CXCL5、HMGB1在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)及臨床意義

孔麗蕊，張 艷，徐曉華，李鴻釧，劉 翔，謝葉紅，蔣順寧

(四川省成都市郫都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都 611730)

肺癌是目前發(fā)病率最高的惡性腫瘤，占腫瘤死因第一位[1]。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的80%，其具有發(fā)病隱匿、病情進(jìn)展迅速的特點(diǎn)，70%～80%患者就診時(shí)已處于中晚期，治療后復(fù)發(fā)率高，且預(yù)后不良[2]。近年來(lái)，臨床關(guān)于影響NSCLC發(fā)生、發(fā)展因素的研究越來(lái)越多。CXC趨化因子配體5(CXCL5)是一種小分子蛋白質(zhì)，具有較強(qiáng)的粒細(xì)胞趨化作用[3]。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是廣泛存在于真核細(xì)胞核中的重要非組蛋白，具有誘導(dǎo)炎性反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖分化，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能等生物學(xué)作用[4]。相關(guān)研究顯示，CXCL5、HMGB1在腎癌、胃癌等惡性腫瘤中異常表達(dá)，并與這些腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)[5-6]。但目前關(guān)于CXCL5、HMGB1在NSCLC中表達(dá)的相關(guān)研究較少，本研究檢測(cè)了CXCL5、HMGB1在NSCLC中的表達(dá)情況，并分析了CXCL5、HMGB1與NSCLC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床NSCLC的診療提供理論依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年6月至2014年6月本院收治并確診的81例原發(fā)性NSCLC患者為研究對(duì)象。收集所有患者的NSCLC組織及經(jīng)病理檢查證實(shí)未被浸潤(rùn)的癌旁正常組織用于本研究。所有患者均實(shí)施肺癌根治性手術(shù)治療。81例NSCLC患者中，男54例，女27例；年齡23～80歲，中位年齡54歲；<54歲患者26例，≥54歲患者55例；腫瘤直徑<3 cm的有39例，≥3 cm的有42例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)18例，Ⅱ級(jí)34例，Ⅲ級(jí)29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理檢查確診為NSCLC；(2)本次治療前未接受放、化療；(3)治療依從性較好，能定期隨訪；(4)心肝腎等重要臟器功能正常；(5)所有標(biāo)本收集均征得患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不完整；(2)隨訪期間失訪；(3)合并其他惡性腫瘤。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)方法 將收集的81例NSCLC組織及癌旁正常組織于離體1 h內(nèi)用10%甲醛溶液固定，脫水，用石蠟包埋成塊，采用組織切片機(jī)(北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司，型號(hào)：M398419)切成4 μm連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，檸檬酸鈉緩沖液抗原修復(fù)，磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗，內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活，加山羊血清(浙江天杭生物科技股份有限公司)封閉。NSCLC組織和癌旁正常組織分別滴加稀釋比例為1∶200的兔抗人CXCL5單克隆抗體(上海群己生物科技有限公司)和稀釋比例為1∶200的兔抗人HMGB1單克隆抗體(上海煊翎生物科技有限公司)，4 ℃孵育12 h后37 ℃復(fù)溫45 min，PBS漂洗，滴加稀釋比例為1∶500的羊抗鼠IgG(深圳市豪地華拓生物科技有限公司)，25 ℃孵育45 min，PBS漂洗，使用DAB顯色試劑盒(上海科敏生物科技有限公司)顯色5 min，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，中性樹(shù)脂封片劑固封，顯微鏡(武漢科賽思機(jī)電有限公司，型號(hào)：ISM-M2000-DIC)下觀察CXCL5、HMGB1的表達(dá)情況。結(jié)果判定：由兩名具有執(zhí)業(yè)資格的病理科醫(yī)師對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行判定。染色程度評(píng)分：0分為細(xì)胞不著色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分：0分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比<5%，1分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比為5%～25%，2分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比為>25%～50%，3分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比>50%。染色程度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分之和為最終得分，最終得分0～4分判定為陰性表達(dá)，>4分判定為陽(yáng)性表達(dá)。

1.2.2隨訪 采用門診復(fù)查的方式進(jìn)行隨訪，術(shù)后第1年每3個(gè)月隨訪1次，第2年每6個(gè)月隨訪1次，隨訪至患者死亡或術(shù)后60個(gè)月止。記錄所有患者的總生存率、無(wú)進(jìn)展生存率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料不滿足正態(tài)分布的以M表示；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan-Meier法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1CXCL5、HMGB1在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況 免疫組織化學(xué)染色法結(jié)果顯示，CXCL5、HMGB1均表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，表現(xiàn)為棕黃色顆粒，見(jiàn)圖1、2。NSCLC組織中CXCL5陽(yáng)性54例，占66.67%，癌旁正常組織中CXCL5陽(yáng)性16例，占19.75%，CXCL5在NSCLC組織中的陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。NSCLC組織中HMGB1陽(yáng)性65例，占80.25%，癌旁正常組織中HMGB1陽(yáng)性21例，占25.93%，HMGB1在NSCLC組織中的陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 CXCL5、HMGB1在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況[n(%)]

2.2NSCLC組織中CXCL5、HMGB1陽(yáng)性率與患者臨床病理特征的關(guān)系 不同性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑患者NSCLC組織中CXCL5陽(yáng)性率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；不同組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤(rùn)患者NSCLC組織中CXCL5陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑、血管浸潤(rùn)患者NSCLC組織中HMGB1陽(yáng)性率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；不同組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者NSCLC組織中HMGB1陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 NSCLC組織中CXCL5、HMGB1陽(yáng)性率與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

