核酸分子檢測(cè)技術(shù)在食品藥品檢測(cè)中的應(yīng)用

馬寧

摘 要：核酸分子檢測(cè)技術(shù)是一種新興的檢測(cè)技術(shù)，具有高效、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，雖然在我國(guó)起步較晚，但是發(fā)展迅速，現(xiàn)已運(yùn)用到食品藥品檢測(cè)領(lǐng)域，為食品藥品的檢測(cè)提供了新的技術(shù)手段。

關(guān)鍵詞：核酸檢測(cè);食品;藥品

1 核酸分子檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介

核酸分子檢測(cè)技術(shù)主要是利用不同物種或者同一物種不同個(gè)體以及同一個(gè)體不同狀態(tài)、不同部位基因表達(dá)的差異來(lái)對(duì)物種進(jìn)行鑒別、比較，通過(guò)基因水平的檢測(cè)，從而確定不同個(gè)體之間的親疏遠(yuǎn)近，為物種鑒別、分類(lèi)起到了十分重要的作用。

相較于傳統(tǒng)的檢測(cè)手段，核酸分子檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確，而且隨著核酸高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，該方法日趨成熟，成本也日漸低廉，現(xiàn)已成為一種快捷、高效、低成本的檢測(cè)手段，因此被廣泛應(yīng)用于各領(lǐng)域，包括食品藥品檢測(cè)、醫(yī)學(xué)病毒檢測(cè)、刑偵線索比對(duì)以及醫(yī)學(xué)親緣關(guān)系鑒定等等方面。

2 常用核酸分子檢測(cè)方法

核酸分子檢測(cè)方法主要包括兩個(gè)步驟，分別為核酸分子的提取和擴(kuò)增。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的不同，遺傳物質(zhì)也不同，一般真核生物遺傳物質(zhì)為脫氧核糖核苷酸（DNA），而一些病毒如流感病毒、煙草花葉病毒等的遺傳物質(zhì)為核糖核苷酸（RNA），提取時(shí)應(yīng)該區(qū)別對(duì)待，而隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)如今許多生物制品公司推出了商品化的核酸提取試劑盒，提取過(guò)程簡(jiǎn)單、高效，提取的核酸純度較高、質(zhì)量較好。

PCR，全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是最常用的核酸擴(kuò)增方法，其中又包括常規(guī)PCR法和熒光定量PCR法，二者基本原理相同，但實(shí)驗(yàn)操作不同，區(qū)別在于前者的擴(kuò)增產(chǎn)物需要通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳觀察條帶的亮度和位置來(lái)確定，而且無(wú)法定量;后者的擴(kuò)增產(chǎn)物則與熒光染料嵌合，通過(guò)收集到的熒光染料的多少來(lái)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定量，結(jié)果較前者更為準(zhǔn)確。

PCR過(guò)程主要包含3個(gè)步驟：變性、退火、延伸，目前常用的PCR鑒別技術(shù)包括RFLP（限制性?xún)?nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性）技術(shù)、RAPD（隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性）技術(shù)、AFLP（擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性）技術(shù)與ISSR（簡(jiǎn)單重復(fù)序列間擴(kuò)增）技術(shù)等，熒光定量PCR技術(shù)包括SYBR Green染料法和Taq Man探針?lè)ǎ结樂(lè)ㄏ鄬?duì)于染料法結(jié)果更為準(zhǔn)確。

3 核酸檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用

3.1 食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

核酸分子檢測(cè)技術(shù)在食品檢測(cè)領(lǐng)域中的應(yīng)用主要包括3個(gè)方面，①食品中某種成分的鑒定，如蓮蓉制品中蕓豆成分的定性檢測(cè)，以及動(dòng)物源性飼料中豬、牛、羊、馬、雞與鴨等源性成分的鑒定，這些檢驗(yàn)項(xiàng)目與日常生活息息相關(guān)，如檢測(cè)涮火鍋時(shí)買(mǎi)的羊肉卷究竟是否為羊肉，飯館中賣(mài)的驢肉火燒是否是真的驢肉等等，采用核酸檢測(cè)方法可以得到準(zhǔn)確的答案;②用于轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)，如MON89034、Bt11等品系轉(zhuǎn)基因玉米的檢測(cè)以及轉(zhuǎn)基因大豆、油菜、棉花等不同品系的檢測(cè)。轉(zhuǎn)基因食品自誕生以來(lái)就不斷引發(fā)爭(zhēng)議，至今也沒(méi)有明確的證據(jù)表明它是有益還是有害，所以一味的吹捧或者打壓都是不可取的。對(duì)于轉(zhuǎn)基因食品，應(yīng)該做到信息公開(kāi)，凡是轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)品，其包裝上都應(yīng)該明確標(biāo)識(shí)。③病原微生物的檢測(cè)，如貝類(lèi)食品中甲型肝炎病毒、諾如病毒的檢測(cè)，豬肉制品中非洲豬瘟病毒的檢測(cè)以及奶粉中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)等等，這些檢測(cè)為日常飲食安全起到非常重要的作用，而核酸分子檢測(cè)方法也以其準(zhǔn)確、快速的優(yōu)勢(shì)被用于更多的食品衛(wèi)生檢測(cè)當(dāng)中。

