不同消毒液對豬場環境消毒效果的研究

駱菲，段曉紅，王拴柱，王貴江，羅文學，郭彥軍，解冰輝

（河北省畜牧良種工作總站， 河北石家莊050061）

自2018 年8 月2 日遼寧省沈陽市檢驗出首例非洲豬瘟以來，國內養殖場都飽受非瘟之苦，全國豬存欄量急劇下降，大多豬場都出現了空場或主動減群的現象，如今由于產能的不足， 生豬價格一漲再漲。 豬肉漲價了，幸存下來的豬場收入豐厚了， 風險意識也提高了；遭受非瘟打擊的豬場，老板們眼見高利潤的生豬價格，也迫切想復養再生產。 但不論是幸存下來的豬場，還是想要復養的豬場，場內環境消毒自然就成了重中之重。

豬場內部環境使用的消毒藥及采用的消毒方式多種多樣，每種藥物及方式在使用后的效果和持續時間都存在不同。 那么豬場該如何根據自身情況來制定合理的消毒方案呢？ 就是我們可以利用實驗室檢測手段來監測場內環境的消毒效果，通過監測對每次消毒和每次所使用消毒藥做出評估，根據每種藥物的消毒效果以及消毒方式來制定場內日常消毒方案，使消毒工作既能達到預期效果，同時也不會出現因為重視消毒、恐懼疫病而出現盲目消毒、過度消毒的現象。

1 材料與方法

1.1 采樣耗材準備

棉簽、醫用生理鹽水、1.5 毫升離心管、一次性手套、冰袋、記號筆、樣品袋、泡沫箱（保溫箱）。

注：其中棉簽和離心管需要事先經高壓滅菌處理，生理鹽水盡量使用新開口的醫用生理鹽水，也可高壓滅菌。

1.2 采樣時間

消毒前、剛消毒完畢、消毒1～2小時后、消毒4.5 小時后、消毒6.5小時后、消毒16～17 小時后、消毒20 小時后、消毒24 小時后。 注：視情況可以在消毒后選擇2～3 個時間段即可。

1.3 樣品采集地點

豬舍內的：門口、鋼架、窗臺、水池邊、欄桿、地面、風機、料槽底、漏糞板、水簾、棚頂、噴灑管、墻面、過道等。 注：考慮采樣地點如果全部選擇會導致工作量巨大，操作時可以在以上項目中選擇若干項進行采集。

1.4 樣品采集方法

根據事先指定的樣品采集方案，在同一樣品采集地點的同一位置用滅菌后的棉簽（如采樣位置干燥需用生理鹽水沾濕棉簽）粘轉一圈， 然后放入滅菌后的裝有約0.5毫升生理鹽水的1.5 毫升離心管中。

例如： 消毒前在育肥6 舍29池墻面的下墻角采樣，消毒后也應在育肥6 舍29 池墻面的下墻角采樣。 注：同一采樣點的同一位置采樣，才能更好的評價消毒藥的消毒效果。

1.6 樣品采集數量

在每個樣品采集地點需采集3個樣品，這3 個樣品應均勻分布在樣品采集地點，不應在樣品采集地點的某一部位反復粘轉。 例如：墻面這個采樣地點需采集3 個樣品，棉簽粘轉的部位應均勻分布在此墻面。 如圖所示：圖1 為正確采集方法，圖2 為錯誤采集方法。

注： 樣品采集既要照顧全面，也要具有科學性，保證每個樣品都具有代表性。

1.7 不同消毒藥消毒效果比對

不同消毒藥的消毒效果的比較可分別在兩個豬舍內同步進行，或者在同豬舍不同消毒周期進行。

注：在做不同消毒藥效果比對時，兩個不同周期的消毒時間與樣品采集地點及棉簽粘轉地點一定要保持一致。

1.8 樣品保存

采集完樣品立即放置有冰袋的泡沫盒中，盡早寄送至實驗室進行檢測， 如無法立即送至實驗室，或到達實驗室后無法立即檢測，應將樣品放入-20℃冰箱保存。樣品如需寄送，放入有冰袋的泡沫盒中密封運輸。

2 實驗設計

2.1 實驗流程

2.1.1 將樣品均勻涂布在制備好培養基的培養皿中，放入37℃溫箱孵育18～24 小時，菌落讀數。

2.1.2 使用營養湯及恒溫振蕩器增菌，按照實驗要求稀釋，涂布在制備好培養基的培養皿中放入37℃溫箱孵育18～24 小時， 菌落讀數。

2.2 實驗儀器及耗材

儀器：SPX-250 型智能生化培養箱；恒溫振蕩器（IS-RDD3）；蘇凈安泰超凈工作臺； 高壓蒸汽滅菌鍋；移液槍（艾本德）；涂布器；錐形瓶（蜀牛）；酒精燈；鑷子；培養皿；伊紅美藍瓊脂； 營養湯；0.9%生理鹽水；10 毫升離心管；1.5 毫升離心管（注意：離心管、培養皿、鑷子、錐形瓶等都應高壓滅菌后使用）。

