梅毒血清固定孕婦不同孕期外周血T細胞亞群及NK細胞水平分析

王秋鳳，鄭艷，吳雪琴

深圳市龍崗中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518116

近年來隨著社會的發(fā)展，我國梅毒患者的發(fā)病率逐年呈上升趨勢，梅毒血清固定患者的發(fā)病率也逐年增加。由于存在個體差異，臨床上男性患者血清固定的發(fā)生率低于女性患者，很大部分女性患者由于處于生育期，疾病原因不明、治療困難、孕后是否會導致胎傳梅毒等給生育期女性患者造成了極大的困擾[1-3]。因此，對梅毒女性患者妊娠后不同孕期機體免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)及其對妊娠結(jié)局影響的系統(tǒng)研究具有重要的意義。本研究旨在探討梅毒血清固定孕婦不同孕期外周血T 細胞亞群及NK 細胞水平，為患者的臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013 年5 月至2019 年5 月深圳市龍崗中心醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的梅毒血清固定孕婦38例作為觀察組。觀察組孕婦納入標準：①所有孕婦已接受規(guī)范驅(qū)梅治療，臨床癥狀消失，無重復感染；②經(jīng)腦脊液常規(guī)、生化以及不加熱梅毒螺旋體反應素實驗(RPR)檢測排除孕婦神經(jīng)梅毒；③配偶或性伴侶長期性接觸無感染；④免疫缺陷病毒(HIV)檢測抗體陰性；⑤無自身免疫性疾病，近半年內(nèi)未使用免疫調(diào)節(jié)藥物。排除標準：①合并嚴重肝腎功能不全、嚴重系統(tǒng)性疾病及自身免疫疾病孕婦；②具有精神病史孕婦。同時選取同一時期正常備孕健康女性38 例作為對照組。對照組孕婦納入標準：①血清甲苯胺紅不加熱血清(TRUST)試驗、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗、HIV 檢測抗體陰性；②無自身免疫性疾病。觀察組孕婦年齡23～39歲，平均(29.3±6.2)歲；血清固定時間1.6～6 年，平均(3.7±2.3)年。對照組孕婦24～38 歲，平均(29.5±6.4)歲。兩組孕婦的臨床資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，受檢者均知情并簽署同意書。

1.2 檢測方法 ①對所有孕婦妊娠前(積極備孕階段)、妊娠早期(孕周6～12周)、妊娠中期(孕周13～27周)、妊娠晚期(孕周39～38周)于上午抽取外周血2/5 mL肝素抗凝，保存在-80℃冰箱中待檢；②使用快速漩渦混勻器處理后抽取100 μL加入試管，于試管中加入CD4+、CD8+、CD3-Cy5三色抗體各20 μL，充分混勻后置于恒溫冰箱中培育25 min；③加入500 μL紅細胞溶解劑，充分混勻后靜置15 min，于1 000 r/min的離心機離心分離5 min后去上層清液，加入4 mL磷酸鹽緩沖液后再離心分離一次，清除沒有結(jié)合抗體和紅細胞；④采用FACS Calibur型流式細胞儀檢測T細胞亞群以及NK細胞水平。

1.3 觀察指標 比較兩組孕婦妊娠前、妊娠早期、妊娠中期以及妊娠晚期T 細胞亞群和NK 細胞水平，同時分析觀察組產(chǎn)婦妊娠結(jié)局。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組孕婦不同孕期外周血T 細胞亞群水平比較 觀察組孕婦妊娠前、妊娠早期、妊娠中期及妊娠晚期CD3+水平、CD8+水平分別與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但CD4+水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；觀察組孕婦妊娠前、妊娠早期、妊娠中期以及妊娠晚期CD3+、CD8+水平先降低后升高，CD4+水平先升高后降低，組內(nèi)比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1～表4。

表1 兩組孕婦妊娠前外周血T細胞亞群水平比較(%

表1 兩組孕婦妊娠前外周血T細胞亞群水平比較(%

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)38 38 CD3+69.4±7.1 71.1±6.4 1.096 3 0.276 5 CD4+35.2±5.3 40.1±6.1 3.737 9 0.000 4 CD8+23.5±3.3 21.9±2.7 2.313 2 0.083 5

表2 兩組孕婦妊娠早期外周血T細胞亞群水平比較(%

表2 兩組孕婦妊娠早期外周血T細胞亞群水平比較(%

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)38 38 CD3+65.8±7.6 67.8±6.6 1.224 8 0.224 5 CD4+32.1±4.6 36.1±5.4 3.128 5 0.002 5 CD8+25.3±3.1 24.3±2.6 1.523 6 0.131 9

表3 兩組孕婦妊娠中期外周血T細胞亞群水平比較(%

表3 兩組孕婦妊娠中期外周血T細胞亞群水平比較(%

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)38 38 CD3+59.9±7.1 62.1±6.6 1.399 0 0.166 0 CD4+28.1±4.3 31.9±5.8 3.244 4 0.001 8 CD8+28.7±3.1 28.3±2.8 0.590 3 0.556 8

