固相萃取-超高效液相色譜-串聯質譜法測定食用植物油中多菌靈殘留

2020-07-20 03:41:18張玉換胡靜趙月鈞

浙江農業科學 2020年7期

張玉換，胡靜，趙月鈞

(綠城農科檢測技術有限公司，浙江杭州 310051)

食用植物油是常見食用烹飪用品，不同的食用植物油營養成分含量存在著一定的差異[1]。隨著人們生活水平的提高，消費者開始越來越重視包括食用植物油在內的食品安全質量問題。初級農產品中的農藥殘留一直受到消費者們的廣泛關注，食用植物油主要來自于油料作物，若油料作物選擇不當或處理不當也會引起食用植物油中含有農藥殘留的風險。油菜籽、芝麻、花生和大豆是我國主要的油料作物，在種植過程中會遭到多種病蟲危害。在我國，油菜的種植面積占總油料作物的40%，菌核病是油菜種植過程中重要病害之一，該病會導致收獲的油菜籽出油率降低，從而影響植物油產量使之下降，嚴重時可至食用油減產高達70%，油菜菌核病大多發生在盛花期，防治該病可通過使用多菌靈可濕性粉劑按一定劑量加水噴霧防治[2-3]。其他油料作物如大豆和花生在生長中也易遭受根腐病、莖腐病、立枯病、冠腐病等多種病害的侵襲，種植戶為了提高產量，降低損失率，通常會使用多菌靈來處理種子，達到防治病害的目的[4]。多菌靈化學名稱N-(2-苯并咪唑基)-氨基甲酸甲酯，在油料作物生長過程中常用于防治各種病蟲害。

目前，我國對于食用植物油中農藥殘留限量的指標設置較少，GB 2763—2019《食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量》中未規定食用植物油中多菌靈的殘留限量，但在油料作物油菜籽、花生仁、棉籽上規定了最大殘留限量值為0.1 mg·kg-1，油料作物大豆為0.2 mg·kg-1。常見的多菌靈殘留檢測方法有高效液相色譜和液相色譜-串聯質譜檢測2種，多集中在蔬菜、水果、谷物、茶葉等常見初級農產品基質中的殘留檢測[5-10]，植物油中多菌靈殘留的檢測報道較少。本研究采用固相氨基萃取柱進行凈化，液相色譜-串聯質譜儀檢測植物油中多菌靈的殘留，方法前處理簡單，靈敏度高，易于操作，整體成本較低。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑和材料

TSQ Quantum配Survey液相操作系統液相色譜-串聯質譜(美國Thermo Fisher Scientific公司)；Büchi R205型旋轉蒸發儀(瑞士步琪有限公司)；GPC凝膠色譜凈化裝置(德國LCTech公司)；QT-2型旋渦混合器(上海琪特分析儀器有限公司)；KQ-50型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器公司)；色譜純乙腈和色譜純甲醇(德國Merck公司)；Envi-NH2固相萃取柱(美國Supelco公司)；試驗用水為去離子水；0.22 μm有機濾膜；純度為99.0%多菌靈(德國Dr. Ehrenstorfer GmbH公司)；純度為99.0%多菌靈-D3(北京振翔公司)。

用乙腈分別配置100 mg·L-1的多菌靈和多菌靈-D3內標標準品儲備液，-18 ℃冰箱保存。

1.2 樣品前處理方法

準確稱取2.00 g植物油樣品，于50 mL試管中，加入8 mL二氯甲烷渦旋3 min，超聲5 min提取，8 000 r·min-1離心3 min，取有機相層待凈化。先用甲醇+二氯甲烷(5+95)5 mL和二氯甲烷5 mL預淋氨基固相萃取柱，待預淋液到達柱吸附層表面時，加入提取液，棄去，再加入10 mL二氯甲烷，棄去；用甲醇+二氯甲烷(5+95)10 mL洗脫接收，將接收液用氮氣40 ℃水浴加熱吹干，再加入0.5 mg·L-1多菌靈-D3同位素標準溶液1 mL復溶后，用甲醇定容至2 mL，超聲溶解，渦旋，過膜，液相色譜-串聯質譜儀待測。

