凡納濱對蝦連續3個世代選育群體的遺傳多樣性分析
2020-08-11 07:39:43彭敏陳慧芳李強勇楊春玲曾地剛劉青云趙永貞陳曉漢林勇陳秀荔
南方農業學報 2020年6期
彭敏 陳慧芳 李強勇 楊春玲 曾地剛 劉青云 趙永貞 陳曉漢 林勇 陳秀荔
摘要：【目的】明確凡納濱對蝦連續3個世代選育群體的遺傳變異情況及近親繁殖對個體生長速度和抗病性的影響，為凡納濱對蝦種質改良提供理論依據。【方法】從GenBank收錄的微衛星（SSR）引物序列中篩選11對能有效擴增的SSR引物，對2016—2018年桂海1號凡納濱對蝦連續3個世代選育群體（合計853個樣品）進行遺傳多樣性分析，監測相鄰2個世代選育群體間的遺傳變異情況。【結果】11對SSR引物在凡納濱對蝦連續3個世代選育群體中共檢測到103個等位基因，各SSR位點的等位基因數（Na）平均為9.3636個，有效等位基因數（Ne）平均為3.8355個，觀測雜合度（Ho）平均為0.4794，期望雜合度（He）平均為0.7074，多態信息含量（PIC）平均為0.6708;除TUMXLv10.33位點呈中度多態性（0.25
關鍵詞： 凡納濱對蝦;選育群體;微衛星（SSR）分子標記;遺傳多樣性;遺傳變異
Abstract：【Objective】To clarify the genetic variation of three consecutive generations of? Litopenaeus vannamei and the influence of inbreeding on individual growth rate and disease resistance， and provide a theoretical basis for the improvement of L. vannamei germplasm. 【Method】Using 11 pairs of effectively amplified SSR primers selected from the sequence of microsatellite（SSR） primers collected by GenBank， the genetic diversity of L. vannamei Guihai No.1 breeding population for three consecutive generations （2016-2018） （853 samples） was analyzed to monitor the genetic diversity between two adjacent generation breeding populations. 【Result】Using the 11 pairs of SSR primers， 103 alleles were detec-ted in the three consecutive L. vannamei generations. The average number of alleles（Na） at each SSR locus was 9.3636， and the average number of effective alleles（Ne） was 3.8355， the average observed heterozygosity（Ho） was 0.4794， the average expected heterozygosity（He） was 0.7074， and the average polymorphic information content（PIC） was 0.6708; except that TUMXLv10.33 locus was moderately polymorphic（0.25
Key words： Litopenaeus vannamei; breeding population; microsatellite（SSR） molecular marker; genetic diversity; genetic variation
0 引言
【研究意義】凡納濱對蝦（Litopenueus vannamei）又稱南美白對蝦，原產于秘魯至墨西哥太平洋沿岸，1988年中國科學院海洋研究所首次引進凡納濱對蝦，并于1992年突破人工繁殖技術難關，之后凡納濱對蝦在全國范圍內大面積推廣養殖，現已發展成為我國對蝦養殖的主導品種（王興強等，2004;陳錨等，2008;黃薇等，2014）。但目前我國凡納濱對蝦養殖的良種覆蓋率較低，大多數對蝦養殖場使用的蝦苗是從美國進口雜交種的數代甚至十幾代孵化苗種，其生長性能和抗逆性嚴重退化，蝦病發生率高，導致對蝦養殖經濟效益急劇下降。加之世界各國對知識產權保護意識的增強，嚴格限制原種親蝦出口，致使我國凡納濱對蝦養殖業面臨嚴峻挑戰。因此，亟待我國科學家開展凡納濱對蝦品種選育，培育出具有自主知識產權的優良品種。【前人研究進展】微衛星（SSR）分子標記具有簡便、快速、穩定性好等優點，在水產生物的親緣關系鑒定、系統發育進化分析、種群遺傳結構、遺傳連鎖圖譜構建及遺傳變異等研究領域發揮著重要作用（Wolfus et al.，1997;Valles-Jimenez et al.，2004;Zhang et al.，2007;王霞等，2009;董在杰等，2010）。至今，有關SSR分子標記在凡納濱對蝦上的應用研究已有較多報道。