霍山石斛多糖對潰瘍性結腸炎小鼠的抗炎作用

谷仿麗 黃仁術 何曉梅

摘要?[目的]探究霍山石斛多糖對潰瘍性結腸炎小鼠的抗炎作用。[方法]應用葡聚糖硫酸鈉建立潰瘍性結腸炎模型，灌胃給予模型小鼠不同劑量的霍山石斛多糖，觀察霍山石斛多糖對模型小鼠DAI、血清細胞因子IL-1、TNF-α水平及結腸病理組織學的影響，分析霍山石斛對潰瘍性結腸炎小鼠的抗炎作用。[結果]與模型組相比，霍山石斛多糖高、中劑量組顯著降低DAI、血清細胞因子IL-1、 TNF-α水平（?P?<0.05），改善結腸病理組織學。[結論]霍山石斛多糖通過抗炎治療潰瘍性結腸炎小鼠。

關鍵詞?霍山石斛多糖;潰瘍性結腸炎;小鼠;抗炎

中圖分類號?R285?文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）14-0176-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.14.049

Abstract?[Objective]To study the anti-inflammatory effect of?Dendrobium huoshanense?polysaccharide on ulcerative colitis mice.[Method]The ulcerative colitis model was established by dextran sodium sulfate，and different doses of?Dendrobium huoshanense?polysaccharide were given to the model mice by gavage.The effects of?Dendrobium huoshanense?polysaccharide on Dai，IL-1，TNF-α levels in serum and histopathology of colon were observed，and the anti-inflammatory effects of?Dendrobium huoshanense?on ulcerative colitis mice were analyzed.[Result]Compared with the model group，the levels of Dai，IL-1 and TNF-α in the high and medium dose group were significantly reduced （?P?<0.05），and the histopathology of colon was improved.[Conclusion]Dendrobium huoshanense?polysaccharide has anti-inflammatory effect on ulcerative colitis mice.

Key words?Dendrobium huoshanense?polysaccharide;Ulcerative colitis;Mice;Anti-inflammatory

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）發病機制尚不清楚，多認為是腸道感染、自身免疫、遺傳、精神心理等相互作用的結果[1]。潰瘍性結腸炎發病時炎癥因子水平升高，導致結腸黏膜損傷，甚至糜爛[2];患者表現為腹瀉、腹痛、黏液膿便血、體重減輕等。目前主要通過抗炎促進結腸組織恢復、增加腸道黏膜免疫力治療潰瘍性結腸炎[3]。

霍山石斛被譽為“中華九大仙草之首”，具有益胃生津、滋陰清熱、潤肺止咳、明目強身等功效[4]?，F代研究表明，霍山石斛主要含有多糖類物質、石斛堿、多種游離氨基酸及豐富的微量元素等成分[5]，具有抗炎、增強免疫、調節胃腸道、降血糖、肝保護等作用[6-7]。因此，筆者研究霍山石斛多糖對潰瘍性結腸炎小鼠的抗炎作用。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?實驗動物。昆明種健康小鼠，體重（22+2）g，購自安徽醫科大學動物研究所動物實驗中心。

1.1.2?儀器設備。

電子分析天平（鄭州萬博儀器設備有限公司）;旋轉蒸發儀（R52A，上海亞榮）;Synergy H1 多功能酶標儀 （美國佰騰儀器有限公司）。

1.1.3?藥品和試劑?；羯绞勺酝钗鲗W院石斛種植園;葡聚糖硫酸鈉由美國sigma公司生產;柳氮磺砒啶腸溶片由上海信宜天平制藥有限公司生產;糞便隱血定性檢測試劑盒（鄰聯甲苯胺法）由北京雷根生物技術有限公司生產;IL-1、 TNF-α檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所生產;乙醇、硫酸、蒽酮等均為分析純。

1.2?方法

1.2.1?霍山石斛多糖的制備。

取新鮮的大別山產霍山石斛，除去雜質，清水洗凈，50 ℃烘干，粉碎過40目篩，藥粉繼續烘干至恒重。以料液比1∶30，80 ℃水提3次，每次2 h。合并提取液，減壓濃縮至相對密度1.12。濃縮液中加入95%乙醇，邊加邊攪拌，加至濃縮液的2倍，保鮮膜密封，放置于4?℃冰箱24 h，3 000 r/min離心10 min，取沉淀物去蛋白，纖維柱法分離得霍山石斛多糖，采用蒽酮-硫酸法[8]測定多糖含量。

1.2.2?潰瘍性結腸炎模型復制。

取體重相近的健康小鼠60只，雌雄性各半，隨機分為空白組（10只）和模型組（50只）。正常組小鼠正常攝食、飲水，模型組小鼠自由飲用配制的5%葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DDS）水溶液5 d，建成潰瘍性結腸炎模型[9]。

1.2.3?動物分組與給藥。

將潰瘍性結腸炎模型小鼠隨機分為霍山石斛多糖高劑量（200 mg/kg）、中劑量（100 mg/kg）、低劑量（50 mg/kg）組，柳氮磺砒啶（sulfasalazine，SASP）組，模型組。于試驗第6天，分別灌胃給予霍山石斛多糖高、中、低劑量組霍山石斛多糖200、100、50 mg/kg，SASP組300 mg/kg，正常組蒸餾水，一天1次，連續灌胃14 d。

