CXCL5、HMGB1在非小細胞肺癌患者中的表達及臨床意義

孔麗蕊，張 艷，徐曉華，李鴻釧，劉 翔，謝葉紅，蔣順寧

(四川省成都市郫都區中醫醫院檢驗科，四川成都 611730)

肺癌是目前發病率最高的惡性腫瘤，占腫瘤死因第一位[1]。非小細胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的80%，其具有發病隱匿、病情進展迅速的特點，70%～80%患者就診時已處于中晚期，治療后復發率高，且預后不良[2]。近年來，臨床關于影響NSCLC發生、發展因素的研究越來越多。CXC趨化因子配體5(CXCL5)是一種小分子蛋白質，具有較強的粒細胞趨化作用[3]。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是廣泛存在于真核細胞核中的重要非組蛋白，具有誘導炎性反應，促進腫瘤細胞增殖分化，調節血管內皮細胞功能等生物學作用[4]。相關研究顯示，CXCL5、HMGB1在腎癌、胃癌等惡性腫瘤中異常表達，并與這些腫瘤的進展密切相關[5-6]。但目前關于CXCL5、HMGB1在NSCLC中表達的相關研究較少，本研究檢測了CXCL5、HMGB1在NSCLC中的表達情況，并分析了CXCL5、HMGB1與NSCLC患者臨床病理特征及預后的關系，旨在為臨床NSCLC的診療提供理論依據，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年6月至2014年6月本院收治并確診的81例原發性NSCLC患者為研究對象。收集所有患者的NSCLC組織及經病理檢查證實未被浸潤的癌旁正常組織用于本研究。所有患者均實施肺癌根治性手術治療。81例NSCLC患者中，男54例，女27例；年齡23～80歲，中位年齡54歲；<54歲患者26例，≥54歲患者55例；腫瘤直徑<3 cm的有39例，≥3 cm的有42例；組織學分級Ⅰ級18例，Ⅱ級34例，Ⅲ級29例。納入標準：(1)經病理檢查確診為NSCLC；(2)本次治療前未接受放、化療；(3)治療依從性較好，能定期隨訪；(4)心肝腎等重要臟器功能正常；(5)所有標本收集均征得患者知情同意。排除標準：(1)臨床資料不完整；(2)隨訪期間失訪；(3)合并其他惡性腫瘤。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1檢測方法 將收集的81例NSCLC組織及癌旁正常組織于離體1 h內用10%甲醛溶液固定，脫水，用石蠟包埋成塊，采用組織切片機(北京中西遠大科技有限公司，型號：M398419)切成4 μm連續切片，二甲苯脫蠟，檸檬酸鈉緩沖液抗原修復，磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗，內源性過氧化物酶滅活，加山羊血清(浙江天杭生物科技股份有限公司)封閉。NSCLC組織和癌旁正常組織分別滴加稀釋比例為1∶200的兔抗人CXCL5單克隆抗體(上海群己生物科技有限公司)和稀釋比例為1∶200的兔抗人HMGB1單克隆抗體(上海煊翎生物科技有限公司)，4 ℃孵育12 h后37 ℃復溫45 min，PBS漂洗，滴加稀釋比例為1∶500的羊抗鼠IgG(深圳市豪地華拓生物科技有限公司)，25 ℃孵育45 min，PBS漂洗，使用DAB顯色試劑盒(上海科敏生物科技有限公司)顯色5 min，蘇木精復染，梯度乙醇脫水，中性樹脂封片劑固封，顯微鏡(武漢科賽思機電有限公司，型號：ISM-M2000-DIC)下觀察CXCL5、HMGB1的表達情況。結果判定：由兩名具有執業資格的病理科醫師對染色結果進行判定。染色程度評分：0分為細胞不著色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細胞百分比評分：0分為陽性細胞百分比<5%，1分為陽性細胞百分比為5%～25%，2分為陽性細胞百分比為>25%～50%，3分為陽性細胞百分比>50%。染色程度評分與陽性細胞百分比評分之和為最終得分，最終得分0～4分判定為陰性表達，>4分判定為陽性表達。

1.2.2隨訪 采用門診復查的方式進行隨訪，術后第1年每3個月隨訪1次，第2年每6個月隨訪1次，隨訪至患者死亡或術后60個月止。記錄所有患者的總生存率、無進展生存率。

1.3統計學處理 采用SPSS22.0軟件對數據進行統計分析。計量資料不滿足正態分布的以M表示；計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier法。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1CXCL5、HMGB1在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達情況 免疫組織化學染色法結果顯示，CXCL5、HMGB1均表達于細胞質內，表現為棕黃色顆粒，見圖1、2。NSCLC組織中CXCL5陽性54例，占66.67%，癌旁正常組織中CXCL5陽性16例，占19.75%，CXCL5在NSCLC組織中的陽性率明顯高于癌旁正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)。NSCLC組織中HMGB1陽性65例，占80.25%，癌旁正常組織中HMGB1陽性21例，占25.93%，HMGB1在NSCLC組織中的陽性率明顯高于癌旁正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 CXCL5、HMGB1在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達情況[n(%)]