2.3 實驗操作過程

2.3.1 增菌

制備營養肉湯： 取18 克營養肉湯樣品， 加熱溶解于1000 毫升蒸餾水中，121℃高壓滅菌15 分鐘,備用（按需制備）。

分裝：將制備好的營養肉湯分裝到10 毫升離心管中（每管約2～3毫升）。

加樣：用移液槍吸取約200 微升待檢樣品加到已分裝好的離心管中。

培養：將加有樣品的離心管放到37℃的搖床進行增菌18～24 小時。

倒板：制備菌落計數培養基（按說明制備即可）。

倒平板：待培養基冷卻至60℃左右時在酒精燈火焰附近操作進行。 其過程是：將滅過菌的培養皿放在火焰旁，右手拿裝有培養基的三角瓶，左手拔出棉塞；右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通過火焰；用左手將培養皿打開一條稍大于三角瓶口的縫隙， 右手將培養基倒入培養皿，立刻蓋上皿蓋； 待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。

注意：倒過來放置的目的是防止培養基冷卻過程中形成的水滴落到培養基表面。 向培養皿中轉移已滅菌的培養基時，也不要把培養基沾在皿壁上。 否則，空氣中雜菌會在這些粘附培養基上繁殖，并污染皿內培養基。

2.3.2 樣品的稀釋

編號：取無菌平皿15 套，分別標 明 為10-4、10-5、10-6、10-7、10-8 各三套，另取6 支1.5 毫升無菌離心管分別標記為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。

稀釋：在6 支離心管中分別加入180 微升滅菌后的生理鹽水，用移液器吸取20 微升已充分混勻的細菌懸液至10-1 離心管中， 此為的菌落平均數，并按下列公式進行計算：

每毫升中菌落形成單位=同一稀釋度三次重復的平均菌落數×稀釋倍數×20。

用原樣品溶液檢測：

倒板（同上）

涂板（同上）

培養（同上）

計數（同上）或長時間濕熱的區域。

火堿溶液2∶100： 優點是部分區域消毒更為徹底， 時效性較長，例如：豬舍圍欄墻面、豬舍漏糞板、水嘴周圍等這些時長時間沾染糞污又不易洗刷干凈或長時間濕熱的區域，經火堿潑灑浸泡后，有很明顯的殺菌效果，并且細菌再滋生的速度也較為緩慢。 缺點是由于是潑灑式消毒，只能覆蓋較為低平的10 倍稀釋。 將10-1 離心管充分振蕩、混勻，吸取20 微升至10-2 離心管中，此為100 稀釋，依次類推。

表1 使用戊二醛奎甲溴銨溶液1∶2000 及火堿溶液2∶100 消毒效果檢測

2.3.3 涂板

取樣： 分別吸取10-4、10-5、10-6、10-7、10-8 的稀釋菌懸液各50 微升，對號放入編好號的無菌平皿中。

涂布：用涂布器將滴入平皿中的菌液涂布均勻。

2.3.4 培養

將涂布好的平皿倒置， 放入37℃溫箱孵育18～24 小時。

2.3.5 計數

算出同一稀釋度三個平板上

3 結果（見表1）

以上結果為某豬場豬舍分別使用戊二醛奎甲溴銨溶液1∶200 及火堿溶液2∶100 消毒效果檢測。

通過結果顯示，戊二醛奎甲溴銨溶液1∶200： 優點是消毒覆蓋面較為全面，例如：風機葉扇、水簾、豬舍鋼架、豬舍窗臺等半高空衛生死角可覆蓋到。 一些鋼鐵結構的豬舍器械也可覆蓋消毒。 缺點是由于是噴霧式消毒，藥物霧化后散落在豬舍及器械表面， 風干蒸發后，細菌很快滋生，例如：豬舍圍欄墻面、豬舍漏糞板、水嘴周圍等這些平時長時間沾染糞污又不易洗刷干凈或深凹區域，例如：豬舍窗臺、豬舍水簾；由于火堿的強腐蝕性，一些含鋼鐵結構的區域也不能使用，例如：風機葉扇、豬舍鋼架等區域。

4 結論

通過數據可知，再嚴密的消毒程序也要執行到位，針對不同的消毒區域使用不同的消毒方法和消毒劑，根據消毒劑的滅菌時效確定消毒密度，重點關注消毒死角如風機、鋼架等。