吳 波,劉伶俐△,聶丹文
(1.湖北省隨州市中醫醫院檢驗科,湖北隨州 441300;2.湖北省隨州市疾病預防控制中心檢驗科, 湖北隨州 441300)
胃癌是對全球公共衛生造成巨大負擔的惡性腫瘤之一。據報道,2018年全球新發胃癌病例約為1 033 701例,死亡病例約為782 685例[1]。有研究發現,長鏈非編碼RNA心肌梗死轉錄本 (LncRNA MIAT) 在多種消化系統腫瘤,如結直腸癌、肝癌等的發生、發展過程中具有重要作用[2-3]。基質金屬蛋白酶(MMP)-2和MMP-9均屬于蛋白水解酶,在腫瘤侵襲、轉移中發揮著重要作用[4-5]。目前,關于LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9在胃癌中的研究較少,故本研究通過探討LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9水平在胃癌診斷和預后評估中的應用價值,旨在為臨床工作提供參考。
1.1一般資料 選取2014年4月至2016年9月于隨州市中醫醫院確診的胃癌患者120例為胃癌組,其中男85例,女35例;年齡42~76歲,平均(54.2±8.4)歲;有吸煙史者73例;有飲酒史者94例;體質量指數(BMI)為(25.3±2.1)kg/m2;TNM[6]分期:Ⅰ~Ⅱ期74例,Ⅲ~Ⅳ期46例;腫瘤部位:胃竇部71例,胃體部37例,胃底部12例;組織學類型:管狀腺癌41例,乳頭狀腺癌36例,黏液腺癌27例,印戒細胞癌16例。選取同期住院治療的130例胃良性疾病患者為良性病變組,其中男92例,女性38例;年齡40~77歲,平均(55.2±9.1)歲;有吸煙史者69例;有飲酒史者101例;BMI為(24.2±1.3)kg/m2;其中胃平滑肌瘤58例,胃腺肌瘤40例,胃纖維瘤21例,胃神經纖維瘤11例。選取同期體檢健康者120例為對照組,其中男82例,女38例;年齡45~71歲,平均(54.8±8.8)歲;有吸煙史者59例;有飲酒史者98例;BMI為(24.8±1.5)kg/m2。3組年齡、性別、吸煙史、飲酒史、BMI等一般資料比較,差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。對120例胃癌患者進行為期50個月的隨訪。
1.2血清MMP-2與MMP-9水平檢測 采用酶聯免疫吸附試驗檢測各組血清MMP-2、MMP-9水平,采用美國賽默飛世爾公司Nanodrop ND2000分析儀檢測吸光度。
1.3血清LncRNA MIAT水平檢測 提取血清總RNA,采用實時熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad公司C1000型)進行檢測。采用Primer Premier5.0進行PCR引物設計,引物合成由北京賽百盛基因技術有限公司提供,LncRNA MIAT與GAPDH(內參)引物序列見表1。采用2-ΔCt計算LncRNA MIAT的相對表達水平,結果用對數形式表示。

表1 LncRNA MIAT和GAPDH引物序列

2.1各組血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9水平比較 各組血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9水平比較,差異均有統計學意義(P<0.05)。其中,胃癌組血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9水平均高于良性病變組與對照組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。
2.2血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9水平與胃癌病理特征的關系 血清LncRNA MIAT、MMP-2、MMP-9水平與腫瘤部位無明顯關系(P>0.05),而與胃癌的TNM分期及組織學類型有關(P<0.05),血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9水平在TNM Ⅲ~Ⅳ期和印戒細胞癌患者中增高最為明顯。見表3。
2.3血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9單獨及聯合檢測診斷胃癌的效能 ROC曲線分析結果顯示,血清LncRNA MIAT單獨檢測診斷胃癌的曲線下面積(AUC)為0.887,高于MMP-2和MMP-9單獨檢測。LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9 聯合檢測的AUC(0.937)高于各項指標單獨檢測,靈敏度為79.9%,特異度為94.3%。見圖1、表4。

表2 各組血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9水平比較
注:與胃癌組比較,aP<0.05。

表3 血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9水平與胃癌病理特征的關系

圖1 血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9單獨及聯合檢測診斷胃癌的ROC曲線
2.4危險因素分析 將是否患胃癌作為因變量,血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9水平作為自變量,進行危險因素分析。單因素分析結果顯示,血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9是胃癌發生的危險因素(P<0.05);多因素分析結果顯示,血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9是胃癌發生的獨立危險因素(P<0.05)。見表5。