童馨等（2009）采用SSR分子標記對凡納濱對蝦4個世代7個養殖群體進行遺傳多樣性分析;謝麗等（2009）對凡納濱對蝦4個選育群體進行遺傳多樣性SSR分析;馬春燕等（2011）基于8個高多態性的SSR位點分析凡納濱對蝦引進親蝦群體及引進親蝦子一代、子二代群體的遺傳變異情況;包秀鳳（2014）采用7對SSR引物對國內3個養殖群體及4個引進親蝦子一代群體的遺傳多樣性進行分析;Zhang等（2014）利用7個SSR分子標記分析從新加坡和美國引進凡納濱對蝦7個群體的種質特性;吳怡迪等（2016）采用SSR分子標記對凡納濱對蝦4個群體和1個美國引進群體的遺傳結構和遺傳多樣性進行分析，旨在監測各凡納濱對蝦群體的遺傳變異情況;楊銘等（2017）基于轉錄組數據開發出凡納濱對蝦SSR分子標記，進而對凡納濱對蝦進行遺傳多樣性分析;李東宇等（2017）對凡納濱對蝦選育群體與雜交群體進行遺傳多樣性分析，同時利用13個SSR分子標記對2個子代群體進行遺傳多樣性及遺傳分化研究，結果表明雜交群體較選育群體具有更豐富的遺傳多樣性;劉洪濤等（2018）選用15對多態性較高的SSR引物對凡納濱對蝦8個地理群體的遺傳多樣性和親緣關系進行分析，以期為海南凡納濱對蝦的育種提供科學依據;陳錦豪等（2019）選用8對SSR引物對廈門市凡納濱對蝦5個親蝦群體進行遺傳多樣性分析，旨在明確凡納濱對蝦親蝦群體的遺傳結構、種質資源狀況及近交程度，為該地區凡納濱對蝦種質資源的提純、保優、復壯及遺傳選育提供參考依據;黃小帥等（2019）利用SSR分子標記分析凡納濱對蝦7個引進群體子一代的遺傳多樣性，為后續挖掘種苗遺傳背景與其養殖性能的關聯性提供理論參考。【本研究切入點】在人工培育優良品種的過程中，利用分子標記監測相鄰2個世代間的遺傳變異，或監控近交對個體生長率和抗病力的影響，對保護凡納濱對蝦遺傳多態性、防止種質資源退化，以及明確育種親本間的親緣關系具有重要意義。其中，利用SSR分子標記對群體間進行遺傳多樣性和遺傳結構差異性分析，不僅有助于對選育群體進行遺傳多樣性監測，還對親本群體選擇具有指導作用（Cruz et al.，2004）。廣西水產科學研究院在引進美國凡納濱對蝦原種的基礎上，通過近十年的群體繼代和家系選育，選育出桂海1號凡納濱對蝦耐寒家系（趙永貞，2014），但至今鮮見針對其連續世代選育群體進行遺傳多樣性分析，育種親本間的親緣關系尚未明確。【擬解決的關鍵問題】以廣西水產科學研究院凡納濱對蝦育種中心選育建立的凡納濱對蝦耐寒家系為試驗材料，利用11對SSR引物對8個耐寒家系2016—2018年連續3年的凡納濱對蝦選育親本進行群體遺傳多樣性分析，監測相鄰2個世代選育群體間的遺傳變異情況及近親繁殖對個體生長速度和抗病性的影響，為凡納濱對蝦種質改良提供理論依據。
1 材料與方法
1. 1 樣品來源及其基因組DNA提取
凡納濱對蝦樣本來源于廣西水產科學研究院凡納濱對蝦育種中心2016—2018年用于選擇育種的親本群體，分別屬于3個世代，合計853個樣品（尾）。剪取凡納濱對蝦肌肉組織，經液氮速凍后置于-80 ℃冰箱保存備用。采用醋酸銨法提取凡納濱對蝦肌肉組織DNA：稱取肌肉組織100 mg，加入600.0 μL DNA提取緩沖液，剪碎后加入12.0 μL 20 mg/mL蛋白酶K（終濃度400 μg/mL），充分混勻后放入56 ℃水浴鍋中溫浴5 h或過夜;取出冷卻至室溫，加入200.0 μL 7.5 mmol/L醋酸銨溶液，顛倒混勻2 min，14000 r/min離心5 min，收集上清液，裝入新的離心管中。加入等體積預冷異丙醇，-80 ℃靜置15 min后14000 r/min離心5 min，沉淀用70%酒精洗滌2次;自然干燥后，加入100.0 μL滅菌ddH2O，加入1.0 μL 10 mg/mL胰RNA酶，37 ℃水浴30 min。采用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA完整性，以蛋白核酸分析儀檢測其濃度，并稀釋至100 ng/μL，-20 ℃保存備用。
1. 2 SSR引物篩選及合成
根據本課題組的前期研究（彭敏等，2014），從GenBank收錄的14對SSR引物中選取11對能有效擴增的SSR引物（表1），用于凡納濱對蝦連續3個世代選育群體的遺傳多樣性分析。其中，上游引物5'端分別加FAM、HEX和TAMAR等熒光標記。所有SSR引物均委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。
1. 3 PCR擴增及多態性分析
PCR反應體系20.0 μL：2×ES Taq MasterMix 5.0 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.4 μL，DNA模板2.0 μL，超純水補足至20.0 μL。擴增程序：94 ℃預變性3 min;94 ℃ 45 s，48～62 ℃（表1）45 s，72 ℃ 45 s，進行35個循環;72 ℃延伸5 min。PCR擴增產物送至北京基諾博實生物技術有限公司，采用ABI 3130自動測序分析儀GeneScan進行測序分析。在進行大樣本測序分析前，每對SSR引物擴增少量樣品進行預測序分析。
1. 4 統計分析
