北柴胡有機氯農藥殘留量分析方法研究

張寬才樊攀陳程（.江蘇九旭藥業有限公司徐州00；.兆科藥業（廣州）有限公司廣州546）

柴胡為我國常用中藥材，有“北柴胡”和“南柴胡”之分，具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣等作用，藥用部位為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根[1]。目前，北柴胡的野生資源有限，難以滿足市場需求。人工栽培的柴胡得到大力發展，為保證產品免受病蟲害的危害，人們大量使用農藥，促進增收。有機氯農藥是廣譜殺蟲劑，屬于神經和內臟毒物，可致癌，曾在世界各國廣泛使用，也曾是我國使用量最大的一類農藥，具有見效快、難降解、人體危害較大、污染水體和土壤等特點，是國內外嚴格限制的環境污染物[2-4]。本文通過建立北柴胡中14種有機氯農藥的毛細管柱氣相色譜檢測方法，為提高北柴胡的產品質量、建立和完善北柴胡產品中有機氯農藥殘留量檢測方法提供依據。

1 儀器、試藥與材料

1.1 儀器：美國Agilent 7890A氣相色譜儀（配有自動進樣器，電子捕獲檢測器，Empower3工作站軟件），DB-1毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。

1.2 試藥：乙酸乙酯為分析純，環己烷為色譜純，硫酸為優級純。

農藥對照品：六六六包括α-BHC（純度98.0%），β-BHC（純度98.4%），γ-BHC（純度 99.5%），δ-BHC（純度 98.5%）4種；滴滴涕包括 PP’-DDE（純度 98.5%），PP’-DDD（純度 99.0%），OP’-DDT（純度98.5%），PP’-DDT（純度98.5%）4種；五氯硝基苯（純度99.0%）；六氯苯（純度99.5%）；七氯（純度99.0%）；氧氯丹；反式-氯丹（純度98.0%）；順式-氯丹（純度99.6%），均購自Dr.EhrenstorfenGmbH。1.3樣品：北柴胡樣品10批，來自江蘇同心堂醫藥連鎖有限公司。

2 方法

2.1 色譜條件和色譜圖：彈性石英毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）（DB-1），63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進樣口溫度210 ℃，檢測器溫度300℃，不分流進樣。程序升溫：初始溫度80℃，保持1 min，每分鐘20℃升至180℃，保持5 min，每分鐘5℃升溫至240℃，每分鐘60℃升溫至300℃，保持5 min。進樣量1 μL，按內標法計算。

2.2 混合對照品工作溶液的制備：混合對照品儲備液的制備：精密稱取六六六（BHC）（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、滴滴涕（DDT）（PP’-DDE、PP’-DDD、OP’-DDT、PP’-DDT）、五氯硝基苯、六氯苯、氧氯丹、七氯、反式-氯丹、順式-氯丹農藥對照品適量，用環己烷分別制成100 ppb的溶液，即得。

內標儲備溶液的制備：精密稱取2，4，5，6-四氯間二甲苯對照品適量，用環己烷制成100 ppb的溶液，即得。

混合對照品工作溶液的制備：精密量取混合對照品溶液（100ppb）1mL，置5mL量瓶中，精密加入內標工作溶液（約100ppb）1 mL，用環己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品約2 g，精密稱定，加乙酸乙酯100 mL，超聲處理30 min，過濾，用乙酸乙酯適量洗滌，合并濾液和洗液，于35℃加壓濃縮至約1 mL，用環己烷轉溶劑2次，濃縮液轉移至10 mL量瓶中，精密加入內標工作溶液（約100 ppb）2 mL，用環己烷稀釋至刻度，搖勻，小心加入濃硫酸1 mL，強力振搖 1 min，離心（3 000 r/min）10 min，分取上清液，即得。

3 結果

3.1 線性關系考察：按“2.2混合對照品工作溶液的制備”項下操作配制混合對照品儲備液和內標儲備溶液，精密量取儲備液用環己烷稀釋成5個濃度梯度的混合標準溶液，取混合標準溶液測定，結果被測組分在1～40 ng/mL內呈良好線性關系，見表1。

表1 14種有機氯農藥回歸方程

3.2 精密度：精密吸取20 ng/mL混合對照品溶液1 μL，重復進樣5次，RSD在2.4%～6.1%之間。

3.3 重復性：稱取同一批樣品5份，每份2 g，精密稱定，分別精密加入20 ng/mL混合對照品溶液1 mL，按“2.3供試品溶液的制備”項下方法提取并測定，RSD在2.7%～9.5%之間。

3.4 穩定性：取“3.3重復性”項下的供試品溶液1份，分別在0 h，6 h，12 h，24 h，36 h測定，RSD 在2.1%～9.0%之間。

3.5 回收率：取同一批號樣品9份，每份2 g，精密稱定，分成3組，分別加入10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL的混合對照品溶液1 mL，回收率在81.4%～105.2%之間，RSD在3.1%～10.5%之間。

3.6 樣品測定：精密稱定北柴胡樣品（粉碎，混勻），按“2.3供試品溶液的制備”項下操作測定，每份樣品檢測2次，用20 ng/mL混合對照品溶液做隨行標準，用內標法定量，結果見表2。

表2 樣品測定結果（ng/g）

4 討論

4.1 中藥材農藥殘留量檢查的關鍵步驟為藥材的前處理，既要盡可能完全提取待測組分，又要盡可能除去樣品中存在的雜質，以避免對色譜柱和檢測器等的污染，減少對檢測結果的干擾。采用超聲萃取和硫酸磺化的凈化方法，方法簡便、快速，14種農藥的加樣回收率在81.4%～105.2%之間，RSD在3.1%～10.5%之間，符合測定要求。

4.2 在10批北柴胡樣品中能檢測出不同濃度的有機氯農藥，但都符合《中國藥典》2015年版規定[1]，表明雖然我國明令禁止使用有機氯類農藥已有20多年[5]，但由于這些農藥性質穩定，降解緩慢，部分地區仍有有機氯類農藥殘留，這就要求我們在栽培藥材選地時仍要對土壤中農藥的殘留量加以監測。