深圳地區血紅蛋白E的血液學特征調查*

闞麗娟，蔡欽泉，覃俊龍，陳亞瓊，張麗軍，莫云均，李 悅，張秀明，李育敏

(廣東省深圳市羅湖區人民醫院醫學檢驗科，廣東深圳 518001)

血紅蛋白疾病分為異常血紅蛋白病和珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡稱地貧)兩大類，前者是由于珠蛋白基因缺陷導致血紅蛋白結構改變所致，后者則是由血紅蛋白含量(Hb)改變引起[1]。血紅蛋白E(HbE)是我國南方地區最常見的異常血紅蛋白之一[2-4]，其分子基礎為β珠蛋白基因第26位密碼子發生點突變(GAG→AAG)，導致β珠蛋白鏈該位點賴氨酸取代谷氨酸，從而產生結構變異的HbE。由于該密碼子靠近外顯子與內含子的拼接部位，發生堿基替換后激活了鄰近的隱蔽切接點，造成mRNA前體加工障礙，導致β珠蛋白基因表達減少，因此在功能上屬于β+地貧。不同性別及年齡段血液學指標參數存在差異，本研究按年齡段分別分析成人、兒童及新生兒HbE的血液學特征，并按性別分類統計成人HbE的血液學參數，為HbE病和β地貧的篩查提供系統、詳細的臨床血液學表型參考資料。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年6月至2019年5月本院門診和住院進行血紅蛋白檢測的受試者為調查對象。本研究受試者共72 397例。采集EDTA-K2抗凝外周靜脈全血2 mL，2～8 ℃保存，用于紅細胞參數和血紅蛋白電泳分析，以及地貧基因檢測。

1.2儀器與試劑 紅細胞參數分析采用XN-1000血細胞分析儀(日本Sysmex公司)，血紅蛋白分析采用Capillarys2全自動毛細管電泳儀(法國Sebia公司)，試劑均為廠家原裝配套試劑。地貧基因檢測采用T960擴增儀(中國黑馬公司)、ChemiDocTMMP全自動凝膠成像分析儀(美國Bio-Rad公司)、DYY-6C型電泳儀(中國北京六一儀器廠)、YN-H16恒溫雜交儀(深圳亞能公司)，試劑購自深圳亞能生物技術有限公司。

1.3方法

1.3.1血液學分析 采用全自動血細胞分析儀進行各項紅細胞參數分析，分析指標為Hb、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)。采用毛細管電泳法進行血紅蛋白分析，鑒別Hb條帶類型及分析各條帶所占相對比例。以上檢測均按照試劑盒說明書進行。

1.3.2地貧基因檢測 采用跨越斷裂點聚合酶鏈反應(Gap-PCR)法檢測3種中國人群常見的缺失型α地貧基因(--SEA、-α3.7和-α4.2)和3種罕見缺失型β地貧基因：中國臺灣型、中國型[Gγ+(Aγδβ)0]和東南亞型(SEA-HPFH)。采用PCR結合反向點雜交(PCR-RDB)法檢測常見的3種非缺失α地貧基因(αQS、αCS、αWS)和17種β地貧基因點突變類型(-28、-29、CD17、CD41-42、CD43、βE、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、-32、-30、CAP、Initiation condon、CD14-15、CD27-28、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、CD31)。按照試劑盒說明書進行以上操作及結果判讀。

2 結 果

2.1基因型分析 檢出HbE共計76例，發生率為0.105%(76/72 397)，包括73例HbE雜合子，其中成年男性24例，成年女性34例，兒童7例，新生兒8例。3例HbE復合α、β地貧，均為成人，其中HbE復合α地貧2例，為HbE復合αWS雜合子和HbE復合-α3.7純合子，HbE復合β地貧1例，為HbE復合Gγ+(Aγδβ)0。

2.2血液學表型分析 成人單純HbE雜合子、HbE復合αWS雜合子對血液學表型影響較輕，表現為Hb正常，MCV和MCH輕度降低，各年齡段及性別具體血液學指標分析見表1。HbE復合-α3.7純合子表現為輕型地貧，MCV和MCH降低；HbE復合Gγ+(Aγδβ)0表現為中間型β地貧，MCV和MCH明顯降低，HbE和HbF明顯升高，見表2。新生兒HbE雜合子毛細管電泳分析結果為血紅蛋白A(HbA)(7.5±1.5)%、血紅蛋白F(HbF)(90.2±2.0)%和HbE (2.6±0.7)%，見表3。

