唐古特大黃不同提取物抗痛風作用比較研究

王紅娟 呂小旭 王芳 鄒家棟 張旭東

摘要：目的：對比唐古特大黃的不同提取物抗痛風作用。方法：選取體重相近的Wistar大鼠并分組，通過次黃嘌呤及氧嗪酸鉀建立痛風性腎病模型，給予唐古特大黃水、甲醇和酸水解高（5g·kg^-1）低劑量（1.25g·kg^-1）的提取物，實驗中另設空白組、陰性對照組和陽性對照組。測定大鼠腎臟指數及大鼠血液中尿酸值來考察抗痛風作用。結果：唐古特大黃不同提取物抗痛風作用存在顯著性差異，以酸水解提取物效果最好，其次為甲醇提取物和水提取物。結論：唐古特大黃的酸水解提取物有較強的抗痛風作用，其中酸水解提取物含有游離的蒽醌類成分最多，其作用機制需進一步研究，此為唐古特大黃的開發利用提供了依據。

關鍵詞：唐古特大黃;痛風;腎臟指數;尿酸

中圖分類號：R589.7 文獻標志碼：A

近年痛風患者越來越多，而痛風與血液中尿酸含量過高有關。唐古特大黃具有解熱抗炎解毒，抗痛風，活血涼血，瀉下攻積，清熱瀉火，止血，活血化瘀之功效。現代藥理作用表明，唐古特大黃具有抗炎、瀉下、抗腫瘤和抑制肺纖維化等方面作用，同時也有將唐古特大黃作為臨床治療痛風性腎病常用藥物的研究。本文所研究的唐古特大黃為蓼科植物唐古特大黃（Rheklm tanguticum Maxim.ex Bam）的干燥根及根莖，主產于青海、甘肅、西藏等地，主要以野生品種為主。對現有唐古特大黃藥理作用的研究基礎上，對唐古特大黃水提取物、甲醇提取物和酸水解提取物治療痛風作用進行了比較研究。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物

wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，均由中國農業科學院蘭州獸醫研究所動物實驗中心，生產許可證號：（甘）20150001。喂養于本學院機能實驗室動物房，給予正常大鼠飼料飼喂，自由飲水，適應性喂養一周后進行實驗。

1.1.2藥物及試劑

唐古特唐古特大黃為野生品種，采自六盤山地區，經本院程亞青教授鑒定為蓼科植物唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.的干燥根及根莖。氧嗪酸鉀（武漢遠成共創科技有限公司，批號：00164）;次黃嘌呤（武漢遠成共創科技有限公司，批號：00164）;苯溴馬隆（德國赫曼大藥廠，批號：1681550）;尿酸測定試劑盒（上海復星長征醫學科學有限公司，批號：D18010231）;甲醇（天津市大茂化學試劑廠，分析純，批號：20170824）;乙醚（天津市大茂化學試劑廠，分析純，批號：20180325）;水為蒸餾水。

1.1.3實驗儀器

cs系列全自動生化分析儀（長春迪瑞醫療科技股份有限公司）;Bs224s電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）;12號大鼠直形灌胃針（浙江省寧海縣電子醫藥儀器廠，批號：GJ8301-A）;5mL一次性使用人體靜脈血樣采集容器（瀏陽市三力醫用科技發展有限公司，批號：GA5011）;H-1650R臺式高速冷凍離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）;TDL-40B臺式離心機（上海安亭科學儀器廠制造）。

1.2方法

1.2.1藥物組處理方法

唐古特大黃蒸餾水煎煮兩次，合并煎煮液，濃縮成1g·mL^-1的溶液，為水提取組;唐古特大黃甲醇加熱回流提取兩次，合并提取液，旋轉蒸發為流浸膏，加蒸餾水成1g·mL^-1的混懸液，為甲醇提取組;唐古特大黃8%鹽酸酸水解后，再用乙醚加熱回流提取，合并濾液，旋轉蒸發干乙醚后，加蒸餾水成1g·mL^-1的混懸液，為酸水解提取組。

