承德地區蜂蜜檢測及前處理方法研究

牛春鈴?龐婕

摘 要：本文對承德地區市售不同品種蜂蜜是否含有農藥殘留進行了分析，檢測對象包括有機磷類有機氯類擬除蟲菊酯類等48種農藥殘留，建立了蜂蜜的前處理技術，以及氣相色譜ECD檢測器和FPD檢測器檢測方法。分析結果表明，在蜂蜜試樣中加入一定體積的甲醇可有效降低蜂蜜粘稠度，用醋酸乙腈作為提取劑，用QuEChERS前處理試劑盒的鹽包和凈化管可以有效降低蜂蜜中糖類和有機酸類，用所建蜂蜜農藥殘留的前處理和氣相色譜檢測方法，對承德地區市售蜂蜜中農藥殘留進行分析檢測，發現農藥殘留檢出率為6%，分別為α-六六六、七氯、氯氰菊酯和百菌清，但濃度遠低于其他食品所規定的農藥最大殘留限量值。

關鍵詞：蜂蜜;農藥殘留;QuEChERS法

承德地處燕山腳下，山場廣闊，養蜂業繁榮，蜂蜜產量豐厚，有荊條蜜、洋槐蜜、棗花蜜、椴樹蜜與桂花蜜等種類。蜂蜜作為藥食同源的健康食品之一，千百年來被人們所鐘愛，但是近年來農藥殘留問題日益突出，蜂蜜是否含有眾口不一，網上有關蜂蜜的信息比比皆是，人們心有惶恐，因此蜂蜜中是否含有是人們一大關注點。有蜂農指出，蜜蜂不會選擇有農藥殘留的花朵采蜜，這會造成蜜蜂大量死亡;但有大量研究表明，在隨機抽取的蜂蜜中，75%～80%都有檢測出[1]，主要為有機磷類、有機氯類和菊酯類。因此，明確蜂蜜中農藥殘留成分及含量，還原蜂蜜真實面貌是又必要的。

1 實驗部分

1.1 樣品、試劑、儀器

樣品：承德地區超市和蜂農自采散蜂蜜，有荊條蜜、洋槐蜜、棗花蜜、椴樹蜜、桂花蜜。

試劑：乙腈、正己烷、丙酮、乙酸乙酯，為色譜純。有機氯和菊酯類標準物質：六六六滴滴涕8種，七氯，艾氏劑，異菌脲，氟氯氰菊，氟胺氰菊，五氯硝基苯，胺菊酯，氰戊菊酯，氯菊酯，溴氰菊酯，乙烯菌核利，百菌清，狄氏劑，異狄氏劑，腐霉利，丁草胺，甲氰菊酯，氰戊菊酯以及氯氰菊酯;有機磷類標準物質：敵敵畏，百治磷，乙拌磷，甲基對硫磷，樂果，三唑磷，亞胺硫磷，敵百蟲，滅線磷，甲拌磷，吡菌磷，對硫磷，殺蟲畏，蠅毒磷，馬拉硫磷，速滅磷，硫環磷與保棉磷;均購自北京壇墨質檢科技有限公司質量濃度為100 μg/mL。

儀器：島津氣相色譜儀配有ECD檢測器、安捷倫氣相色譜儀配有FPD檢測器、QuEChERS前處理試劑盒。

1.2 提取和凈化

稱取2.00 g蜂蜜試樣于50 mL離心管中，加入2.0 mL甲醇，加入10.0 mL

1%醋酸乙腈，超聲提取20 min，渦旋勻漿1 min，加入QuEChERS前處理試劑盒中萃取鹽包，渦旋3 min，6 000 r/min離心5 min，將上清液轉移至QuEChERS前處理試劑盒凈化管，吸取上清液過0.22 μm膜，放入進樣瓶中。

2 結果與分析

2.1 前處理方法的優化

因蜂蜜中含有豐富的糖類和有機酸，很粘稠，不利于分析物的提取和分離，在蜂蜜中加入一定量的甲醇，可有效降低蜂蜜的粘稠度，后續實驗在QuEChERS法的基礎上進行了調整，使其更適用于蜂蜜的前處理。

提取：本實驗分別對比了正己烷、乙腈、丙酮、乙酸乙酯四種有機溶劑，結果表明，正己烷、乙酸乙酯、乙腈均可有效提取蜂蜜中農藥殘留，回收率達到50%-120%，丙酮極性比較強，與水互溶，但容易存留雜質，純度不夠，基線不穩。正己烷/乙酸乙酯可實現有機相和水相分離，但操作相對繁瑣;乙腈酸化后可有效分離水相與有機相。與正己烷/乙酸乙酯比較，乙腈提取的脂肪和脂溶性色素相對較少;與正己烷相比，乙腈與極性較小的溶劑不互溶，這樣比較容易去除非極性雜質，農藥殘留回收率在70%～110%。因此在本實驗中，采用酸化后的乙腈溶劑進行農藥提取[2]。

凈化：選用QuEChERS前處理試劑盒進行操作，QuEChERS中起凈化功能的是PSA，PSA為弱離子交換的固相萃取材料，用來去除色素、有機酸及一些糖類和脂肪酸，因蜂蜜中含有豐富的糖類和有機酸，所以本實驗選用QuEChERS法進行樣品凈化，能有效降低樣品中雜質的干擾。

