BRD4、Ki-67、SSBP1水平與胃癌前病變進(jìn)展的關(guān)系及在胃癌早期診斷中的價(jià)值

張 竹，許 樂(lè)△，賈文卓

(北京醫(yī)院/國(guó)家老年醫(yī)學(xué)中心/中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院老年醫(yī)學(xué)研究院:1.消化科;2.普外科,北京 100730)

胃癌是世界范圍內(nèi)最為常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，病死率較高，預(yù)后多不良，對(duì)人們生命健康造成嚴(yán)重威脅。根據(jù)2012年國(guó)際機(jī)構(gòu)GLOBOCAN系列癌癥研究結(jié)果，我國(guó)胃癌發(fā)病率高居全球第5位，病死率也位居第6位[1]。目前，臨床對(duì)胃癌的治療以手術(shù)切除為主，研究表明即使采用手術(shù)、放化療等綜合治療措施，胃癌患者的5年生存率仍不足30%[2-4]。多數(shù)早期胃癌可利用放大內(nèi)鏡聯(lián)合窄帶成像技術(shù)進(jìn)行診斷，并通過(guò)病理組織檢查確認(rèn)。胃癌的早期治療可使患者5年生存率超過(guò)90%，因此，胃癌的早期發(fā)現(xiàn)、診斷和治療至關(guān)重要[5-7]。線粒體單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSBP1)是線粒體DNA合成的關(guān)鍵分子，與線粒體DNA的復(fù)制、修復(fù)和轉(zhuǎn)錄均密切相關(guān)，可影響線粒體的生物功能。研究表明，SSBP1與肝癌、乳腺癌等腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[8]。核抗原Ki-67(簡(jiǎn)稱Ki-67)的表達(dá)水平與消化道腫瘤的形成、分化程度、浸潤(rùn)深度、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后均密切相關(guān)[9]。此外，溴結(jié)構(gòu)域蛋白(BRD4)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤進(jìn)展相關(guān)的生物標(biāo)志物。但關(guān)于BRD4、Ki-67、SSBP1水平與胃癌前病變的相關(guān)性及其在胃癌早期診斷方面的研究較少，在此背景下，本研究旨在探討B(tài)RD4、Ki-67、SSBP1水平與胃癌前病變進(jìn)展的關(guān)系及在胃癌早期診斷中的價(jià)值，為臨床對(duì)胃癌的早期診斷和治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年3月至2019年3月在本院普外科接受手術(shù)切除或消化內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)(ESD)切除或胃鏡活檢的267例患者，獲得的胃組織包括：(1)早期胃癌組織82例(2016年手術(shù)切除)；(2)胃癌前病變組織135例(2016-2019年ESD切除)，并經(jīng)病理證實(shí)為低級(jí)別或高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變；(3)正常胃黏膜上皮組織50例(2017-2018年胃鏡活檢獲得)，病理檢查確診為非萎縮性胃炎。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 入選病例具有完整的病史資料和隨訪資料，所有胃癌患者術(shù)前均未經(jīng)化療和放療。

1.3方法 所有入組研究對(duì)象胃組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋。設(shè)置厚度為2 μm連續(xù)切片。單克隆抗體Ki-67購(gòu)自丹麥DAKO公司。免疫組織化學(xué)法采用Envision兩步法，具體操作步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。檢測(cè)SSBP1的組織切片采用枸櫞酸緩沖液高溫高壓法進(jìn)行抗原修復(fù)，加入兔抗人SSBP1抗體(1︰200)，4 ℃冰箱孵育過(guò)夜，次日取出置于37 ℃恒溫箱孵育30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。BRD4抗體1︰1 000稀釋，4 ℃過(guò)夜，之后加入相應(yīng)二抗，其余步驟同上。

1.4結(jié)果評(píng)價(jià) 安排兩名有經(jīng)驗(yàn)的臨床病理醫(yī)師以雙盲法進(jìn)行分析，Ki-67、BRD4陽(yáng)性物質(zhì)在細(xì)胞核內(nèi)，每張切片均在光學(xué)顯微鏡下選擇10個(gè)高倍視野(×400)，每個(gè)視野均進(jìn)行100個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算同類細(xì)胞中BRD4陽(yáng)性細(xì)胞的比例。陽(yáng)性細(xì)胞比例≤5%為0分(陰性)，陽(yáng)性細(xì)胞比例在>5%～30%為1分(弱陽(yáng)性)，陽(yáng)性細(xì)胞比例在>30%～60%為2分(中等陽(yáng)性)，陽(yáng)性細(xì)胞比例>60%為3分(強(qiáng)陽(yáng)性)。

2 結(jié) 果

2.1Ki-67、BRD4和SSBP1在正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織內(nèi)的表達(dá)情況 正常胃黏膜組織中僅有3例Ki-67陽(yáng)性，胃癌前病變組織中有65例Ki-67陽(yáng)性，早期胃癌組織中有69例Ki-67陽(yáng)性。各組織Ki-67陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=77.021，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 Ki-67在正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織內(nèi)的表達(dá)情況