1.2.4?指標采集與檢測。

試驗期間，分別在造模第5天、給藥7 d、14 d末，檢測試驗小鼠體重、大便性狀及便血，并根據表1評分計算DAI=（體質量下降百分率+大便性狀+便血）/3[10]。給藥第14天各小組實驗鼠末次給藥1 h后，摘眼球取血后即刻頸椎脫臼處死小鼠，解剖，取距肛門8 cm處部分結腸，用生理鹽水沖洗，除去多余脂肪及附著糞便，觀察結腸黏膜病變情況，隨后浸泡在10%甲醛溶液中固定，乙醇脫水，石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，顯微鏡下觀察每個結腸組織狀況。血液離心后取血清，ELISA法檢測白介素-1（Interleukin-1beta，IL-1）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alph，TNF-α）水平。

1.3?數據統計與分析?所有數據采用SPSS 23進行統計分析，組間比較?采用t檢驗，P?<0.05為有統計學意義。

2?結果與分析

2.1?霍山石斛多糖對潰瘍性結腸炎小鼠DAI的影響

模型組小鼠自由飲用葡聚糖硫酸鈉水溶液5 d后，出現了明顯的潰瘍性結腸炎癥狀，黏液膿血便、身體時而蜷曲狀、體重下降、精神不佳;持續灌胃給藥14 d 后，各給藥組與模型組比較，癥狀明顯改善，體重增長，大便性狀趨于正常。從圖1可看出，小鼠造模5 d，DAI評分顯著升高（?P?<0.01）;給藥7 d，霍山石斛多糖高、中劑量組DAI顯著降低（?P?<0.05），低劑量組有降低趨勢，但不明顯（?P?>0.05）;給藥14 d，霍山石斛高、中、低劑量組均顯著降低DAI評分，與SASP組相當;表明霍山石斛多糖具有改善潰瘍性結腸炎小鼠一般癥狀的作用。

2.2?霍山石斛多糖對潰瘍性結腸炎小鼠細胞因子IL-1、TNF-α水平的影響

從表2可以看出，與正常組比較，模型組血清IL-1、TNF-α水平顯著升高（?P

2.3?結腸黏膜大體觀察及組織病理學觀察

從圖2可以看出，正常組結腸黏膜完整，肉眼觀察未見水腫及潰瘍。模型組結腸黏膜損傷最嚴重，潰瘍數目多且范圍廣，組織水腫明顯，有炎癥細胞浸潤，部分腺體被毀壞。各治療組與模型組相比結腸黏膜光滑平整，能看到愈合的潰瘍組織，無炎癥細胞浸潤，無明顯潰瘍及水腫，其中SASP組和霍山石斛高劑量組與正常組最為接近。

3?小結

有研究表明，遺傳、環境、精神等因素會激發機體的免疫系統，促使免疫細胞釋放IL-1、TNF-α等炎性細胞因子，損傷腸黏膜，引起結腸黏膜滲漏、水腫，甚至潰瘍，引發黏液膿血便、體重減輕等[11]。該研究結果發現，霍山石斛多糖可顯著降低炎性細胞因子IL-1、TNF-α水平，減輕結腸黏膜損傷，促進潰瘍愈合，降低了DAI評分，表明霍山石斛多糖具有通過抗炎治療潰瘍性結腸炎作用。

參考文獻

[1]李博林，劉啟泉，張晶，等.蘭術四草化濁解毒方對潰瘍性結腸炎大鼠細胞因子水平的影響[J].中國老年學雜志，2016，36（24）：6085-6087.

[2]解春靜，莊彥華，欒雨蘢.潰瘍性結腸炎發病機制中免疫因素的研究進展[J].細胞與分子免疫學雜志，2013，29（8）：889-892.

[3]劉青梅，陳曦，邢乃欣，等.中醫藥治療潰瘍性結腸炎作用機制的研究進展[J].中國老年學雜志，2008，28（8）：830-832.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2015版一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015.

[5]陳乃東，高峰，林欣，等.不同種源霍山石斛生物堿比較研究[J].中藥材，2014，37（6）：953-956.

[6]LIN J，CHANG Y J，YANG W B，et al.The multifaceted effects of polysaccharides isolated from?Dendrobium huoshanense?on immune functions with the induction of interleukin-1 receptor antagonist （IL-1ra） in monocytes[J].PLoS One，2014，9（4）：1-2.

[7]司華陽，陳乃東，陳乃富.霍山石斛多糖的分離鑒定及藥理活性研究進展[J].天然產物研究與開發，2016，28（3）：467-470.

[8]陳乃東，陳乃富，王陶陶，等.組培霍山石斛、野生霍山石斛及河南石斛多糖及乙醇溶出物動態積累規律研究[J].天然產物研究與開發，2015，27（12）：2090-2094.

[9]阿來依·買提卡比力，阿不來提·阿合買提，木塔力甫·艾買提，等.腸炎相關腸癌小鼠模型及急性腸炎小鼠模型特征研究[J].新建醫科大學學報，2017，40（8）：1069-1073.

[10]OKAYASU I，HATAKEYAMA S，YAMADA M，et al.A novel method in the induction of reliable experimental acute chronic ulcerative colitis in mice[J].Gastroenterology，1990，98（3）：694-702.

[11]張瑞芳，陳朝暉，劉漪淪，等.潰瘍性結腸炎的發病機制及其治療進展[J].生命的化學，2018，38（2）：241-249.