2.2 儀器條件的優化

優化后的色譜分離條件：安捷倫氣相色譜儀，色譜柱HP-1，30 mm×0.32 mm×0.25μm;柱流量1.0 mL·min-1恒流;進樣口溫度240 ℃;檢測器ECD，溫度250 ℃;尾吹30 mL·min-1;進樣量1 μL，分流比10∶1;程序升溫155 ℃保持2 min，4 ℃/min升至260 ℃保持15 min。島津氣相色譜儀，色譜柱DB-17，30 mm×0.32 mm×0.25 μm;柱流量1.0 mL·min-1恒流;進樣口溫度250 ℃;檢測器FPD，溫度280 ℃;尾吹30 mL·min-1;進樣量1 μL不分流;程序升溫150 ℃保持2 min，8 ℃/min升至190℃保持5 min，5 ℃/min升至250 ℃保持8 min。

本實驗分別對載氣流速、進樣口溫度、升溫程序、檢測器溫度進行優化。分析結果表明，優化升溫程序后所測農藥組分能夠有效分離，將48種農殘分為3組進行檢測，結果如圖1～3所示，分離效果良好，菊酯類農藥殘留容易降解，在譜圖上農藥殘留有2個或3個峰，但相關系數都高于0.990。溫度過高會使農藥組分分解，溫度過低氣化不完全。有機氯類和菊酯類農藥殘留[3-4]選用ECD檢測器，溫度為250℃，進樣口溫度為240℃（該檢測分為兩組，第一組農藥殘留有α-六六六，β-六六六，δ-六六六，七氯，艾氏劑，O，P-DDE，P，P-DDE，P，P-DDT，異菌脲，氟氯氰菊，氟胺氰菊，五氯硝基苯，胺菊酯，氰戊菊酯，氯菊酯，溴氰菊酯;第二組農藥殘留有氯硝胺，γ-六六六，乙烯菌核利，百菌清，P，P-DDD，狄氏劑，異狄氏劑，腐霉利，丁草胺，甲氰菊酯，氰戊菊酯，氯氰菊酯）;有機磷類[5-6]農藥殘留選用FPD檢測器，溫度為280℃，進樣口溫度為250℃，柱流速以1mL·min-1為宜，模式為恒流模式（所檢農藥殘留有敵敵畏，百治磷，乙拌磷，甲基對硫磷，樂果，三唑磷，亞胺硫磷，敵百蟲，滅線磷，甲拌磷，吡菌磷，對硫磷，殺蟲畏，蠅毒磷，馬拉硫磷，速滅磷，硫環磷，保棉磷）。用優化后的色譜條件對蜂蜜中48農藥殘留進行檢測試驗，回收率在78%-110%。

2.3 方法的準確度和精密度

在空白蜂蜜樣品中分別添加3組農藥混合標準溶液，添加水平為0.010、0.050、0.150 mg/kg，每個添加水平重復測定6次，按1.2的前處理步驟和檢測方法進行回收率試驗。結果表明：48種農藥的平均回收率為78%-110%，RSD≤12%，準確度和精密度均達到農藥殘留分析的要求。

2.4 方法的線性范圍和檢出限

在本方法的基礎上，樣品濃度在10～500 ng/mL時，線性良好，回歸曲線的相關系數（R2）均優于0.990。以信噪比（S/N）約為3時的空白樣品添加濃度為方法檢出限（LOD），LOD范圍為0.000 1～0.010 mg/kg，符合國內相關殘留量要求。

2.5 實際樣品檢測

用所建方法對承德地區市售5種蜂蜜：洋槐蜜、荊條蜜、棗花蜜、椴樹蜜、桂花蜜，每種蜂蜜10例共50例進行檢測，檢出率為6%，有3種蜂蜜檢出農藥殘留，其中洋槐蜜檢出α-六六六濃度為0.000 5 mg/kg和七氯濃度為0.000 8 mg/kg、棗花蜜檢出α-六六六濃度為0.000 4 mg/kg和氯氰菊酯濃度為0.006 mg/kg、桂花蜜檢出百菌清濃度為0.000 5 mg/kg，結合國家標準GB 2763-2016食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量，濃度接近檢出限，遠低于其他食品所規定的農藥最大殘留限量值。

3 結論

本文對QuEChERS方法進行了改進，使其更適用于粘稠度較大的蜂蜜樣品，結合氣相色譜ECD檢測器和FPD檢測器對承德地區不同種類蜂蜜中有機磷類、有機氯類和菊酯類48種農藥殘留進行定性定量分析。試驗結果表明，試樣中添加甲醇可有效降低蜂蜜粘稠度，QuEChERS凈化包可有效去除蜂蜜中糖類和有機酸，降低雜質干擾，通過回收率和重復性驗證，準確度和精密度均達到了分析要求。承德地區所產蜂蜜中農藥殘留檢出率為6%，分別檢出α-六六六、七氯、氯氰菊酯和百菌清，結合國家標準發現濃度殘留量遠低于其他食品所規定的農藥最大殘留限量值。

參考文獻

[1]黃永舜.蜂蜜中農藥殘留的研究進展[J].現代食品，2018（13）：66-68.

[2]林竹光，金珍，劉勇，等.GC-NCI-MS分析茶葉中17種有機氯和擬除蟲菊酯農藥殘留[J].高等學校化學學報，1905，26（12）：2218-2222.

[3]樊艷，馬緩.QuEChERS氣相色譜串聯質譜法測定蜂蜜中20種農藥殘留[J].食品安全質量檢測學報，2019（5）.

[4]方英立，王淑娥，邵麗華，等.蜂蜜中有機氯農藥的毛細管氣相色譜測定法[J].環境與健康雜志，2007（10）：807-809.

[5]隋吳彬.蜂蜜中多種有機磷農藥殘留量的研究[J].安徽農業科學，2007（29）：9348-9350.

[6]周碧青，張金彪，陳萬靈.蜂蜜中8種有機磷農藥殘留量的氣相色譜法測定[J].福建分析測試，2012（6）：9-12.