1.3 GPC凈化方法

凈化條件為320 mm×25 mm凝膠色譜柱(B200～400目S-X3凝膠填料40～80 μm)；洗脫溶劑為環己烷-乙酸乙酯(1∶1，v∶v) 5 mL·min-1。取5 mL多菌靈菜籽油溶液(1 mg·L-1)，收集過GPC后的餾分，共45 min，每分鐘收集1份，收集的洗脫液(轉移至平底燒瓶)于40 ℃，旋轉蒸發近干，氮氣吹干，甲醇溶解定容至5 mL，過膜，液相色譜-串聯質譜儀測定，根據每分鐘收集餾分的回收率來確定最佳餾分收集時間。

1.4 色譜質譜條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱為Sepax GP-C18(150 mm×2.0 mm，3 μm)；柱溫30 ℃；進樣量5 μL；流動相為含0.1%甲酸甲醇溶液/2 mmol·L-1乙酸銨溶液(90/10，V/V)；流速0.25 mL·min-1。在此條件下多菌靈和多菌靈-D3保留時間分別為1.68和1.67 min。

1.4.2 質譜條件

離子源為電噴霧離子源(ESI)；正離子掃描；多反應監測(MRM)模式，噴霧電壓4 000 V；毛細管溫度350 ℃；霧化氣和氣簾氣為氮氣；碰撞氣為0.2 Pa氬氣。多菌靈保留時間1.68 min，定性離子對為192/132，碰撞能量29 eV，定量離子對為192>160，碰撞能量17 eV；內標多菌靈-D3保留時間為1.67 min，定量離子對為195>160，碰撞能量16 eV。

2 結果與討論

2.1 GPC凈化

如圖1所示，多菌靈在25 min后才被淋洗出來，38 min后仍有多菌靈未洗脫，所以食用植物油樣品中的多菌靈不適用于GPC方法來凈化。

圖1 多菌靈每分鐘餾分回收率

2.2 固相萃取柱凈化方法

采用固相萃取柱進行樣品的凈化已得到廣泛應用，壽林飛等[11]考察了NH2柱用于凈化食用植物油中阿維菌素及甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(甲維鹽)的淋洗方法，回收率可達到95%以上。

本試驗也考察了不同比例的二氯甲烷和甲醇洗脫效果。圖2表明，比較10 mL二氯甲烷-甲醇不同配比的洗脫液，當體積比在95∶5的條件下菜籽油樣品中多菌靈回收率最高，達到94.6%，可見該條件下可滿足菜籽油中多菌靈回收試驗的要求。若再加大甲醇比例，會增加目標物質雜質含量，故本試驗選擇二氯甲烷+甲醇(95∶5)為洗脫試劑作為食用植物油樣品中多菌靈檢測的凈化條件。與GPC凈化相比，采用氨基固相萃取柱時，操作簡單，本試驗為植物油中多菌靈等不適宜用GPC凈化的農藥殘留分析提供參考。

圖2 不同比例二氯甲烷-甲醇洗脫多菌靈回收率

2.3 線性范圍

本試驗采用內標法定量，在所述儀器條件下進行測定，以標樣峰面積與標準溶液中內標物峰面積之比為縱坐標，標準品濃度為橫坐標繪制標準曲線。結果顯示，在1～500 μg·L-1，多菌靈線性關系良好，線性方程為y=10.470x+0.012 8，相關系數1.000。可見該法穩定性良好。

2.4 回收率和精密度

在未檢出多菌靈的大豆油、花生油和菜籽油樣品中分別添加不同含量的多菌靈標準溶液，渦旋混合，室溫靜置30 min后，按1.2節所述步驟對加標的3檔6水平樣品進行前處理過程及上機分析，并計算加標回收率和相對標準偏差。表1結果表明，回收率范圍為81.8%～93.5%，相對標準偏差范圍為4.6%～8.9%，符合農藥殘留分析方法的要求。