采用GeneMarker 3.0.0對測序結果進行分析，記錄各SSR位點不同個體的等位基因和基因型。使用PopGene 1.32計算每個SSR位點的等位基因頻率（Allele frequency）、等位基因數（Observed number of alleles，Na）、有效等位基因數（Effective allele number，Ne）、觀測雜合度（Observed heterozygosity，Ho）、期望雜合度（Expected heterozygosity，He）及Hardy-Weinberg平衡遺傳偏離概率（PHWE），根據Nei的方法計算不同群體間的遺傳距離、遺傳分化系數（Fst）及近交系數（Fis），并以PIC-Calc 0.6對獲得的等位基因頻率進行多態信息含量（Polymorphism information content，PIC）計算（Nagy et al.，2012）。
2 結果與分析
2. 1 11對SSR引物的特異性擴增結果
采用11對SSR引物對桂海1號凡納濱對蝦DNA混池進行PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳結果顯示，均能擴增出特異性的目的條帶（圖1），與預期結果相符。
2. 2 凡納濱對蝦遺傳多樣性分析結果
11對SSR引物在凡納濱對蝦連續3個世代選育群體中共檢測到103個等位基因，各SSR位點的Na為6～14個，平均為9.3636個;Ne為1.9734～4.9414個，平均為3.8355個;Ho為0.1040～0.8070，平均為0.4794;He為0.4935～0.8647，平均為0.7074;PIC為0.4641～0.8509，平均為0.6708（表2）。
凡納濱對蝦連續3個世代選育群體在11個SSR位點上的遺傳多態性分析結果（表3）表明，2016年選育群體的Na為5～13個，平均為8.7272個;Ne介于1.8121～7.1520個，平均為3.8676個。2017年選育群體的Na為5～11個，平均為7.3636個;Ne介于2.1180～7.5242個，平均為3.7654個。2018年選育群體的Na為5～12個，平均為8.0000個;Ne介于1.9335～7.0199個，平均為3.8010個。根據Botstein等（1980）的判斷標準，當PIC>0.50時，為高度多態性;當0.25 2. 3 凡納濱對蝦遺傳分化分析結果 凡納濱對蝦連續3個世代選育群體在不同SSR位點上的遺傳分化參數見表4。其中，凡納濱對蝦連續3個世代選育群體在11個SSR位點上的Fst為0.0011～0.0113，均小于0.0500，表明凡納濱對蝦群體的遺傳分化很小;凡納濱對蝦群體內Fis介于-0.0101～0.8098，平均為0.3543，且除C11654位點為負值外，其余SSR位點均為正值，表明凡納濱對蝦連續3個世代選育群體的近交程度較高。 在凡納濱對蝦連續3個世代選育群體中，2016年選育群體與2017年選育群體和2018年選育群體間的Fst分別為0.0056和0.0037，其遺傳分化均達極顯著水平（P<0.01）;2017年選育群體與2018年選育群體間的Fst為0.0007，遺傳分化差異不顯著（P>0.05）。對凡納濱對蝦連續3個世代選育群體進行分子方差分析（AMOVA），結果發現69.78%的遺傳變異來源于凡納濱對蝦個體內，而29.96%的變異來源于凡納濱對蝦個體間（表5），即凡納濱對蝦個體內的遺傳變異大于個體間的遺傳變異。 2. 4 UPGMA聚類分析結果 基于個體間的遺傳距離，通過PHYLIP v3.5對2016年選育群體（234尾凡納濱對蝦）進行UPGMA聚類分析，結果表明234個樣品間的最大遺傳距離為3.5835，最小遺傳距離為0.0000，平均為1.4894。2017年選育群體（341尾凡納濱對蝦）的UPGMA聚類分析結果表明，341個樣品間的最大遺傳距離為3.6606，最小遺傳距離為0.0000，平均為1.0758。2018年選育群體（278尾凡納濱對蝦）的UPGMA聚類分析結果表明，278個樣品間的最大遺傳距離為3.6632，最小遺傳距離為0.0000，平均為1.0099。 3 討論 遺傳多樣性是物種適應復雜多變環境、維持生存和進化的基礎，遺傳變異程度直接影響物種進化潛力及其對環境變化的適應能力（O'Connell and Wright，1997;張文靜等，2003;崔蕾等，2012）。Na、PIC及遺傳雜合度（H）等遺傳參數均是檢測種群遺傳多樣性的主要指標（頡曉勇等，2008;劉海情等，2012;李建林等，2015;葉寧等，2017）。其中，Na是衡量群體遺傳變異的重要指標，其數值越接近所檢測到的等位基因絕對數，表明等位基因在群體中分布越均勻。PIC是描述SSR位點多態性的重要參數，反映子代所獲得的某個等位基因標記來源于其親代同一個等位標記的可能性（劉麗和劉楚吾，2006），即表征物種的遺傳變異程度。本研究結果表明，11個SSR位點在凡納濱對蝦連續3個世代選育群體中的Na為6～14個，平均為9.3636個，達到用于遺傳多樣性評估的標準，即每個SSR位點至少要有4個等位基因（Wajid et al.，2014）。Botstein等（1980）認為，0.25 H是衡量群體遺傳變異的最適參數，是指所檢測SSR位點上雜合子基因型占該位點所有基因型的比例，主要反映群體的遺傳變異程度（Shikano and Taniguchi，2002;李莉等，2006）。H和PIC均能反映群體內的個體遺傳變異程度，且數值高低與遺傳變異程度呈正相關。本研究結果表明，2016年選育群體的Ho介于0.1288～0.7632，平均為0.3975，He介于0.4492～0.8621，平均為0.7057;2017年選育群體的Ho介于0.1026～0.8673，平均為0.5224，He介于0.5286～0.8684，平均為0.7057;2018年選育群體的Ho介于0.0846～0.7698，平均為0.4876，He介于0.4837～0.8592，平均為0.7029。