注：A為CXCL5在NSCLC組織中的陽(yáng)性表達(dá)；B為CXCL5在癌旁正常組織中的陰性表達(dá)。

圖1 CXCL5在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況

注：A為HMGB1在NSCLC組織中的陽(yáng)性表達(dá)；B為HMGB1在癌旁正常組織中的陰性表達(dá)。

圖2 HMGB1在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況

2.3CXCL5陽(yáng)性和陰性患者的生存分析 CXCL5陽(yáng)性患者總生存率、無(wú)進(jìn)展生存率均明顯低于CXCL5陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3；Kaplan-Meier生存曲線見(jiàn)圖3、4。

表3 CXCL5陽(yáng)性和陰性患者總生存率、無(wú)進(jìn)展生存率比較(%)

圖3 CXCL5陽(yáng)性和陰性患者總生存率的Kaplan-Meier生存曲線

圖4 CXCL5陽(yáng)性和陰性患者無(wú)進(jìn)展生存率的Kaplan-Meier生存曲線

2.4HMGB1陽(yáng)性和陰性患者的生存分析 HMGB1陽(yáng)性患者總生存率、無(wú)進(jìn)展生存率均明顯低于HMGB1陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4；Kaplan-Meier生存曲線見(jiàn)圖5、6。

表4 HMGB1陽(yáng)性和陰性患者總生存率、無(wú)進(jìn)展生存率比較(%)

圖5 HMGB1陽(yáng)性和陰性患者總生存率的Kaplan-Meier生存曲線

圖6 HMGB1陽(yáng)性和陰性患者無(wú)進(jìn)展生存率的Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

肺癌是最常見(jiàn)的肺原發(fā)性惡性腫瘤，可向腦、肝臟、胰腺等臟器轉(zhuǎn)移，腦轉(zhuǎn)移時(shí)可因壓迫產(chǎn)生腦疝而危及生命，因此，肺癌已成為對(duì)患者健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一[7]。肺癌病理類型包括小細(xì)胞肺癌和NSCLC，其中NSCLC是肺癌最常見(jiàn)的病理類型[8]。NSCLC早期癥狀不典型，常在局部生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、壓迫組織引起特異性癥狀時(shí)被發(fā)現(xiàn)，而此時(shí)NSCLC多已處于中晚期，失去最佳治療時(shí)機(jī)[9]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)快速發(fā)展，腫瘤分子標(biāo)志物在惡性腫瘤診斷中的應(yīng)用價(jià)值受到廣泛關(guān)注。尋找與NSCLC發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的分子標(biāo)志物應(yīng)用于NSCLC診斷及治療，對(duì)提升患者預(yù)后有重要指導(dǎo)意義。

趨化因子是一類能夠吸引白細(xì)胞移行到感染部位的低分子量蛋白質(zhì)，能夠與淋巴組織中的抗原提呈細(xì)胞相互作用而監(jiān)視病原體入侵；還可在正常組織修復(fù)、血管生成、炎性反應(yīng)、惡性腫瘤進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用[10]。CXCL5屬于趨化因子蛋白家族的一員，具有較強(qiáng)的粒細(xì)胞趨化作用，可促進(jìn)免疫細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，又可與其受體結(jié)合促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移[11]。據(jù)報(bào)道，NSCLC組織中存在趨化因子表達(dá)水平升高現(xiàn)象[12]，這在本研究中也得到了證實(shí)。本研究結(jié)果顯示，CXCL5在NSCLC組織中的陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常組織，提示CXCL5可能參與了NSCLC的發(fā)生。進(jìn)一步分析顯示，組織學(xué)分級(jí)高、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有血管浸潤(rùn)的患者NSCLC組織中CXCL5陽(yáng)性率高于組織學(xué)分級(jí)低、臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無(wú)血管浸潤(rùn)的患者；CXCL5陽(yáng)性患者總生存率、無(wú)進(jìn)展生存率均低于CXCL5陰性患者，提示CXCL5與NSCLC患者的臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)，CXCL5可能參與了NSCLC的病情進(jìn)展。其原因可能是CXCL5陽(yáng)性患者的腫瘤新生血管較多，血管浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移更快；同時(shí)，組織分化程度越低，腫瘤惡性程度越高，患者預(yù)后生存期就越短。

HMGB1為高遷移率族蛋白家族成員之一，是一種廣泛分布于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的高度保守核蛋白，細(xì)胞核中HMGB1可與DNA結(jié)合而參與DNA轉(zhuǎn)錄、修飾[13]；且由淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌的HMGB1可參與機(jī)體炎性反應(yīng)。HMGB1還可與特異性細(xì)胞膜受體結(jié)合而參與腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移[14]。據(jù)報(bào)道，前列腺癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌組織中存在HMGB1過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象[15]。本研究結(jié)果顯示，HMGB1在NSCLC組織中陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常組織，且組織學(xué)分級(jí)越高、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者HMGB1陽(yáng)性率越高；且HMGB1陽(yáng)性患者總生存率、無(wú)進(jìn)展生存率均低于HMGB1陰性患者，提示HMGB1與NSCLC的發(fā)生、臨床病理特征及預(yù)后有密切關(guān)系。其原因可能如下：NSCLC細(xì)胞在生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移過(guò)程中伴隨血管快速生長(zhǎng)，血管生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)與正常細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)，正常細(xì)胞由于缺乏生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)而死亡，死亡細(xì)胞被動(dòng)分泌HMGB1，導(dǎo)致NSCLC組織中HMGB1表達(dá)水平明顯升高。

4 結(jié) 論

綜上所述，CXCL5、HMGB1在NSCLC組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)情況與NSCLC患者臨床病理特征及預(yù)后有關(guān)。CXCL5、HMGB1可能對(duì)NSCLC的臨床診斷及預(yù)后評(píng)估有一定指導(dǎo)意義。但本研究納入病例數(shù)較少，結(jié)果有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究證實(shí)。