表4 血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9單獨及聯合檢測診斷胃癌的效能
注:-為無數據。
2.5生存曲線分析 50個月的隨訪完成時,120例胃癌患者中死亡72例,無失訪。以胃癌患者血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9水平的中位數(LncRNA MIAT 為13.4,MMP-2 為42.5 pg/mL,MMP-9為33.1 pg/mL)為界值,將120例患者分為高、低水平LncRNA MIAT,高、低水平MMP-2和高、低水平MMP-9胃癌患者。相比低水平LncRNA MIAT患者(中位生存時間50個月),高水平LncRNA MIAT患者(中位生存時間27個月)中位生存時間明顯縮短(P<0.05),Kaplan-Meier生存曲線見圖2A;相比低水平MMP-2患者(中位生存時間50個月),高水平MMP-2患者(中位生存時間28個月)中位生存時間明顯縮短(P<0.05),Kaplan-Meier生存曲線見圖2B;相比低水平MMP-9患者(中位生存時間50個月),高水平MMP-9患者(中位生存時間33個月)中位生存時間明顯縮短(P<0.05),Kaplan-Meier生存曲線見圖2C。

表5 危險因素分析結果

注:A為LncRNA MIAT的Kaplan-Meier生存曲線;B為MMP-2的Kaplan-Meier生存曲線;C為MMP-9的Kaplan-Meier生存曲線。
圖2 高、低水平血清MIAT、MMP-2和MMP-9胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲線分析
LncRNA MIAT作為腫瘤基因參與多種不同類型腫瘤的發展,尤其在消化道腫瘤發病機制中的研究已取得較大進展。在結直腸癌中,LIU等[7]在癌組織、直腸癌LOVO和SW480細胞系中檢測到LncRNA MIAT水平較癌旁組織和人正常結腸細胞系HcoEpic中的水平均明顯增高,機制研究指出,LncRNA MIAT可通過下調miRNA-132促進結直腸癌細胞的增殖、侵襲、轉移,并抑制細胞凋亡。在胰腺癌中,LI等[8]研究指出,LncRNA MIAT在胰腺癌組織和胰腺癌細胞系PATU-8988、BxPC-3、PANC-1、SW1990和AsPC-1中的表達水平較癌旁組織和人正常胰腺導管上皮細胞系HPDE6-C7均明顯增高,且高表達的LncRNA MIAT與胰腺癌的轉移和增殖相關。在胃癌中,研究者發現LncRNA MIAT可通過EGFR信號通路調控細胞的增殖,參與細胞周期阻滯、細胞凋亡、上皮間質轉化、細胞遷移和侵襲等過程,其水平在胃癌發生早期即可出現增高趨勢[9-10];另一方面,LncRNA MIAT水平還可在一定程度上反映腫瘤細胞的增殖活性[9]。本研究發現,LncRNA MIAT在胃癌患者血清中的水平高于良性病變組和對照組,且其水平與胃癌的TNM分期及組織學類型有關,TNMⅢ~Ⅳ期和印戒細胞癌患者的LncRNA MIAT水平升高最為明顯,這些發現與SHA等[9]、LI等[10]的研究結果一致。此外,LI等[10]的研究還提示,LncRNA MIAT可以促進胃癌細胞的增殖與侵襲,說明高水平的血清LncRNA MIAT與胃癌的不良預后相關。
MMP-2、MMP-9是腫瘤細胞侵襲、轉移過程中的兩個關鍵酶,二者的激活可以形成Ⅳ型膠原酶,降解細胞外基質,破壞完整的基底膜,促進腫瘤細胞浸潤周圍組織,侵入血管和淋巴管,向遠處轉移[11-12]。目前,關于MMP-2、MMP-9與胃癌的相關研究已取得較大進展。WANG等[13]對94例胃癌組織標本中MMP-2、MMP-9的水平進行檢測發現,MMP-2及MMP-9在胃癌組織中的水平均高于癌旁組織,且二者與胃癌的臨床分期相關。O-6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶(MGMT)是重要的腫瘤抑制物,在結直腸癌、食管癌等消化道腫瘤中均有報道[14-15]。機制研究指出,MGMT可通過下調MMP-2的表達而抑制胃癌的進展[16]。LU等[17]的體外研究發現,高表達MMP-2、MMP-9的胃癌細胞可通過p38MAPK信號通路增強細胞的侵襲與轉移能力,這可能是高水平MMP-2、MMP-9預示胃癌不良預后的原因之一。本研究發現,胃癌患者血清MMP-2、MMP-9水平高于良性病變組和對照組,且在TNMⅢ~Ⅳ期和印戒細胞癌患者中的增高最為明顯,與上述基礎研究結果一致[13,17]。
ROC曲線分析結果顯示,聯合LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9檢測診斷胃癌的AUC為0.937,特異度達94.3%,提示3項指標聯合檢測具有較高的臨床應用價值。此外,血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9是胃癌發病的獨立危險因素,且高水平LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9患者的預后較低水平患者差,提示血清LncRNA MIAT、MMP-2與MMP-9在胃癌診斷及預后評估中具有重要的臨床價值。
綜上所述,聯合檢測血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9對胃癌的診斷、發病風險預測及預后評估均具有重要意義,有望為胃癌的臨床診療提供新的途徑。