表4 兩組孕婦妊娠晚期外周血T細胞亞群水平比較(%

表4 兩組孕婦妊娠晚期外周血T細胞亞群水平比較(%

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)38 38 CD3+63.6±6.1 66.8±6.9 2.141 9 0.135 5 CD4+29.7±4.7 33.3±5.4 3.099 9 0.002 7 CD8+26.8±2.8 26.7±2.9 0.152 9 0.878 9

2.2 兩組孕婦不同孕期NK細胞水平比較 觀察組孕婦妊娠前、妊娠早期、妊娠中期以及妊娠晚期NK細胞水平與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；觀察組孕婦妊娠前、妊娠早期、妊娠中期以及妊娠晚期NK 細胞水平先降低后升高，組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表5。

表5 兩組孕婦不同孕期NK細胞水平比較(%

表5 兩組孕婦不同孕期NK細胞水平比較(%

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)38 38妊娠前18.1±3.4 19.9±3.3 2.341 8 0.121 9妊娠早期16.1±3.1 17.2±2.9 1.597 4 0.114 4妊娠中期13.3±2.8 14.3±2.3 1.701 2 0.093 1妊娠晚期14.4±2.9 15.9±2.5 2.4150 0.0682

2.3 觀察組孕婦妊娠結(jié)局 觀察組孕婦妊娠結(jié)局顯示，新生兒先天梅毒5 例，TRUST 試驗顯示新生兒11個月全部轉(zhuǎn)陰。

3 討論

近年來，隨著梅毒患者發(fā)病率逐年升高，男性患者梅毒血清固定的發(fā)生率明顯低于女性患者，因此對梅毒血清固定女性患者妊娠后機體免疫功能狀態(tài)的研究有利于探究血清固定的機制，了解患者妊娠對胎兒的影響，從而減輕患者心理壓力和經(jīng)濟負擔，有利于家庭和諧和社會穩(wěn)定[4-5]。目前梅毒患者發(fā)生血清固定的機制尚不十分清楚，但患者發(fā)生血清固定可能主要與早期梅毒治療不選擇首選藥物、藥物治療量不足、治療不規(guī)則、梅毒的類型以及機體的細胞免疫功能受到抑制有關。其中機體免疫功能受到抑制是當前研究的熱點，研究表明梅毒血清固定患者存在明顯的細胞免疫不平衡和免疫抑制[6-7]。

本研究顯示，梅毒血清固定孕婦妊娠期間CD3+水平、CD4+水平、NK細胞水平低于健康女性，CD8+水平高于健康女性，梅毒血清固定孕婦妊娠前、妊娠早期、妊娠中期以及妊娠晚期CD3+、CD8+、NK 細胞水平先降低后升高，CD4+水平先升高后降低。研究結(jié)果表明梅毒血清固定孕婦懷孕后外周血T淋巴細胞亞群呈現(xiàn)明顯抑制狀態(tài)，并表現(xiàn)出周期變化，這與健康孕婦的變化總體一致，但是抑制表現(xiàn)更為明顯，可能是與孕婦梅毒螺旋體感染以及妊娠均會抑制機體細胞免疫有關[8-10]。正常情況下，T淋巴細胞及其亞群數(shù)目相對穩(wěn)定，機體在免疫應答中相互作用，共同完成抗原的識別、應答以及清除，以維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，確保免疫功能處于正常狀態(tài)。當孕婦T淋巴細胞亞群數(shù)量和功能發(fā)生異常時，提示了機體免疫功能的紊亂，會導致一系列病理改變。而NK細胞作為一種不需要特異抗體參與表達即可直接殺傷靶細胞的細胞，它在T 淋巴細胞啟動之前就與巨噬細胞一起構(gòu)成細胞免疫系統(tǒng)第一道防線，起著免疫監(jiān)視作用[11-12]。梅毒血清固定孕婦機體防御功能受到破壞后，吞噬、殺傷梅毒螺旋體功能下降，不能有效的殺傷梅毒螺旋體，因此機體處于持續(xù)感染狀態(tài)。但是T細胞亞群不僅在梅毒血清固定中產(chǎn)生了作用，還參與了妊娠的整個過程，在孕婦妊娠中起到了保護作用，保障了母體和胎兒的正常發(fā)展。因此梅毒血清固定孕婦在妊娠的過程中胎兒相對安全，先天性梅毒患發(fā)生的風險較低，但應對患兒進行長期隨訪。本研究顯示，梅毒血清固定孕婦妊娠結(jié)局顯示，新生兒先天梅毒5 例，TRUST 試驗顯示新生兒11個月全部轉(zhuǎn)陰。

妊娠作為女性一個特殊的生理過程，其免疫功能處于一定的抑制狀態(tài)，但是這種變化的機制相對復雜，隨著妊娠的進展，抑制有一定程度的降低，免疫調(diào)控受到多環(huán)節(jié)的影響。并且對于研究對象的地域差異、年齡段等因素不同，機體免疫處于動態(tài)變化，均可能導致研究結(jié)果存在不同程度的差異，因此具體作用機制還需要進一步深入研究[13-15]。

綜上所述，梅毒血清固定孕婦不同孕期外周血T細胞亞群及NK 細胞的變化存在差異，妊娠時胎兒相對安全，先天性梅毒患兒風險較小。