奧希替尼對EGFR T790M突變陽性NSCLC患者的療效及對miR-21水平的影響

戴瑋婧，李洪濤，戴丹菁

(1.哈爾濱醫科大學附屬第一醫院腫瘤科，黑龍江哈爾濱 150001；2湖北省荊州市第一人民醫院腫瘤科，湖北荊州 434000；3.武漢大學人民醫院漢川醫院腫瘤科，湖北孝感 431699)

肺癌是發生于肺泡上皮或支氣管黏膜上皮的惡性腫瘤，病死率較高，其中約80%的患者為非小細胞肺癌(NSCLC)，且研究報道其5年生存率僅為10%～12%。目前針對晚期NSCLC的治療，臨床上仍以化療為主，但療效不佳[1]。隨著精準醫療的不斷發展及進步，靶向治療逐漸成為晚期NSCLC治療的熱點，其中表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)是表皮生長因子受體(EGFR)基因突變晚期NSCLC患者的一線治療方案，雖其最初反應率較高，但仍有20%～30%的EGFR基因突變NSCLC患者會出現原發性耐藥，且開始治療有效的患者在治療過程中亦會出現獲得性耐藥，其中50%～60%的耐藥機制為T790M突變所導致。奧希替尼是第3代不可逆的選擇性EGFR突變抑制劑，適用于第1代EGFR-TKI耐藥后T790M突變陽性的晚期NSCLC患者[2-3]。本研究分析了奧希替尼對EGFR T790M突變陽性NSCLC患者的療效及對血清miR-21水平的影響，旨在為EGFR-TKI耐藥后NSCLC患者治療方式的優化進一步提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年7月至2019年1月哈爾濱醫科大學附屬第一醫院收治的EGFR-TKI耐藥后T790M突變陽性的晚期NSCLC患者100例。所有患者均已簽署知情同意書，本研究經該院醫學倫理委員會審核并通過。根據治療方式將所有研究對象分為研究組及對照組，各50例。研究組(采用奧希替尼治療)中男32例，女18例；年齡52～73歲，平均(62.5±9.0)歲；病理類型：鱗癌18例，腺癌28例，大細胞癌4例。對照組(采用培美曲塞+順鉑常規化療)中男30例，女20例；年齡54～71歲，平均(62.8±8.8)歲；病理類型：鱗癌20例，腺癌27例，大細胞癌3例。兩組患者性別、年齡、病理類型比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2納入與排除標準 納入標準：(1)所有患者均經病理證實是NSCLC且為第1代EGFR-TKI耐藥后T790M突變陽性的晚期(Ⅲb～Ⅳ期)患者；(2)所有患者行胸部CT檢查示靶病灶≥1個且預計生存期≥3個月；(3)所有患者及家屬簽署知情同意書。排除標準：(1)其他原發性惡性腫瘤或多臟器轉移者；(2)心、肝、腦等重要臟器或骨髓功能障礙者。

1.3儀器與試劑 TRI Reagent BD購自美國MRC公司,PRISM 7900實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)儀購自美國ABI公司，微小核糖核酸及U6引物序列由上海生工生物工程(股份)有限公司合成。

1.4方法

1.4.1治療方法 (1)研究組：采用奧希替尼治療，劑量為80 mg，1次/日，持續服用直至病情進展或毒性不可耐受。(2)對照組：采用培美曲塞+順鉑化療，其中第1日給予培美曲塞500 mg/m2,第1～5天給予順鉑20 mg/m2，行4～6個周期的治療。以上兩組患者治療期間定期復查，并隨訪1年。

1.4.2檢測方法 治療前后對兩組患者分別采集空腹靜脈血3 mL，常規處理后進行RNA的分離提取并采用RT-PCR進行分析，步驟如下。(1)血清總RNA提取。應用TRI Reagent BD提取血清標本的總RNA。(2)反轉錄cDNA的生成。制備反轉錄混合反應液：總RNA 1.0 μg，dNTP(水平為2.5 mmol/L)2.0 μL；10×RT-PCR緩沖液2.0 μL，RT特異引物1.0 μL，莫羅尼鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MLV，10 U/μL)2.0 μL，RNA酶抑制劑(40 U/μL)0.3 μL，加入無核酸酶高純度水至總體積20.0 μL。反應條件：16 ℃，30 min；42 ℃，30 min；85 ℃，5 min；4 ℃終止反應。(3)RT-PCR。檢測引物探針：U6上游引物為5′-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3′，U6下游引物為5′-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3′；miR-21上游引物為5′-ACA CTC CAG CTG GGT AGC TTA TCA G-3′，miR-21下游引物為5′-CAA CTG GTG TCG TGG AGT CG-3′。配制反應體系：dNTP(2.5 mmol/L)2.5 μL，10×PCR緩沖液2.5 μL，MgCl2溶液1.5 μL，Taq聚合酶1.0 U，SybergreenⅠ染料0.25 μL，10 μmol/L的PCR特異引物正鏈1.0 μL；10 μmol/L的PCR特異引物反鏈1.0 μL；cDNA或DNA 1.0 μL；加水至總體積為25.0 μL。反應條件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s共40個循環；4 ℃ 5 min終止反應。反應結束后分析PCR反應曲線，以U6作為內參，試驗數據采用2-ΔΔCt法進行分析。ΔΔCt=ΔCt(待測基因)-ΔCt(內參)。

