鋅指E盒結合蛋白1在子宮內膜癌患者中的表達及意義

郭佳義

(北京積水潭醫院婦產科，北京 100096)

子宮內膜癌是臨床常見的惡性腫瘤，占女性生殖系統惡性腫瘤的20%～30%，其中以腺癌發病率最高。外源性激素類藥物、放射線污染、感染等均與子宮內膜癌的發生、發展有關。子宮內膜癌好發于圍絕經期和絕經后女性，且近幾年其發病年齡趨向年輕化。目前，關于子宮內膜癌的發生機制尚未完全明確[1]。鋅指E盒結合蛋白1(ZEB1)被發現與多種腫瘤侵襲有關[2-3]，包括肝癌、前列腺癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中均檢測出ZEB1的高表達[4]。目前，國內關于ZEB1在子宮內膜癌中的表達報道較少，本研究選取本院2015年1月至2018年6月收治的子宮內膜癌患者為研究對象，通過免疫組織化學法檢測ZEB1在子宮內膜癌中的表達情況，分析其與不同臨床病理特征間的關系，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2015年1月至2018年6月收治的子宮內膜癌患者150例為觀察組，另選取同期150例健康體檢者為對照組。觀察組年齡40～60歲，平均(50.57±3.24)歲；已婚101例，未婚49例；已育123例，未育27例；子宮內膜癌臨床分期：Ⅰ期50例，Ⅱ期56例，Ⅲ～Ⅳ期44 例；子宮肌層浸潤：浸潤深度≥1/2有74例，<1/2 有76例；盆腔淋巴結轉移28例，未出現淋巴結轉移122例。對照組年齡40～62歲，平均(50.98±3.87)歲；已婚102例，未婚48例；已育127例，未育23例。納入標準：(1)對本研究知情同意，并簽署知情同意書的患者；(2)手術治療后保存病理切片患者；(3)首次確診患者；(4)病理類型為子宮內膜樣腺癌患者；(5)臨床資料完整患者。排除標準：(1)合并子宮內膜增生癥患者；(2)妊娠期、哺乳期患者；(3)盆腔癌、宮頸癌等婦科其他惡性腫瘤患者。觀察組術后病理結果均由2名以上病理科醫師進行診斷。根據國際婦產科聯盟制定的子宮內膜癌高、中、低分化標準對觀察組患者標本進行病理分級，其中高分化(G1組) 57例，中分化(G2 組)78例，低分化(G3組)15例。G1組年齡42～60歲，平均(50.55±3.20)歲；G2組年齡42～61歲，平均(50.48±3.28)歲；G3組年齡42～61歲，平均(51.58±3.29)歲。觀察組與對照組年齡、婚育情況等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1檢測方法 取觀察組150例子宮內膜癌組織及對照組150例正常子宮內膜組織進行研究，使用10%甲醛固定組織，石蠟包埋后以4 μm厚度連續切片，貼片后置入80 ℃烤箱內脫水，采用免疫組織化學法檢測ZEB1，所有步驟必須嚴格按照說明書進行。具體操作步驟如下：切片脫蠟，配制磷酸鹽緩沖液，抗原修復，滴加過氧化氫消除內源性過氧化物酶，滴加一抗，滴加二抗，DAB顯色，復染，返藍，逆梯度乙醇脫水，二甲苯脫水5 min，中性樹脂封片待檢。

1.2.2結果判讀 ZEB1陽性表達可位于細胞質和細胞核中，結果基于染色強度和陽性細胞占比進行判定。染色結果評分[5]：染色強度為無顯色、淺黃色、深黃色、棕色分別對應評分0～3分。陽性細胞占比評分[6]：0%、>0%～25%、>25%～50%、>50%～100%分別對應評分0～3分。根據染色結果評分與陽性細胞占比評分的乘積評價ZEB1表達情況：<3分為“-”，表示陰性結果；3～6分為“+”、7～8分為“++”、9分為“+++”，均表示陽性結果。

1.3觀察指標 比較觀察組與對照組的ZEB1表達情況；比較觀察組不同病理分級患者的ZEB1表達情況；分析觀察組ZEB1表達情況與子宮內膜癌臨床病理特征的關系。

2 結 果

2.1觀察組ZEB1陽性表達的典型表現 觀察組子宮內膜癌組織ZEB1陽性表達的典型表現為細胞核中出現淺黃色、深黃色或棕色顆粒。見圖1。

注：A為對照組正常子宮內膜組織ZEB1表達情況，箭頭顯示ZEB1表達于內膜間質；B為觀察組子宮內膜癌組織ZEB1表達情況，箭頭顯示ZEB1表達于細胞核中，在腺癌上皮組織內無表達。