2.2NSCLC組織中CXCL5、HMGB1陽性率與患者臨床病理特征的關系 不同性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑患者NSCLC組織中CXCL5陽性率差異均無統計學意義(P>0.05)；不同組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移、血管浸潤患者NSCLC組織中CXCL5陽性率差異均有統計學意義(P<0.05)。不同性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑、血管浸潤患者NSCLC組織中HMGB1陽性率差異均無統計學意義(P>0.05)；不同組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移患者NSCLC組織中HMGB1陽性率差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 NSCLC組織中CXCL5、HMGB1陽性率與患者臨床病理特征的關系[n(%)]

注：A為CXCL5在NSCLC組織中的陽性表達；B為CXCL5在癌旁正常組織中的陰性表達。

圖1 CXCL5在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達情況

注：A為HMGB1在NSCLC組織中的陽性表達；B為HMGB1在癌旁正常組織中的陰性表達。

圖2 HMGB1在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達情況

2.3CXCL5陽性和陰性患者的生存分析 CXCL5陽性患者總生存率、無進展生存率均明顯低于CXCL5陰性患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3；Kaplan-Meier生存曲線見圖3、4。

表3 CXCL5陽性和陰性患者總生存率、無進展生存率比較(%)

圖3 CXCL5陽性和陰性患者總生存率的Kaplan-Meier生存曲線

圖4 CXCL5陽性和陰性患者無進展生存率的Kaplan-Meier生存曲線

2.4HMGB1陽性和陰性患者的生存分析 HMGB1陽性患者總生存率、無進展生存率均明顯低于HMGB1陰性患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表4；Kaplan-Meier生存曲線見圖5、6。

表4 HMGB1陽性和陰性患者總生存率、無進展生存率比較(%)

圖5 HMGB1陽性和陰性患者總生存率的Kaplan-Meier生存曲線

圖6 HMGB1陽性和陰性患者無進展生存率的Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

肺癌是最常見的肺原發性惡性腫瘤，可向腦、肝臟、胰腺等臟器轉移，腦轉移時可因壓迫產生腦疝而危及生命，因此，肺癌已成為對患者健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一[7]。肺癌病理類型包括小細胞肺癌和NSCLC，其中NSCLC是肺癌最常見的病理類型[8]。NSCLC早期癥狀不典型，常在局部生長、浸潤、壓迫組織引起特異性癥狀時被發現，而此時NSCLC多已處于中晚期，失去最佳治療時機[9]。隨著分子生物學技術快速發展，腫瘤分子標志物在惡性腫瘤診斷中的應用價值受到廣泛關注。尋找與NSCLC發生、發展相關的分子標志物應用于NSCLC診斷及治療，對提升患者預后有重要指導意義。

趨化因子是一類能夠吸引白細胞移行到感染部位的低分子量蛋白質，能夠與淋巴組織中的抗原提呈細胞相互作用而監視病原體入侵；還可在正常組織修復、血管生成、炎性反應、惡性腫瘤進展過程中發揮重要作用[10]。CXCL5屬于趨化因子蛋白家族的一員，具有較強的粒細胞趨化作用，可促進免疫細胞殺傷腫瘤細胞，又可與其受體結合促進腫瘤細胞增殖、侵襲及轉移[11]。據報道，NSCLC組織中存在趨化因子表達水平升高現象[12]，這在本研究中也得到了證實。本研究結果顯示，CXCL5在NSCLC組織中的陽性率明顯高于癌旁正常組織，提示CXCL5可能參與了NSCLC的發生。進一步分析顯示，組織學分級高、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、有血管浸潤的患者NSCLC組織中CXCL5陽性率高于組織學分級低、臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、無血管浸潤的患者；CXCL5陽性患者總生存率、無進展生存率均低于CXCL5陰性患者，提示CXCL5與NSCLC患者的臨床病理特征及預后相關，CXCL5可能參與了NSCLC的病情進展。其原因可能是CXCL5陽性患者的腫瘤新生血管較多，血管浸潤及淋巴結轉移更快；同時，組織分化程度越低，腫瘤惡性程度越高，患者預后生存期就越短。

HMGB1為高遷移率族蛋白家族成員之一，是一種廣泛分布于哺乳動物細胞的高度保守核蛋白，細胞核中HMGB1可與DNA結合而參與DNA轉錄、修飾[13]；且由淋巴細胞、粒細胞、單核-巨噬細胞等免疫細胞分泌的HMGB1可參與機體炎性反應。HMGB1還可與特異性細胞膜受體結合而參與腫瘤細胞增殖、浸潤及轉移[14]。據報道，前列腺癌、結腸癌、甲狀腺癌組織中存在HMGB1過表達的現象[15]。本研究結果顯示，HMGB1在NSCLC組織中陽性率明顯高于癌旁正常組織，且組織學分級越高、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的NSCLC患者HMGB1陽性率越高；且HMGB1陽性患者總生存率、無進展生存率均低于HMGB1陰性患者，提示HMGB1與NSCLC的發生、臨床病理特征及預后有密切關系。其原因可能如下：NSCLC細胞在生長及轉移過程中伴隨血管快速生長，血管生長過程中會與正常細胞競爭營養，正常細胞由于缺乏生長所需營養而死亡，死亡細胞被動分泌HMGB1，導致NSCLC組織中HMGB1表達水平明顯升高。

4 結 論

綜上所述，CXCL5、HMGB1在NSCLC組織中呈高表達，其表達情況與NSCLC患者臨床病理特征及預后有關。CXCL5、HMGB1可能對NSCLC的臨床診斷及預后評估有一定指導意義。但本研究納入病例數較少，結果有待擴大樣本量進一步研究證實。