研究GeneXpert檢測在結核分支桿菌及其利福平耐藥性檢測中的應用

黎志剛

廣東省佛山市高明區慢性病防治站，廣東佛山 528500

結核病是常見慢性傳染疾病之一，其主要是因為結核分枝桿菌感染造成的。結核分枝桿菌的耐藥性極易對臨床治療效果造成影響，所以，結核分枝桿菌耐藥性的檢測非常重要[1]。傳統主要通過培養方式檢測結核分枝桿菌耐藥性，該方法不僅耗時長，而且檢測期間存在許多不便，無法滿足臨床需求[2]。在醫學技術飛速發展的背景下，基因芯片在檢測結核分枝桿菌耐藥性中的使用范圍越來越廣，且可在短時間內檢測耐藥性[3]。本實驗主要針對GeneXpert 檢測在結核分枝桿菌及其利福平耐藥性檢測中的應用效果進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年7 月～2019 年6 月本院接收的涂片陽性肺結核患者80 例痰液標本，其中男45 例，女35 例；年齡58 ～78 歲，平均（64.5±2.4）歲；患病時間1 ～5 周，平均（3.65±0.52）周；經本院倫理委員會批準。納入標準：（1）確診為肺結核者；（2）簽署知情研究同意書；（3）具備正常溝通、表達和理解能力；（4）有低燒、咳嗽、疲乏、咳痰、胸悶氣短、食欲降低及胸痛等病癥；（5）與《肺結核診斷標準及處理原則》中肺結核診斷標準相符。排除標準：（1）合并精神異常及心理障礙者；（2）存在肝臟、心臟及腎臟器官功能不全者；（3）合并凝血功能障礙者。

1.2 方法

1.2.1 檢測儀器與試劑 結核分枝桿菌及利福平耐藥核酸擴增檢測系統，GeneXpert（AC Voltage；100-240V；50-60Hz），型號：Cepheid，代理：天津儀美科技有限公司；試劑產地：瑞典賽沛公司，中國代理：賽沛（上海）商貿有限公司，安全柜，振蕩器。

1.2.2 GeneXpert 檢測 （1）標本處理：將試驗所需試劑耗材準備好，并將患者姓名、病例好標記在Cartridge 反應盒及前處理管上。后在有螺旋蓋的前處理管中放置1mL 痰標本，然后添加痰標本2 倍體積的痰標本處理液，于振蕩器上放置前處理管進行渦旋震蕩，時間大約30s，一直到無塊狀痰標本。（2）加樣：在室內靜置前處理管15min，然后將Cartridge反應盒打開，通過一次性無菌移樣管將2mL 處理后樣品取出，經加樣孔緩慢加入至反應盒內部；（3）測試：將GeneXpert 監測儀器及電腦電源開關打開，開始進行GeneXpert 檢測；（4）分析結核分枝桿菌檢測結果和耐藥結果。

1.2.3 結核分枝桿菌羅氏培養實驗 （1）實驗準備、標本處理：在室內放置培養管5 ～10min，將管外壁上的凝集水擦拭，然后將患者姓名、日期及病例好標記在培養基斜面背面。采取無菌前處理管。利用無菌吸管將1 ～3mL 痰標本吸入到前處理管中，根據標本形狀添加1 ～2 倍體積4%氫氧化鈉溶液，進行30 ～60s 渦旋震蕩，開始計時，總計15min，室溫靜置；（2）接種：將凝固水棄掉，利用無菌管對前處理的痰標本實施吸取操作，接種0.1mL一直到培養基斜面，擰緊管蓋，并置于斜面架上，確保斜面水平向上，并放置在37℃孵箱中，24h 后，直立培養管，并繼續培養。（3）對生長狀況密切觀察。

1.3 觀察指標

準確記錄傳統羅氏培養結果、GeneXpert 檢測結果。

1.4 統計學方法

本研究數據應用統計學軟件SPSS21.0，計數資料以百分數表示，采用χ2檢驗；計量資料以（）表示，采用t 檢驗，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 傳統羅氏培養結果與GeneXpert檢測結果比較

痰液標本80 份檢測標本中，74 份符合，符合率為92.50%。基因芯片實驗未檢出標本與傳統培養的快速生長菌株相吻合，具有較高的準確率，見表1。

表1 傳統羅氏培養結果與GeneXpert檢測結果比較

2.2 GeneXpert檢測與傳統羅氏培養對利福平耐藥檢測結果比較

74 株結核分枝桿菌分離株，通過傳統羅氏培養與GeneXpert 檢測結核分枝桿菌對利福平耐藥性，GeneXpert 檢測5 例耐藥，傳統羅氏培養檢測4 例，符合率為80.00%。見表2。

表2 GeneXpert檢測與傳統羅氏培養對利福平耐藥檢測結果比較

3 討論

傳統結核疾病檢查主要采取傳統羅氏培養，利用細菌培養試驗方法檢測結核分枝桿菌。傳統羅氏培養方法對結核分枝桿菌檢測存在的主要問題是檢測時間長，進而降低了臨床應用價值[4-6]。基因芯片技術主要用于基因突變檢測，其能夠對多個基因類型及突變位點準確、快速檢測，同時也可以用于結核分枝桿菌檢測。

在科學技術飛速發展的背景下，基因芯片在結核分枝桿菌檢測中的使用范圍越來越廣[7-9]。根據本次實驗結果分析，液標本80 份檢測標本中，74 份符合，符合率為92.50%。基因芯片實驗未檢出標本與傳統培養的快速生長菌株相吻合，具有較高的準確率；74 株結核分枝桿菌分離株，通過傳統羅氏培養與GeneXpert 檢測結核分枝桿菌對利福平的耐藥性，GeneXpert 檢測5 例耐藥，傳統羅氏培養檢測4例，符合率為80.00%。由此可見，結核分枝桿菌及其利福平耐藥性檢測中，GeneXpert 檢測應用效果明顯，且具有較高的診斷符合率，可為疾病臨床診治提供數據參考，以便更好的治療疾病，確保良好的治療效果，以便患者及早恢復健康，融入到正常生活中[10-11]。

基因芯片指的是在基片上固定探針，雜交樣本核酸，利用探針分子雜交信號強度獲得樣品分子序列信息及數量[12]。該檢測方法可以檢測分析大量樣品序列，相比于傳統低效率檢測方法，其有助于檢測效率條[13]。特別是在結核分枝桿菌耐藥性檢測中，時間消耗在3d 以下，同時能夠對大量樣本檢測，具有較高的檢測準確率，應用前景良好[14]。但是，基因芯片技術同樣伴有一定不足，其無法對全部基因突變位點全面檢測，從一定程度上影響了耐藥檢出率，所以，現階段，依舊無法將傳統羅氏培養全部代替，但是，在醫學技術及科學技術進一步發展的同時，基因芯片技術不斷完善和更新，同時也獲得了更加可靠的檢出結果[15-16]。

據有關資料顯示，基因芯片在結合分枝桿菌診斷中應用效果明顯，其可提高診斷準確率，而且能夠在短時間內對利福平耐藥性準確診斷，發展空間廣，所以，臨床應加強對該方法的重視。

總而言之，GeneXpert 檢測在結核分枝桿菌及其利福平耐藥性檢測中應用效果明顯，其不僅可以快速、準確檢出疾病，同時也為臨床結核疾病的診治提供了重要數據參考，值得臨床進一步推廣。