說明凡納濱對蝦連續3個世代選育群體具有較高的遺傳多樣性水平。Ho低于He，則雜合度偏離指數（D）為負值（唐江等，2018），表明凡納濱對蝦連續3個世代選育群體存在雜合子缺失現象，與Valles-Jimenez等（2004）的研究結果一致。雜合子缺失現象可能是研究對象數量有限、近親雜交或人為干擾等因素引起稀有堿基缺失所致（Antoro et al.，2006）。Hardy-Weinberg平衡檢驗是評估樣本代表性及其基因分型質量的重要工具（Crane et al.，2004;陳靜等，2018）。本研究中，凡納濱對蝦連續3個世代選育群體有嚴重偏離Hardy-Weinberg平衡狀態的傾向，表明凡納濱對蝦群體遺傳結構處于相對不穩定的狀態。由于群體小、近親交配及等位基因突變等均可導致所檢測種群基因型偏離Hardy-Weinberg平衡（宋煒等，2017），因此，凡納濱對蝦連續3個世代選育群體樣本小及選育過程中存在近親繁殖可能是造成偏離Hardy-Weinberg平衡的主要原因。 Fst是反應群體間遺傳分化的重要指標（李建林等，2015;于思夢等，2017），而Fis是衡量群體遺傳動態的重要指標（劉海情等，2012）。凡納濱對蝦連續3個世代選育群體在11個SSR位點上的Fst為0.0011～0.0113，均小于0.0500，表明凡納濱對蝦群體的遺傳分化很小;凡納濱對蝦群體內的Fis介于-0.0101～0.8098，平均為0.3543，且除C11654位點為負值外，其余SSR位點均為正值，表明凡納濱對蝦連續3個世代選育群體的近交程度較高，雜合子缺失可能與近親交配有關。AMOVA分析結果表明，69.78%的遺傳變異來源于凡納濱對蝦個體內，而29.96%的變異來源于凡納濱對蝦個體間，說明凡納濱對蝦個體內的遺傳變異大于個體間的遺傳變異。綜上所述，本研究中的凡納濱對蝦連續3個世代選育群體親緣關系較近，可能與凡納濱對蝦群體存在近交現象及群體樣本小有關，但具體原因有待進一步探究。 4 結論 桂海1號凡納濱對蝦各世代選育群體尚具有較豐富的遺傳變異，但群體遺傳結構處于不穩定狀態。因此，今后應通過人工選育方式保留有利突變、淘汰有害突變，同時避免近親繁殖，或引進優質品種進行雜交以擴充基因庫，保護凡納濱對蝦的遺傳多樣性，防止種質退化。 參考文獻： 包秀鳳. 2014. 凡納濱對蝦選育群體遺傳多樣性分析[D]. 湛江：廣東海洋大學. [Bao X F. 2014. Analysis of genetic diversity of selected stocks of Litopenaeus vannamei[D].Zhanjiang：Guangdong Ocean University.] 陳錦豪，鄭錦濱，王攀攀，李天驕，毛勇，蘇永全，王軍. 2019. 凡納濱對蝦養殖親本群體遺傳多樣性分析[J]. 漁業研究，41（1）：1-10. [Chen J H，Zheng J B，Wang P P，Li T J，Mao Y，Su Y Q，Wang J. 2019. Analysis for genetic diversity of broodstock populations of breeding Litopenaeus vannamei[J]. Journal of Fisheries Research，41（1）：1-10.] 陳靜，何吉祥，樊佳佳，黃龍，吳本麗，宋光同，汪翔，武松. 2018. 草魚MyoD基因SNP和Indel標記的篩選及其與生長性狀的關聯分析[J]. 江蘇農業學報，34（3）：612-616. [Chen J，He J X，Fan J J，Huang L，Wu B L，Song G T，Wang X，Wu S. 2018. Screening of SNP and Indel mar-ker of MyoD gene and its association with growth traits in Ctenopharyngodon idella[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，34（3）：612-616.] 陳錨，吳長功，相建海，黃皓，劉小林，劉翠紅，何建國，孫成波. 2008. 凡納濱對蝦的選育與家系的建立[J]. 海洋科學，32（11）：5-8. [Chen M，Wu C G，Xiang J H，Huang H，Liu X L，Liu C H，He J G，Sun C B. 2008. Selective breeding and pedigree foundation of Litopenaeus vannamei[J]. Marine Sciences，32（11）：5-8.] 崔蕾，謝從新，李艷和，于永耀，劉肖蓮，張杰，周小云. 2012. 斑點叉尾鮰4個群體遺傳多樣性的微衛星分析[J]. 華中農業大學學報，31（6）：744-751. [Cui L，Xie C X，Li Y H，Yu Y Y，Liu X L，Zhang J，Zhou X Y. 2012. Analysis of genetic diversity among four different channel catfish populations by using microsatellite markers[J]. Journal of Huazhong Agricultural University，31（6）：744-751.] 