1.5觀察指標 (1)根據RECIST1.1評價標準[4]比較兩組患者治療后臨床療效的差異:完全緩解(CR)為靶病灶完全消失；部分緩解(PR)為靶病灶半徑的總和減少≥30%；穩定(SD)為靶病灶未減小及無進展；進展(PD)為靶病灶半徑總和增加≥20%；疾病控制率(DCR)=(CR例數+PR例數+SD例數)/總例數×100%。(2)比較兩組患者治療前后miR-21水平的差異。(3)比較兩組患者治療后不良反應發生率的差異。(4)隨訪結束時對兩組患者的預后情況[無進展生存時間(PFS)]進行比較。

2 結 果

2.1兩組患者治療后的臨床療效比較 治療后研究組患者的DCR高于對照組，差異有統計學意義(χ2=4.574，P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者治療后的臨床療效比較[n(%)]

2.2兩組患者治療前后血清miR-21水平比較 治療前兩組患者血清miR-21水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，而治療后對照組患者血清miR-21水平較研究組顯著升高(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患者治療前后血清miR-21水平比較

2.3兩組患者治療后不良反應發生率比較 治療后兩組消化道反應、皮疹、貧血、甲溝炎等不良反應發生率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 兩組患者治療后不良反應發生率比較[n(%)]

2.4兩組患者的預后情況比較 隨訪結束時，研究組患者的PFS為(10.2±2.3)個月，顯著長于對照組的(7.1±1.6)個月,差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討 論

EGFR基因突變是NSCLC較為常見的驅動因素，而對于EGFR基因突變且無耐藥基因的晚期NSCLC患者，EGFR-TKI常被推薦為一線用藥，但在臨床治療過程中，仍有部分患者會相繼產生耐藥，其中因T790M突變陽性導致的獲得性耐藥約占60%。因此，如何合理有效地應對EGFR-TKI等靶向藥物的耐藥，實現精準診斷下的全程管理已經成為晚期NSCLC個體化診療的重要研究方向。奧希替尼的出現將起到重要的作用，其主要與腫瘤細胞內C797形成不可逆的共價結合，進而抑制絡氨酸激酶磷酸化及EGFR靶點的激活，并阻斷EGFR同源二聚化及其下游信號通路相關表達，同時誘導T790M突變陽性細胞凋亡，最終起到抑制腫瘤細胞增殖的功效[5-8]。目前奧希替尼在一些臨床試驗中已表現出較好的安全性及有效性，但關于奧希替尼和以鉑類為基礎的傳統化療方案的比較研究較少，因此，本研究分析了奧希替尼對EGFR T790M突變陽性NSCLC患者的療效及對血清miR-21水平的影響。

本研究結果顯示，治療后研究組患者的DCR高于對照組(P<0.05)，這表明奧希替尼相較于以鉑類為基礎的傳統化療方案，對于EGFR T790M突變陽性的晚期NSCLC患者短期療效更佳[9]。文獻[10]報道微小核糖核酸是一種小型的且無蛋白質編碼功能的RNA，其在腫瘤發生、發展過程中發揮著非常重要的作用，同時微小核糖核酸可作為血清學標志物對胃癌、肺癌等諸多惡性腫瘤進行早期診斷及預后判斷。另外有研究發現，微小核糖核酸可參與調控多種腫瘤的耐藥過程，如可通過調控EGFR通路影響腫瘤細胞對吉非替尼的敏感性，其中miR-21被證實在多種惡性腫瘤組織中呈高表達，且進一步針對miR-21的功能學研究顯示，miR-21在腫瘤細胞增殖、凋亡及繼發性耐藥中起著十分重要的調控作用[11]。而本研究結果發現,治療前兩組患者的血清miR-21水平比較,差異無統計學意義(P>0.05)，而治療后對照組患者的血清miR-21水平較研究組顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。因為miR-21水平升高可體現患者繼發性耐藥過程加快，而研究組升高幅度較對照組小，則說明其繼發性耐藥的過程減緩。該結果從血清學方面進一步顯示出奧希替尼治療EGFR T790M突變陽性晚期NSCLC患者更具優勢，可有效減緩患者繼發性耐藥的進程[12]。本研究還發現，治療后兩組各不良反應發生率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，說明奧希替尼的臨床安全性也較高[13]。本研究對兩組患者的預后情況進行了比較，發現隨訪結束時，研究組患者的PFS顯著長于對照組(P<0.05)，與文獻[14]結果一致。

綜上所述，EGFR-TKI耐藥后，奧希替尼對EGFR T790M突變陽性的晚期NSCLC患者的療效較好，同時具有較高的臨床安全性且可明顯改善預后，值得臨床推廣應用。