黃腐酚對膽管癌QBC939細胞生長和凋亡的影響及其機制研究

張堅紅，謝元康，胡澤明，林 旋，何 曉，謝斌輝

(贛南醫學院 1.第一附屬醫院肝膽胰外科；2.2017級碩士研究生；3.2018級碩士研究生，江西 贛州 341000)

膽管癌(Cholangiocarcinoma, CCA)是較為少見的惡性腫瘤，其發病率約占消化道腫瘤的3%。CCA發病率逐年來一直在上升，預后極差，5年生存率不超過10%[1]。其根治率低，且對化療、放療均不敏感，總體治療效果差[1-2]。所以我們迫切需要研究新的抗腫瘤藥物及其分子作用靶點來改善CCA患者的臨床療效。黃腐酚(xanthohumol, XN)是一種啤酒花中特有的異戊二烯基黃酮類化合物，啤酒花是眾所周知的釀酒原料，并且作為民間藥物被長期使用[3]。近年來黃腐酚因其廣泛的生物學功能而備受關注。研究證實黃腐酚對前列腺癌、甲狀腺癌、胰腺癌細胞等有明顯的生長抑制作用[4-6]，但具體作用機制尚不明確。本研究為進一步探討黃腐酚對人膽管癌細胞生長抑制作用及其機制，現報道如下。

1 材料和方法

1.1試劑和抗體黃腐酚(X0379，純度≥96%)購自Sigma公司。RPMI1640細胞培養基、胎牛血清購自Gibco公司。CCK-8試劑盒購自Dojindo公司。AnnexinⅤ-FITC/PI凋亡試劑盒購自BioVision公司。兔抗人Notch1(Notch intracellular domain，NICD)、NF-κB p65、cleaved Caspase-3、β-tubulin、PCNA抗體購自CST公司。Alexa Fluor 488標記羊抗兔IgG(H+L)、HRP標記羊抗兔IgG(H+L)二抗購自Beyotime公司。BCA蛋白檢測試劑盒、ECL試劑盒購自Pierce公司。

1.2細胞培養人膽管癌QBC939細胞株從ATCC公司購得。采用含10%胎牛血清、100 units·mL-1青霉素、100 μg·mL-1鏈霉素的RPMI1640培養基在37 ℃、5%CO2飽和濕度培養箱培養。

1.3CCK-8法檢測細胞存活率應用CCK-8試劑盒檢測不同濃度(0 μM、10 μM、20 μM、30 μM)的XN作用后的細胞活力。QBC939細胞每孔約5×103個接種于96孔培養板中培養。培養24小時后，每組分別加入0 μM、10 μM、20 μM、30 μM XN，繼續孵育24小時，棄去舊培養基，每孔加入10 μL的CCK-8溶液和100μL培養基，繼續孵育3小時，立即上酶標儀，于450 nm檢測吸光度(Absorbance，A)。……