董在杰，梁政遠，劉介奇，蘇勝彥，明俊超，曲疆奇，徐跑，謝莊. 2010. 我國新引進吉富品系尼羅羅非魚群體的遺傳多樣性分析[J]. 動物學雜志，45（5）：129-135. [Dong Z J，Liang Z Y，Liu J Q，Su S Y，Ming J C，Qu J Q，Xu P，Xie Z. 2010. Genetic diversity analysis in a newly introduced population of GIFT strain Nile tilapia（Oreochromis niloticus）[J]. Chinese Journal of Zoology，45（5）：129-135.] 黃薇，李劍鋒，張根玉，李永權，施永海，張海明，徐嘉波，駱志強. 2014. 池塘溫室南美白對蝦、羅氏沼蝦三茬輪養技術[J]. 中國水產，（6）：69-71. [Huang W，Li J F，Zhang G Y，Li Y Q，Shi Y H，Zhang H M，Xu J B，Luo Z Q. 2014. Three-crop rotation culture of Litopenaeus vannamei and Macrobrachium rosenbergii in pond greenhouse[J]. China Fisheries，（6）：69-71.] 黃小帥，徐煜，胡曉娟，徐武杰，蘇浩昌，文國樑，楊鏗，曹煜成. 2019. 利用微衛星標記分析7個凡納濱對蝦引進群體子一代的遺傳多樣性[J]. 南方水產科學，15（1）：54-62.[Huang X S，Xu Y，Hu X J，Xu W J，Su H C，Wen G L，Yang K，Cao Y C. 2019. Genetic diversity analysis of first filial generation of seven introduced Litopenaeus vannamei populations using microsatellite DNA markers[J]. South China Fisheries Science，15（1）：54-62.] 頡曉勇，蘇天鳳，陳文，張志，顏遠義，江世貴. 2008. 凡納濱對蝦6個養殖群體遺傳多樣性的比較分析[J]. 南方水產，4（6）：42-49. [Xie X Y，Su T F，Chen W，Zhang Z，Yan Y Y，Jiang S G. 2008. Analysis on genetic diversity of six cultured stocks of Litopenaeus vannamei[J]. South China Fisheries Science，4（6）：42-49.] 李東宇，孟憲紅，孔杰，欒生，曹寶祥，羅坤. 2017. 凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）選育群體與雜交群體遺傳多樣性差異及其在低溫條件下生長性能的比較[J]. 漁業科學進展，38（4）：69-77. [Li D Y，Meng X H，Kong J，Luan S，Cao B X，Luo K. 2017. The difference of genetic diversity and the comparison of growth performance between selected population and hybridized population of Pacific white shrimp（Litopenaeus vannamei） under low temperature conditions[J]. Progress in Fishery Sciences，38（4）：69-77.] 李建林，李紅霞，唐永凱，俞菊華，于凡. 2015. 利用微衛星標記分析兩個吉富羅非魚群體的遺傳差異[J]. 南方農業學報，46（1）：138-143. [Li J L，Li H X，Tang Y K，Yu J H，Yu F. 2015. Genetic difference analysis of two genetically improved farmedtilapia populations by using microsatellite marker[J]. Journal of Southern Agriculture，46（1）：138-143.] 李莉，孫振興，楊樹德，常林瑞，楊立紅. 2006. 用微衛星標記分析皺紋盤鮑群體的遺傳變異[J]. 遺傳，28（12）：1549-1554. [Li L，Sun Z X，Yang S D，Chang L R，Yang L H. 2006. Analysis of genetic variation of Abalone（Haliotis discus hannai） populations with microsatellite markers[J]. Genetics，28（12）：1549-1554.] 劉海情，郭昱嵩，王中鐸，劉麗，劉楚吾. 2012. 利用微衛星分析吉富羅非魚群體的遺傳多樣性[J]. 南方農業學報，43（1）：94-98. [Liu H Q，Guo Y S，Wang Z D，Liu L，Liu C W. 2012. Genetic diversity analysis amongst GIFT strains of Oreochromis niloticus using microsatellites[J]. Journal of Southern Agriculture，43（1）：94-98.] 