1.2.2高尿酸血癥動物模型的建立

90只Wistar大鼠，雌雄各半，適應性喂養一周，分為9組，空白組、陰性對照組生理鹽水，陽性對照組苯溴馬隆（0.01g·kg^-1），藥物組6組，為唐古特大黃水提取、甲醇提取和酸水解提取高（5g·kg^-1）低劑量（1.25g·kg^-1）組。每組10只，除空白組外每組大鼠灌胃次黃嘌呤（1g·kg^-1），同時皮下注射氧嗪酸鉀（250mg·kg^-1）建立大鼠急性高尿酸血癥模型。造模1h后，稱重并按不同劑量灌胃，陰性對照組給予相同體積的生理鹽水，陽性對照組給予相應劑量的苯溴馬隆，給藥2h后，斷頭采血，測定血尿酸含量。

1.2.3大鼠尿酸型腎病模型的建立

90只Wistar大鼠，雌雄各半，適應性喂養一周，分為9組，空白組、陰性對照組生理鹽水，陽性對照組苯溴馬隆（0.01g·kg^-1），藥物組6組。大鼠灌胃氧嗪酸鉀（400mg·kg^-1）2mL構建大鼠尿酸型腎病模型，空白對照組灌胃等體積生理鹽水。藥物組同1.2.2項下方法給藥，早中晚各給藥1次，連續給藥5周。最后一次給藥結束3h后腹腔注射10%水合氯醛（0.03mL·kg^-1）麻醉大鼠，摘除腎臟，仔細剔除無關組織，質量稱重，計算腎臟指數，統計分析結果。臟器指數=臟器（g）/體重（g）·100%。

1.2.4統計學方法

使用SPSS19.0軟件對數據進行處理，數據結果以均值±標準差（x±s）表示，多組數間比較采用方差分析，兩組數間采用F檢驗，以P<0.05說明差異有統計學意義。P<0.01說明差異有顯著統計學意義。

2結果

2.1唐古特大黃不同提取物對大鼠尿酸值的影響

通過對尿酸值的分析，唐古特大黃的不同提取物均可明顯降低尿酸值，與陰性對照組相比有顯著統計學意義（P<0.05，P<0.01）。其中酸水解提取物組降低尿酸值最明顯，其次為甲醇提取組和水提取組，且各組之間有差異（P<0.05）。高、低劑量之間只有甲醇提取組有差異（P<0.05）。結果見表1所列。

2.2唐古特大黃不同提取物對大鼠腎臟指數的影響

通過SPSS分析，唐古特大黃的不同提取物對尿酸型腎病大鼠均有影響，其結果與陰性對照組相比有顯著統計學意義（P<0.05，P<0.01）。其中酸水解提取物組對腎臟的保護作用最明顯，其次為甲醇提取組和水提取組（除甲醇提取物低劑量組），且各組之間有差異（P<0.05）。這與唐古特大黃對不同提取物對大鼠尿酸值影響的結果相符。但各高、低劑量之間無統計學意義差異（P<0.05）。結果見表2所列。

3討論

綜合以上分析結果，唐古特大黃不僅具有降低大鼠血尿酸，同時還能保護大鼠腎臟的作用，這與文獻報道相符。對不同提取物治療效果比較研究發現，其中酸水解提取物治療效果最好。唐古特大黃的化學成分的分析中，水提取物中主要是水溶性成分，如糖類等;甲醇提取物，主要含有結合型蒽醌，如蒽醌苷類;酸水解提取物主要含有游離型蒽醌類，如唐古特大黃素、唐古特大黃酸、唐古特大黃酚、唐古特大黃素甲醚、蘆薈唐古特大黃素等。王雪等研究發現唐古特大黃酸對馬兜鈴酸A引起的斑馬魚幼魚腎損傷有一定的保護作用。還有研究表明，唐古特大黃總蒽醌對結腸和腎臟水通道蛋白表達具有重要影響，可用于治療消化和泌尿系統相關疾病。本研究發現唐古特大黃中游離蒽醌類成分治療痛風作用顯著，其作用機理還需進一步研究。