圖1 觀察組ZEB1陽性表達的典型表現

2.2觀察組與對照組ZEB1表達情況比較 觀察組ZEB1陽性率為66.67%，明顯高于對照組的13.33%，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.3G1、G2、G3組與對照組ZEB1表達情況比較 G1、G2、G3組ZEB1陽性率均高于對照組(P<0.05)；G3組ZEB1陽性率高于G2組與G1組(P<0.05)；G2組ZEB1陽性率高于G1組(P<0.05)。見表2。

表1 觀察組與對照組ZEB1表達情況比較[n(%)]

注：與對照組比較，aP<0.05。

表2 G1、G2、G3組與對照組ZEB1表達情況比較[n(%)]

注：與對照組比較，aP<0.05；與G1組比較，bP<0.05；與G2組比較，cP<0.05。

2.4觀察組ZEB1表達情況與子宮內膜癌臨床病理特征的關系 觀察組腫瘤分期越高、肌層浸潤深度越深、存在淋巴結轉移患者的ZEB1陽性率越高(P<0.05)。見表3。

表3 觀察組ZEB1表達情況與子宮內膜癌臨床病理特征的關系[n(%)]

3 討 論

子宮內膜癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，源于內膜上皮組織[7]，近年來其發病率有逐年上升趨勢[8]。子宮內膜癌發生機制與雌激素依賴有關，多見于絕經后女性，早期診斷和治療是延長生存時間的重要措施。ZEB1是一種鋅指結構的轉錄抑制因子，是微小RNA-200c(miR-200c)下游的靶基因之一，在腫瘤發生中受miR-200c的負調控[9]。鄭國旭等[10]研究發現，直腸癌患者的直腸黏膜與健康人群的直腸黏膜相比，ZEB1表達上調明顯。沈曉萍等[11]的1項體外研究顯示，下調ZEB1的表達可以明顯降低胃癌細胞的侵襲、轉移特性。本研究對150例子宮內膜癌患者及健康對照者用免疫組織化學法進行了ZEB1表達情況檢測，結果顯示，觀察組ZEB1陽性率為66.67%，明顯高于對照組的13.33%，差異有統計學意義(P<0.05)，提示ZEB1的表達與子宮內膜癌的發生可能具有密切聯系。陳麗娟等[12]研究發現，子宮內膜癌的發生、發展與ZEB1不平衡表達有一定關系，與本研究結果類似。

本研究對觀察組不同病理分級子宮內膜癌患者的ZEB1表達情況進行比較發現，G1、G2、G3組ZEB1陽性率均高于對照組(P<0.05)；且隨著子宮內膜癌病理分級升高，ZEB1陽性率也逐漸升高。1項大鼠模型試驗結果顯示，轉錄調節因子ZEB1表達上調的過程與上皮鈣黏蛋白(E-cadherin)的轉錄阻遏過程具有密切聯系，ZEB1是E-cadherin直接轉錄的重要抑制物[13]，ZEB1在人類腫瘤細胞中的表達水平與 E-cadherin抑制程度密切相關，而E-cadherin抑制越強烈，上皮細胞就會逐漸失去上皮表型。RNA水平下介導ZEB1表達下調能夠使E-cadherin表達去阻遏，細胞間的連接逐漸恢復[14]，這充分提示ZEB1 在子宮內膜癌變過程中扮演著重要角色。本研究結果顯示，觀察組腫瘤分期越高、存在淋巴結轉移、肌層浸潤深度越深的患者ZEB1陽性率越高。分析其原因如下：ZEB家族包含ZEB1與ZEB2 兩個成員，是細胞核轉錄因子的重要組成部分，都具有C端鋅指簇與N端鋅指簇，鋅指簇中都具有能結合E-cadherin基因啟動子中E2盒[CCACCT(G)]的特殊序列[15]。ZEB1兩個鋅指簇間可能存在蛋白與蛋白相互作用的同源結構域，這些特殊序列能與E-cadherin啟動子中E2 盒特異性結合，通過抑制E-cadherin轉錄對細胞上皮間質轉化過程產生誘導作用，從而增強細胞的轉移、侵襲能力[16]。

4 結 論

ZEB1在子宮內膜癌組織中呈高表達，且子宮內膜癌病理分級越高，ZEB1陽性率越高；不同腫瘤分期、浸潤深度及有無淋巴結轉移患者的ZEB1表達具有明顯差異。ZEB1可能參與了子宮內膜癌的發生與發展過程，是子宮內膜癌診斷、治療的潛在標志物。