劉洪濤，楊明秋，何玉貴，唐賢明. 2018. 凡納濱對蝦八個地理群體遺傳多樣性的微衛星分析[J]. 海南大學學報（自然科學版），36（2）：146-152. [Liu H T，Yang M Q，He Y G，Tang X M. 2018. Microsatellite analysis of genetic diversity in eight geographical populations of Litopenaeus vannamei[J]. Natural Science Journal of Hainan University，36（2）：146-152.] 劉麗，劉楚吾. 2006. 5種笛鯛屬魚類的遺傳多樣性及分子標記[J]. 農業生物技術學報，14（3）：349-355. [Liu L，Liu C W. 2006. Genetic diversity and molecular markers of 5 species of snappers[J]. Journal of Agricultural Biotechnology，14（3）：349-355.] 馬春艷，馬洪雨，馬凌波，楊柯. 2011.凡納濱對蝦引進群體和2個養殖群體遺傳變異的微衛星分析[J]. 海洋漁業，33（1）：1-8. [Ma C Y，Ma H Y，Ma L B，Yang K. 2011. Microsatellite analysis on genetic variation of imported Litopenaeus vannamei population and cultured stocks[J]. Marine Fisheries，33（1）：1-8.] 彭敏，陳秀荔，趙永貞，陳曉漢，李詠梅，楊春玲，何蘋萍，牛生洋. 2014. 熒光標記微衛星技術用于凡納濱對蝦不同家系親權關系鑒定[J]. 水生態學雜志，35（4）：60-67. [Peng M，Chen X L，Zhao Y Z，Chen X H，Li Y M，Yang C L，He P P，Niu S Y. 2014. Application of fluorescent labeled microsatellite technology in parentage analysis of Litopenaeus vannamei[J].Journal of Hydroecology，35（4）：60-67.] 宋煒，孟永永，蔣科技，趙明，任桂靜，張鳳英，馬凌波. 2017. 棘頭梅童魚七個野生群體遺傳多樣性的微衛星分析[J]. 水產學報，41（1）：31-39. [Song W，Meng Y Y，Jiang K J，Zhao M，Ren G J，Zhang F Y，Ma L B. 2017. Analysis of genetic diversity among seven wild Collichthys lucidus populations by using microsatellite marker[J]. Journal of Fisheries of China，41（1）：31-39.] 唐江，田永勝，李振通，成美玲，陳張帆，毛東亮，馬文輝，王曉梅，李文升，翟介明，李波. 2018. 云紋石斑魚和鞍帶石斑魚及其雜交后代遺傳性狀分析[J]. 農業生物技術學報，26（5）：819-829. [Tang J，Tian Y S，Li Z T，Cheng M L，Chen Z F，Mao D L，Ma W H，Wang X M，Li W S，Zhai J M，Li B. 2018. Analysis of genetic characters in Epinephelus moara，E. lanceolaus and their hybrids[J]. Journal of Agricultural Biotechnology，26（5）：819-829.] 童馨，龔世圓，喻達輝，黃桂菊，杜博，李色東. 2009. 凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）不同世代養殖群體的遺傳多樣性分析[J]. 海洋與湖沼，40（2）：214-220. [Tong X，Gong S Y，Yu D H，Huang G J，Du B，Li S D. 2009. Genetic diversity of cultured Pacific white shrimp（Litopenaeus vannamei） stocks of different generations in China[J]. Oceanologia et Limnologia Sinica，40（2）：214-220.] 王霞，劉小林，張繼泉，張成松，黃皓，相建海. 2009. 微衛星用于凡納濱對蝦育種過程中親權分析及遺傳多樣性的變化監測[J]. 水產學報，33（5）：832-839. [Wang X，Liu X L，Zhang J Q，Zhang C S，Huang H，Xiang J H. 2009. Kinship analysis and genetic variation monitoring in Litopenaeus vanname breeding program using microsatellite DNA markers[J]. Journal of Fisheries of China，33（5）：832-839.] 