高效液相色譜法測定食品中的非食用色素

劉文靖 宋華靜

摘 要：目的：本文采用高效液相色譜法對豆制品中的酸性橙Ⅱ、堿性橙2及堿性嫩黃0殘留同時展開測定。方法：經預處理、凈化及萃取后的樣品，采用高效液相色譜法進行檢測。結果：經檢測之后，得到酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O的檢出限分別為0.01、0.02、0.01 mg/kg，相對標準偏差平均3.53%。結論：該方法檢測速度快、準確率高，可用于食品中非食用色素的快速檢測。

關鍵詞：高效液相色譜法;食品;非食用色素;檢測

目前，個別生產商為降低成本、保障食品外觀誘人、色澤穩定，在生產食品時會違法添加非食用色素，此類非食用色素對人體存在潛在危害。因此，有必要建立一種可同時檢測食品中多種非食用色素的方法。而高效液相色譜法在食品中非食用色素的測定中應用最廣泛。采用該方法時，樣品通過預處理、凈化及萃取后，可直接快速檢測，操作簡便且準確度高，應用價值豐厚。

1 實驗方法

1.1 儀器與試劑

1260TG-16WS色譜儀，DAD檢測器;固相萃取裝置;KQ-500DE型數控超聲波清洗器。去離子水;甲醇、乙酸銨（均為色譜純）;酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O標準品。Symmetry RC色譜柱，色譜柱溫度40 ℃，檢測波長500 nm。流動相A乙酸銨和四乙基溴化銨溶液，流動相B為甲醇采用梯度洗脫的方法。樣品為市售豆制品。

1.2 樣品預處理

燒杯內放置精密稱取一定量粉碎均勻的豆制品樣品，加入提取液20 mL，至于超聲波下提取20 min后過濾，濾渣中加入提取液20 mL，反復多次后合并濾液，濃縮至10 mL，將pH調整為6，完成樣品溶液的制備[1]。固相萃取柱依次采用甲醇、酸化甲醇溶液預淋洗，控制流速在5 mL/min，柱內液體高度控制在0.5 cm以上，待樣品溶液加入之后流速控制在6 mL/min。以1∶1的比例加入丙酮和正己烷混合溶液5 mL，依次采用丙酮溶液、甲醇溶液各5 mL、3 mL洗滌萃取柱，隨后用5 mL洗脫液（50 mL，1 mol/L的NaOH與500 mL甲醇配制）洗脫萃取柱，收集淋洗液，加水濃縮定容至2 mL，過濾，待測。

2 結果

2.1 色譜柱的選擇

對比50 mm和100 mm的色譜柱對分離非食品色素的影響，得知兩款色譜柱皆可分離分析物，但100 mm色譜柱分析時間較長，因此本試驗選用的色譜分析柱為50 mm的色譜柱。

2.2 流速選擇

該試驗中，流速分別設置為0.2、0.3、0.5 mL/min與0.6 mL/min，對色素分離中不同流速的影響進行觀察，得知0.2 mL/min時，分析時間較長，且分析效果不佳;超出0.5 mL/min時，分離不完全，故而本試驗將流速設置為0.3 mL/min。

2.3 洗脫溶劑和洗脫體積優化

本試驗中選擇的洗脫溶劑有2種，通過對其洗脫效果的對比分析，得知氫氧化鈉-甲醇、氨水-甲醇兩種洗脫溶劑中，前者回收率較高，洗脫時控制在5 mL的用量，能夠完全洗脫色素，故而本次試驗中使用的洗脫溶劑及體積為氫氧化鈉-甲醇溶液5 mL。

2.4 標準曲線和檢出限

配制0.1～20 g/mL的標準溶液，進樣測定，對峰面積（y）與質量濃度（x，g/mL）作圖，即可獲取酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O的線性方程，3者的線性方程分別為y=26 576x+653.19，R2=0.999 7;y=42 361x+538.92，R2=0.999 7;y=51 301x-2 851，R2=0.999 7。確定信噪比S/N為3，并以其對應的目標物濃度進行檢出限的測定，酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O的檢出限分別為0.01、0.02、0.01 mg/kg[2]。

2.5 回收率和精密度試驗

取樣品作標準添加試驗，平行6次，表1顯示了試驗結果。

2.6 實際樣品分析

采用該方法檢測豆制品中非食用色素，未檢出非食用色素。本方法簡便快捷，檢測效率高，實用性強。

3 討論

采用高效液相色譜法對食品中酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O 3種非食用色素進行檢測，操作簡便、靈敏度高，且獲取結果具備可靠性、準確性，可在短時間內定性、定量分析食品中的非食用色素含量，在檢測食品樣品中色素時值得推廣應用。

參考文獻

[1]韓晶.高效液相色譜法檢測食品中常見非食用色素[J].食品安全導刊，2018（27）：100.

[2]鄒孝，鄒春艷，馬麗，等.食品中違禁添加的非食用色素檢測技術進展[J].科技與創新，2016（9）：101-102.