2.2BRD4在正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織內(nèi)的表達(dá)情況 正常胃黏膜組織中僅有4例BRD4陽(yáng)性，胃癌前病變組織中有81例BRD4陽(yáng)性，早期胃癌組織中有73例BRD4陽(yáng)性。各組織BRD4陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=84.481，P<0.05)。見(jiàn)表2、圖1。

表2 BRD4在正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織內(nèi)的表達(dá)情況

圖1 BRD4在胃組織的表達(dá)情況(×400)

2.3SSBP1在正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織內(nèi)的表達(dá)情況 正常胃黏膜組織中僅有2例SSBP1陽(yáng)性，胃癌前病變組織中有62例SSBP1陽(yáng)性，早期胃癌組織中有71例SSBP1陽(yáng)性。各組織SSBP1陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=87.100，P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 SSBP1在正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織內(nèi)的表達(dá)情況

3 討 論

研究表明，胃癌的發(fā)生、發(fā)展是多種基因參與、多個(gè)步驟的復(fù)雜過(guò)程，涉及癌基因激活和抑癌基因的失活等。這些基因的表達(dá)及蛋白功能的增強(qiáng)或減弱，會(huì)使細(xì)胞增殖失控，發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移，從而推動(dòng)腫瘤進(jìn)展。同時(shí)，近年來(lái)的臨床研究發(fā)現(xiàn)胃癌的早發(fā)現(xiàn)、早治療可顯著提高患者5年生存率，有效改善患者預(yù)后。但由于目前缺乏能夠反映早期胃癌及癌前病變的指標(biāo)，臨床醫(yī)師很難在胃癌早期進(jìn)行診斷。篩選能夠反映胃癌病情進(jìn)展的生物學(xué)指標(biāo)，用于早期胃癌及癌前病變的診斷具有重要意義。因此，本研究選擇BRD4、Ki-67及SSBP1 3個(gè)與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)的指標(biāo)作為研究對(duì)象，分析其在胃癌早期病變中的診斷價(jià)值。

本研究表明，50例正常胃黏膜組織中僅有3例Ki-67陽(yáng)性，135例胃癌前病變組織中有65例Ki-67陽(yáng)性，82例早期胃癌組織中有69例Ki-67陽(yáng)性。各組織Ki-67陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Ki-67是一種重要的核增殖標(biāo)記物，研究表明其在未分化的精原細(xì)胞、上皮基底層細(xì)胞、外周血淋巴細(xì)胞中均有一定程度的表達(dá)，且可影響細(xì)胞的增殖，可用于評(píng)估腫瘤的良惡性程度、腫瘤分化程度，與腫瘤分化和轉(zhuǎn)移均相關(guān)。Ki-67還可作為評(píng)估惡性腫瘤治療效果和預(yù)后的分子標(biāo)志物。Ki-67在胃黏膜腸化生、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變以及腸型胃癌組織中的陽(yáng)性率及表達(dá)水平逐漸升高。但由于缺乏臨床跟蹤隨訪研究，Ki-67判斷胃癌病情進(jìn)展的可靠性和準(zhǔn)確性還需要進(jìn)一步的臨床研究驗(yàn)證。

本研究中BRD4在正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織內(nèi)表達(dá)水平的結(jié)果表明，各組織BRD4陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。BRD4是BET家族的重要成員，有研究表明其與腫瘤的進(jìn)展相關(guān)[10]。YOKOYAMA等[11]利用急性髓性白血病小鼠篩選了已知染色質(zhì)調(diào)節(jié)因子的shRNA文庫(kù)，發(fā)現(xiàn)BRD4在急性髓性白血病發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，該研究同時(shí)使用BRD4 shRNA和BRD4小分子抑制劑進(jìn)行在體試驗(yàn)，結(jié)果表明二者均可發(fā)揮一定的抗白血病作用[12]。結(jié)合本研究結(jié)果，隨著病情的進(jìn)展，胃癌組織BRD4的陽(yáng)性率更高，因此可認(rèn)為BRD4參與了胃癌的發(fā)病，可用于胃癌的早期預(yù)測(cè)。

本研究中正常胃黏膜、胃癌前病變、早期胃癌組織SSBP1陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SSBP1定位于線粒體基質(zhì)和擬核，是一種同源四聚體，其主要功能為參與線粒體DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。近年來(lái)對(duì)腫瘤組織的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織存在大量的mtDNA突變，尤其是DD310區(qū)內(nèi)的突變更豐富，而SSBP1也位于該區(qū)域，因此認(rèn)為SSBP1的突變可能引起mtDNA的突變，當(dāng)這種突變累積到一定程度即可導(dǎo)致各種腫瘤的發(fā)生[13]。

4 結(jié) 論

綜上所述，BRD4、Ki-67、SSBP1水平與胃癌前病變的進(jìn)展存在一定的相關(guān)性，可作為預(yù)測(cè)胃癌前病變的潛在指標(biāo)進(jìn)行深入研究。同時(shí)由于本研究病例偏少，缺乏臨床隨訪結(jié)果，后期可在此基礎(chǔ)上深入研究，為胃癌前病變的診斷提供依據(jù)。