王興強，馬甡，董雙林. 2004. 凡納濱對蝦生物學及養殖生態學研究進展[J]. 海洋湖沼通報，（4）：94-100. [Wang X Q，Ma S，Dong S L. 2004. Studies on the biology and cultural ecology of Litopenaeus vannamei：A review[J]. Transaction of Oceanology and Limnology，（4）：94-100.] 吳怡迪，駱軒，楊章武，黃永春，游偉偉. 2016. 凡納濱對蝦選育系間雜交的生長性狀及遺傳多樣性分析[J]. 廈門大學學報（自然科學版），55（5）：646-653. [Wu Y D，Luo X，Yang Z W，Huang Y C，You W W. 2016. Growth performance and genetic diversity analysis of hybrids between selective lines of Litopenaeus vannamei[J]. Journal of Xiamen University （Natural Science），55（5）：646-653.] 謝麗，陳國良，葉富良，栗志民. 2009. 凡納濱對蝦4個選育群體遺傳多樣性的SSR分析[J]. 廣東海洋大學學報，29（4）：5-9. [Xie L，Chen G L，Ye F L，Li Z M. 2009. Genetic diversity of four selected stocks of Litopenaeus vanna-mei as revealed by SSR marker[J]. Journal of Guangdong Ocean University，29（4）：5-9.] 楊銘，于洋，張曉軍，王全超，劉敬文，李富花，相建海. 2017. 基于轉錄組數據的凡納濱對蝦微衛星標記開發[J]. 海洋科學，41（2）：96-102. [Yang M，Yu Y，Zhang X J，Wang Q C，Liu J W，Li F H，Xiang J H. 2017. Development of microsatellite markers from the transcriptome sequences of Pacific white shrimp（Litopenaus vannamei）[J]. Marine Sciences，41（2）：96-102.] 葉寧，包秀鳳，劉建勇. 2017. 凡納濱對蝦引進群體與養殖群體遺傳多樣性的AFLP分析[J]. 水產學報，41（3）：339-346. [Ye N，Bao X F，Liu J Y. 2017. AFLP analysis of genetic diversity of imported Litopenaeus vannamei po-pulations and cultured stocks[J]. Journal of Fisheries of China，41（3）：339-346.] 于思夢，高磊，王偉，赫崇波，鮑相渤，田梅林. 2017. 遼寧黃渤海沿岸長牡蠣遺傳多樣性分析[J]. 經濟動物學報，21（4）：215-220. [Yu S M，Gao L，Wang W，He C B，Bao X B，Tian M L. 2017. Genetic diversity of oyster in the Yellow sea and Bohai sea in Liaoning Province[J]. Journal of Economic Animal，21（4）：215-220.] 張文靜，余育和，沈韞芬. 2003. 微衛星DNA遺傳分析在原生動物學中的研究進展[J]. 水生生物學報，27（2）：185-190. [Zhang W J，Yu Y H，Shen Y F. 2003. Advances on genetic analysis of microsatellite DNA in protozoology[J]. Acta Hydrobiologica Sinica，27（2）：185-190.] 趙永貞. 2014. 凡納濱對蝦——桂海1號[J]. 農村百事通，（3）：32. [Zhao Y Z. 2014. “Guihai No.1” Litopenaeus vannamei[J]. Rural Affairs，（3）：32.] Antoro S，Na-Nakorn U，Koedprang W. 2006. Study of gene-tic diversity of orange-spotted grouper，Epinephelus coioides，from Thailand and Indonesia using microsatellite markers[J]. Marine Biotechnology（New York），8（1）：17-26. Botstein D，White R L，Skolnick M H，Davis R. 1980. