BAP1、Ki-67表達與老年肺腺癌患者腫瘤侵襲及預后的關系

安曉穎 李曉霞 陳寧 邸紅芹 朱桂云 張彥坤

肺腺癌（Lung adenocarcinoma，LAC）是一種非小細胞肺癌，多起源于支氣管粘膜上皮，多發于老年群體，且發病率隨著人口老齡化增加逐漸升高[1]。LAC的早期診斷對患者預后改善具有重要意義，但患者發病早期缺乏典型癥狀，其診斷及治療仍缺乏較為準確的評估標準[2]。近年來研究發現，Ki67是一種細胞增殖狀態的重要標記物，在多種惡性腫瘤患者體內呈異常高表達，有助于惡性腫瘤的早期診斷和病情評估[3-4]。此外，乳腺癌1號基因相關蛋白1（Breast cancer gene 1-associated protein-1，BAP1）屬于直接與遺傳性乳腺癌有關的抑制基因。研究指出，BAP1基因的突變有數百種之多，與人體其他多種癌癥都有密切關系[5-6]。但關于兩者在肺腺癌診斷中的價值鮮有報道。基于此，本研究嘗試分析BAP1、Ki-67表達與老年LAC患者腫瘤侵襲及預后的關系，旨在為臨床診斷LAC 提供參考。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2018年1月至2019年2月296例老年LAC患者作為研究組，其中男114例，女182例；年齡60～82歲，平均（67.45±3.72）歲；體質量46～80 kg，平均（63.57±8.21）kg；居住地：187例城市，109例農村。另選取同期292例良性肺部腫瘤患者作為對照組，其中男105例，女187例；年齡60～80歲，平均（66.63±3.31）歲；體質量48～83 kg，平均（64.85±8.42）kg；居住地：179例城市，113例農村。對比兩組年齡、性別、體質量、居住地，差異無統計學意義（P>0.05），具可比性。

納入標準：①符合LAC 診斷標準[7]，并經術后病理診斷確診；②年齡≥60歲；③檢測前未接受相關治療；④無溝通交流障礙；⑤均行手術治療；⑥患者及家屬知曉本研究，已簽署同意書。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②血液系統疾病患者；③嚴重感染性疾病患者；④心腦肝腎功能嚴重障礙者；⑤傳染性疾病患者；⑥精神疾病患者。

1.2 方法

取所有研究對象術后肺組織標本，由專業檢測師采用免疫組織化學法測定BAP1、Ki-67陽性表達率，具體操作：常規行固定、脫水、石蠟包埋處理，4～6 μm 連續切片后脫蠟、脫水、抗原修復，羊血清封閉10 min 后滴入一抗，于4℃下保存、過夜，采用聚丁二酸丁二醇酯緩沖液代替一抗作為陰性對照，PBS 緩沖液洗滌3次后加入二抗，常溫下靜置10 min，再次以PBS 緩沖液洗滌3次，加入二氨基聯苯胺顯色液顯色，采用蘇木素復染后封片。高倍顯微鏡下觀察，每張切片隨機選取5～10個高倍視野，每個視野計數100個瘤細胞，計數陽性細胞百分比。按著色細胞百分比分級，＜10%為陰性（-），≥10%為陽（+）。

1.3 觀察指標

①兩組BAP1、Ki-67表達情況。②探究BAP1、Ki-67與老年LAC發生的關系。③探究BAP1、Ki-67與老年LAC患者腫瘤侵襲的關系。④隨訪1年，統計研究組預后情況，對比不同預后患者BAP1、Ki-67表達情況。⑤采用卡普蘭-邁耶曲線分析不同BAP1、Ki-67表達情況老年LAC患者的生存情況。

1.4 統計學方法

數據處理采用SPSS 22.0軟件，計數資料以n（%）表示、采用χ2檢驗，采用KM 曲線分析生存情況，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組BAP1、Ki-67表達情況

研究組BAP1陽性表達率低于對照組，Ki-67陽性表達率高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組BAP1、Ki-67表達情況比較[n（%）]Table1 Comparison of BAP1、Ki-67 expression between the two groups[n（%）]

2.2 BAP1、Ki-67與老年LAC發生的關系

Logistic回歸分析發現，BAP1、Ki-67與老年LAC發生顯著相關（P＜0.05），見表2。

2.3 BAP1 與腫瘤侵襲相關性

BAP1、Ki-67與老年LAC患者年齡、性別、腫瘤直徑、大體類型、分化程度無明顯相關性（P>0.05）；BAP1與老年LAC患者TNM 分期、淋巴結轉移、胸膜侵犯顯著相關（P＜0.05），見表3。

