g，精密加入對照品溶液0.2 mL，依法制備供試品溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取6 批（批號分別為190329，190407，190418，190426，190507，190516）樣品，依法制備供試品溶液，并連續(xù)進(jìn)樣測定，記錄峰面積，根據(jù)線性回歸方程計算橙皮苷含量。結(jié)果6 批樣品的含量分別為1.246，1.365，1.208，1.462，1.312，1.525 mg/g。由于每批藥材產(chǎn)地和生產(chǎn)周期不同，其含量略有差異，但均符合院內(nèi)制劑相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

佛手有疏肝理氣、和胃止痛、改善氣血、提高免疫、止咳平喘祛痰等功效，屬理氣藥［10］。為避免藥物成分之間相互干擾，故設(shè)計了陰性對照品試驗(yàn)。本研究中采用對佛手中橙皮苷的含量測定作為蘇佛順氣顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一［11］。結(jié)果顯示，橙皮苷在陰性對照品試驗(yàn)中有突出的特征峰，易判別。

目前，對于佛手中橙皮苷的檢測，方法較成熟，參考鐘艷梅等［12］的檢測方法中以甲醇-冰乙酸-水為流動相，參考其比例和pH，選擇甲醇-水-冰乙酸（33 ∶65 ∶2，V/ V/ V）及pH=7.6 的條件下，與其他成分順利洗脫，得到橙皮苷線性回歸方程。橙皮苷屬易揮發(fā)物質(zhì)，因此在制備供試品溶液時，溫度應(yīng)低于60 ℃，避免橙皮苷隨高溫而揮發(fā)。本試驗(yàn)中采用HPLC 法測定蘇佛順氣顆粒中主藥佛手中指標(biāo)性成分橙皮苷的含量，陰性無干擾，方法重復(fù)性好，具有可操作性，可用于蘇佛順氣顆粒的含量測定及質(zhì)量控制。