3.2 醫(yī)藥檢驗(yàn)中的應(yīng)用

核酸分子檢測(cè)技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的用途也非常廣泛，它可以用于突發(fā)性公共衛(wèi)生事件中樣本的檢驗(yàn)，如突發(fā)性的群體食物中毒事件，運(yùn)用核酸分子檢測(cè)方法，可以省去分離、培養(yǎng)致病微生物的時(shí)間，且結(jié)果更為快速。

用于流行性病學(xué)調(diào)查，如流感病毒的檢測(cè)。我國(guó)衛(wèi)計(jì)委和疾病預(yù)防控制中心在2013年將甲型流感病毒H1N1、H3N2和乙型流感病毒引發(fā)的疾病定為季節(jié)性流感，納入國(guó)家法定傳染病丙類(lèi)。每到秋冬季，氣候干燥，會(huì)有大量的人患上流感，對(duì)于數(shù)量較大的樣本，醫(yī)療部門(mén)一般選擇核酸分子技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR法，不僅靈敏度高，而且可以對(duì)樣本核酸進(jìn)行定量檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間較短。

用于中藥材的道地性研究與鑒定識(shí)別。中藥材是我國(guó)特有的傳統(tǒng)資源，也是我國(guó)傳統(tǒng)文化的一部分，關(guān)于中藥材的鑒別方法有很多，比如傳統(tǒng)的外觀性狀鑒別法與理化檢驗(yàn)法等，但是外觀性狀鑒別依賴(lài)于檢驗(yàn)者的主觀經(jīng)驗(yàn)判斷，根據(jù)檢驗(yàn)者知識(shí)儲(chǔ)備的不同往往會(huì)得到不同的結(jié)果，對(duì)藥材的完整性以及檢驗(yàn)者的專(zhuān)業(yè)程度要求較高;理化鑒別法對(duì)藥材的前處理過(guò)程較為繁瑣，用時(shí)長(zhǎng)，靈敏度低，且實(shí)驗(yàn)過(guò)程常常會(huì)用到有毒有害試劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)者身體造成潛在的危害。核酸檢測(cè)技術(shù)相較于傳統(tǒng)鑒別技術(shù)，不僅靈敏度高、特異性好，而且操作簡(jiǎn)單、快速，對(duì)于不同劑型的藥材均可檢測(cè)，如《中國(guó)藥典》（2015版）中收錄的品種“川貝母”“烏梢蛇”和“蘄蛇”分別采用了PCR-RFLP法和PCR法用于真?zhèn)舞b別，而且在即將出版的2020版本中會(huì)有更多的品種使用核酸檢測(cè)方法，這充分說(shuō)明核酸檢測(cè)是一項(xiàng)成熟的可以用于中藥材快速鑒別的技術(shù)。

4 結(jié)語(yǔ)

核酸分子檢測(cè)技術(shù)在國(guó)外發(fā)展較為成熟，在我國(guó)起步較晚，但是發(fā)展迅速，最近幾年已經(jīng)成為專(zhuān)家學(xué)者研究的熱點(diǎn)，同時(shí)也是各檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)提高自身行業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的著力點(diǎn)，檢驗(yàn)檢測(cè)人員應(yīng)該進(jìn)一步提升自己的專(zhuān)業(yè)素養(yǎng)，在分子生物學(xué)領(lǐng)域大膽創(chuàng)新，為人民群眾的飲食用藥安全保駕護(hù)航。