雌激素受體-α基因多態(tài)性對廣西壯族絕經(jīng)后婦女卵巢功能的影響

黎飚 李海 陳建海 楊潔 梁倩 方曉燕 顧建忠

(右江民族醫(yī)學院，廣西 百色 533000)

隨著年齡增大，卵巢萎縮，分泌功能下降，嚴重影響需要性激素維持功能的性器官及受性激素影響的其他器官，從而引起相關疾患〔1～3〕，如卵巢功能退化引起骨質流失，老年智力障礙。所有激素在體內生理作用的強弱，除了與生物效應量呈正比，還受雌激素受體(ER)活性度高低的影響，雌激素也不例外。與雌激素的生理作用密切相關的ER活性度高低受到其基因多態(tài)性的影響〔4,5〕。通過普查ER-β基因多態(tài)性，找到卵巢功能易退化的相關基因型，提前做好臨床預防和治療。

1 材料和方法

1.1研究對象 沒有內臟器、內分泌臟器和婦產(chǎn)科方面疾患，近6個月也沒有使用激素(包括性激素類藥物)，祖輩近三代為壯族家族，長期居住在廣西少數(shù)民族地區(qū)40～45歲的壯族絕經(jīng)婦女416例。

1.2實驗指標的測測定 常規(guī)處理血液樣本，-20℃下保存待用。黃體生成素(LH)和促卵泡激素(FSH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)均用放免法測定。

1.3測定ER基因分布

1.3.1引物 按文獻〔3〕操作得到Rsa Ⅰ酶切引物：引物①：5′-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3′，引物②：5′-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3′。

1.3.2提取 樣本DNA模板：改良的NaI法提取采集血液標本DNA，測定含量，-20℃條件下存放。

1.3.3常規(guī)PCR底物擴增 往復循環(huán)32次，對最后產(chǎn)物進行檢查。

1.3.4酶切 用PvuⅡ和XbaⅠ進行酶切，對兩個限切酶切產(chǎn)物進行電泳，并觀察、測定電泳膠片圖像結果。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SSPS20.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1ER-α 基因型分析 PvuⅡ酶切得到3 種基因：PP 型(1.3 kb 大小的1條帶)；Pp 型(1.3 kb，860 bp，460 bp大小的3條帶)，pp 型(860 bp,460 bp大小的2條帶)，見圖1。XbaⅠ酶切可以區(qū)分出3個基因型：XX型(1.3 kb大小的1條帶)，Xx 型(1.3 kb，860 bp，380 bp大小3條帶)，xx 型(860 bp,360 bp大小2條帶)，見圖2。

圖1 ER-α基因PvuⅡ多態(tài)性電泳

圖2 ER-α基因XbaⅠ酶切多態(tài)性電泳

2.2ER-α基因PvuⅡ酶切基因與對應性激素水平 血清性激素水平中,PP基因型，Pp基因型,pp基因型,p基因型之間相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而P基因型血清E2、P水平明顯低于其他4個基因型(P<0.05)；但FSH和LH水平明顯高于其他4基因型組(P<0.01)，見表1。

表1 ER-α基因PvuⅡ酶切基因與對應性激素水平

與其他4個基因型比較：1)P<0.05；2)P<0.01，下表同

2.3ER-α 基因XbaⅠ酶切基因與對應性激素水平 XX，xx,x,X基因型組之間性激素水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Xx基因型E2、P明顯高于其他4個基因型(P<0.05)，LH、FSH明顯低于其他4個基因型組(P<0.01)，見表2。

表2 ER-α 基因XbaⅠ酶切基因與對應性激素水平

3 討 論

人體衰老是由器官退化引起的，卵巢是女性重要生殖和內分泌器官，卵巢衰老退化引起包括子宮、乳腺等一系列性器官衰老退化。絕經(jīng)是卵巢衰老退化最明顯、最典型的表現(xiàn)。卵巢分泌女性激素水平下降，導致絕經(jīng)和更年期綜合征。其影響到心血管系統(tǒng)，神經(jīng)、內分泌等系統(tǒng)功能狀態(tài)。雌孕激素對神經(jīng)的保護作用，表現(xiàn)在增加神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌、改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)血液循環(huán)及提供神經(jīng)組織抗氧化功能，減少中樞神經(jīng)細胞退化引起阿爾茨海默病。雌激素對骨組織也有保護作用，雌激素促進成骨細胞骨質合成和鈣化。卵巢衰老退化，雌孕激素分泌減少所致破骨細胞成熟、泌酸和溶骨而引起的骨質流失〔6,7〕。臨床流行病學調查發(fā)現(xiàn)，同一雌孕雌孕激素水平，有不同臨床表現(xiàn)，這就說明雌激素的生理效應，除了與雌孕激素的量有關，還與其受體的生物活性度密切有關，而受體的生物活性度又與其遺傳基因多態(tài)性密不可分〔8〕。本研究結果表明P基因人群在相同年齡的情況下，其卵巢衰老更快，其功能退化更為明顯。反作用于腺垂體，腺垂體減少促卵泡素分泌〔9,10〕。因此，ER-αP基因型絕經(jīng)的人群，卵巢功能退化更早，雌激素分泌更少，更容易患雌孕激素缺乏疾病，該提前防治。本研究表明Xx基因型壯族婦女人群，卵巢功能退化相對較慢。而Xx基因型樣本血清雌孕激素水平升高，反饋作用于支配卵巢的垂體分泌促進卵巢分泌減素減少。ER-α Xx基因型人群，卵巢功能不易退化，分泌雌激素多，不易患性激素減少性疾病〔10,11〕。