2.4 研究組不同預后患者BAP1、Ki-67陽性表達率

隨訪1年，失訪8例（其中BAP1陽性表達者3例，Ki-67陽性表達者2例）。根據預后情況分為生存者、死亡者。死亡者BAP1陽性表達率較生存者低，死亡者Ki-67陽性表達率高于生存者（P＜0.05），見表5。

表2 BAP1、Ki-67與老年LAC發生的關系Table2 Relationship between BAP1、Ki-67 and LAC in old age

表3 BAP1、Ki-67與腫瘤侵襲相關性[n（%）]Table3 Correlation between BAP1 and tumor invasion[n（%）]

表5 研究組不同預后患者BAP1、Ki-67陽性表達率比較[n（%）]Table5 Comparison of positive expression BAP1、Ki-67 patients with different prognosis in the study group[n（%）]

2.5 生存分析

KM 曲線分析，BAP1陽性表達者1年生存率較陰性表達者高，Ki-67陽性表達1年生存率較陰性表達者低（χ21=21.580，P1＜0.001；χ22=134.200，P2＜0.001），見圖1。

3 討論

肺癌為臨床最常見惡性腫瘤之一，5年生存率極低，2018年的統計數據為18%，是癌癥患者致死的主要病因[8]。LAC 的發生率約占肺原發腫瘤的40%，早期隱匿性更強，具有高度浸潤和破壞性生長特征，且易侵犯血管和淋巴管壁，多數患者確診時已出現血行及淋巴轉移，預后極差[9]。因此，越來越多的研究致力于探求LAC 的早期診斷指標。

近期研究指出，BAP1可影響腫瘤細胞周期與增殖能力，其基因突變和缺失被認為參與腫瘤的發生發展[10]。BAP1屬于泛素羧基末端水解酶家族成員，具有去泛素化酶活性，定位于細胞核內，可與乳腺癌1號基因相互作用，發揮抑制腫瘤細胞增殖、侵襲及遷移能力的作用[11]。馬晶晶等[12]通過對41例成年慢性粒-單核細胞白血病患者的研究發現，其BAP1陽性表達率僅為31.70%。Kim SH 等[13]針對局限性腎細胞癌的研究也發現BAP1陽性表達率顯著降低。此次針對老年LAC患者的研究得出了與上述文獻報道相近的結果，且發現BAP1與老年LAC患者TNM 分期、淋巴結轉移、胸膜侵犯顯著相關，提示BAP1在多種惡性腫瘤及老年LAC 體內呈異常低表達狀態，且參與腫瘤的增殖、侵襲及遷移。BAP1能夠去除底物蛋白質的泛素化修飾，使底物逃逸“泛素-蛋白酶體”降解途徑，增強其穩定性，或影響底物的功能活性，從而調控相關信號傳導；同時能調控細胞轉錄、表觀遺傳、DNA 損傷修復等；而BAP1表達缺失則使上述作用減弱，最終引起腫瘤發生、進展[14]。此外，有學者認為，細胞核相關抗原Ki-67 的檢測可指導非小細胞肺癌患者術后是否需要進一步開展輔助治療[15]。Ki-67是一種與增殖細胞相關的核蛋白質，由MKI-67基因編碼，與核糖體RNA 轉錄有關。Ki-67 失活可導致核糖體RNA 合成受限，其可以作為反映細胞增殖的標記物，同時可用于判斷腫瘤惡性程度及侵襲力[16]。Yuan X 等[17]研究指出，Ki-67 存在于細胞周期G0期以外的所有階段（細胞增殖的G1、S、G2和M 期），具有半衰期短的特性，脫離細胞周期后會被迅速降解，在反映腫瘤細胞增值率方面的可靠性較高。已有大量研究證實Ki-67與多種惡性腫瘤的發生發展、腫瘤惡性生物學行為及預后有關[18]。本研究進一步通過隨訪研究發現通過檢測BAP1及Ki-67 的陽性表達情況，可能用于老年LAC患者預后評估，有可能成為老年LAC患者治療的新靶點。

綜上可知，BAP1陽性表達率降低及Ki-67陽性表達率升高均參與老年LAC 的發生發展，且與LAC 腫瘤侵襲存在密切相關性，早期檢測有助于老年LAC 的診斷和預后評估；它們作為腫瘤的潛在標志物，將會成為推動老年LAC 研究進展的新動力。