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms[J]. The American Journal of Human Genetics，32（3）：314-331. Crane P A，Lewis C J，Kretschmer E J，Miller S J，Spearman W J，DeCicco A L，Lisac M J，Wenburg J K. 2004. Cha-racterization and inheritance of seven microsatellite loci from Dolly Varden，Salvelinus malma，and cross-species amplification in Arctic char，S. alpinus[J]. Conservation Genetics，5：737-741. Cruz P，Ibarra A M，Mejia-Ruiz H，Gaffney P M，Pérez-Enríquez R. 2004. Genetic variability assessed by microsatellites in a breeding program of Pacific white shrimp （Litopenaeus vannamei）[J]. Marine Biotechnology（New York），6（2）：157-164. Gyapay G，Morissette J，Vignal A，DibC，Fizames C，Millas-seau P，Marc S，Bernardi G，Lathrop M，Weissenbach J. 1994. The 1993-94 Généthon human genetic linkage map[J]. Nature Genetics，7（2）：246-339. Nagy S，Poczai P，Cernák I，Gorji A M，Heged?s G，Taller J. 2012. PICcalc：An online program to calculate polymorphic information content for molecular genetic studies[J]. Biochemical Genetics，50（9-10）：670-672. O'Connell M ， Wright J M. 1997. Microsatellite DNA in fish[J]. Reviews in Fish Biology and Fisheries，7：331-363. Shikano T，Taniguchi N. 2002. Relationships between genetic variation measured by microsatellite DNA markersand a fitness-related trait in the guppy（Poecilia reticulata）[J]. Aquaculture，209（1）：77-90. Valles-Jimenez R，Cruz P，Perez-Enriquez R. 2004. Population genetic structure of Pacific white shrimp（Litopenaeus vannamei） from mexico to panama：Microsatellite DNA varia-tion[J]. Marine Biotechnology（New York），6（5）：475-484. Wajid A，Wasim M，Yaqub T，Firyal S，Tayyab M，Siddique S，Hussain T. 2014. Assessment of genetic diversity in Balochi and Rakhshani sheep breeds of Balochistan using microsatellite DNA markers[J]. The Journal of Animal & Plant Sciences，24（5）：1348-1354. Wolfus G M，Garcia D K，Alcivar-Warren A. 1997. Application of the microsatellite technique for analyzing genetic diversity in shrimp breeding programs[J]. Aquaculture，152（1-4）：35-47. Zhang K，Wang W J，Li W Y，Zhang Q Q，Kong J. 2014. Analysis of genetic diversity and differentiation of seven stocks of Litopenaeus vannamei using microsatellite mar-kers[J]. Journal of Ocean University of China，13（4）：647-656. Zhang L S，Yang C J，Zhang Y，Li L，Zhang X M，Zhang Q L，Xiang J H. 2007. A genetic linkage map of Pacific white shrimp（Litopenaeus vannamei）：Sex-linked microsatellite markers and high recombination rates[J]. Genetica，131（1）：37-49. （責任編輯 蘭宗寶）