表1 單純HbE雜合子的血液學表型

表2 HbE復合α、β地貧的基因型與血液學表型

表3 8例新生兒HbE雜合子的毛細管電泳結果(%)

3 討 論

HbE主要分布于我國長江以南及沿海地區。秦良誼[2]早期調查顯示HbE以云南最多見，在廣東和廣西的β鏈異常血紅蛋白分布中也主要為HbE，但攜帶率較云南低，而近年報道廣西地區人群HbE的攜帶率高達0.5%[3]。廣東梅州地區HbE的攜帶率為0.118%[5]，韶關地區為0.072%[6]，筆者前期也報道深圳地區為0.130%[7]，本次納入更多的樣本研究表明為0.105%，高于韶關地區。秦良誼[2]認為HbE的地域分布可能與瘧疾有關，在曾流行過瘧疾的地區其發生頻率明顯高于其他地區，說明HbE攜帶者可能對瘧疾有較強的抵抗力，帶有HbE的紅細胞不利于瘧原蟲生長。

HbE攜帶者的血液學表型取決于其基因型，單純HbE雜合子可無貧血及臨床癥狀[3,8-9]。根據我國《地中海貧血預防控制操作指南》[1]，地貧篩查包括紅細胞參數和血紅蛋白分析，前者觀察指標為MCV和MCH。鑒于成年男性、女性及兒童紅細胞參數的參考區間不同，且進行地貧篩查的很大部分成年女性處于妊娠期，孕期由于營養需求增加以及血液稀釋，存在生理性貧血的可能，因此本研究對HbE雜合子的血液學表型按性別及年齡段進行了分析。結果表明，各年齡段HbE雜合子對紅細胞參數指標的影響較輕，僅表現為MCV和MCH輕度降低，而Hb正常，這提示臨床在觀察到MCV和MCH降低時，應進一步行血紅蛋白電泳分析。李友瓊等[3]報道HbE攜帶者中有部分血液學表型正常，本研究也發現2例HbE雜合子的血細胞分析結果正常，這提示對于地貧篩查應嚴格按照指南檢測血常規和血紅蛋白電泳，兩者結合分析以避免漏診。

HbE復合其他地貧類型，其臨床表現存在異質性[3-4,8-10]。HbE復合α地貧時，由于α和β珠蛋白基因均表達減少，α鏈和β鏈相對平衡，臨床癥狀較輕。HbE復合靜止型α地貧，如αWS雜合子的表型同HbE雜合子，而復合標準型α地貧表現為輕型地貧[3,10]。本研究中HbE復合αWS雜合子的血液型表型也同HbE雜合子，而HbE復合-α3.7純合子的紅細胞參數較HbE雜合子低，但HbE水平也較HbE雜合子低，與李友瓊等[3]報道的HbE復合--SEA雜合子相符合，但與張桂青等[10]報道存在差異。這一方面可能與血紅蛋白分析檢測方法不同有關，另一方面表明HbE復合α地貧的臨床表型存在異質性，這也提示臨床在血紅蛋白疾病篩查時必須結合血紅蛋白電泳進行分析。HbE純合子或HbE復合β地貧時，由于兩種突變均發生于β珠蛋白基因上，造成β鏈合成減少或不合成，α鏈除了形成HbF和血紅蛋白A2(HbA2)外，其余形成包涵體附著于紅細胞膜，導致紅細胞在骨髓或脾內被破壞。HbE復合β地貧的病理生理機制較為復雜，具有高度異質性，對于不同或同一突變基因型，其臨床表現都可能存在差異，大部分表現為中間型或重型地貧，也有表現為輕型地貧的報道[3-4,8-10]。本研究發現1例HbE復合中國型β缺失[Gγ+(Aγδβ)0]，其血液學表型符合中間型β地貧的特征[1]。

臍帶血血紅蛋白電泳分析在新生兒地貧篩查中具有重要作用，較傳統的紅細胞脆性試驗及血細胞分析篩查效果更佳[11-12]。本研究分析8例新生兒HbE雜合子的電泳結果，其HbE水平均較低，為(2.6±0.7)%，最低為1.4%。由于HbE電泳條帶位置與HbA2非常接近，且毛細管電泳檢測靈敏度高，新生兒HbA2通常在0.1%～1.0%，因此臨床應注意區別HbE與HbA2條帶，必要時詢問父母基因型，并進一步行地貧基因檢測。

綜上所述，深圳地區人群HbE的攜帶率較高，以雜合子為主，檢測HbE對產前篩查和產前診斷具有重要指導意義。臨床醫師和檢驗醫師應重視HbE的臨床血液學特征，熟悉基因型與血液學表型的相關規律。