小兒重癥毛細支氣管炎治療前后外周血單個核細胞 Treg Th17細胞水平及臨床意義

王文慧，李敏副，王 茹，蘇紅苗

(海南省瓊海市人民醫院兒科，海南 瓊海 571400)

毛細支氣管炎是嬰幼兒常見呼吸系統疾病之一，約3%的1歲以下嬰兒因毛細支管炎住院治療。重癥毛細支氣管炎起病急驟、病情進展迅速，如不治療易引發多種嚴重并發癥，發生支氣管哮喘風險也較高，嚴重威脅小兒生命和健康[1]。有文獻指出，毛細支氣管炎最主要病原體為呼吸道合胞病毒，病毒侵入人體會誘發T細胞免疫應答，除Th1/Th2細胞應答失衡外，Th17細胞反應在其發病過程中也較為重要[2]。馮柱興[3]等學者的研究也顯示，小兒毛細支氣管炎經治療后Treg細胞明顯升高、Th17細胞明顯下降。基于此，本研究選取106例重癥毛細支氣管炎患兒作為研究對象，以探究小兒重癥毛細支氣管炎治療前后外周血單個核細胞Treg、Th17細胞水平變化，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：納入2017年9月至2018年9月間收治的106例重癥毛細支氣管炎患兒作為研究對象。納入標準：符合重癥毛細支管炎診斷標準者；年齡<2歲者；入組前未經激素及其他免疫抑制劑治療者；患兒監護人知情同意；經我院倫理委員會審核通過。排除標準：合并嚴重器官功能障礙、免疫功能紊亂者；其他先天性疾病者；治療期間出現嚴重并發癥或過敏癥狀而更換治療方案者。106例重癥毛細支氣管炎患兒中男女分別為60例、46例，月齡6～20個月、平均月齡(15.05±3.49)個月。

1.2 治療方法：所有患兒均嚴密監測病情變化，采取對癥支持治療，霧化吸入布地奈德(生產企業：AstraZeneca Pty Ltd，規格：2mL：0.5 mg，批準文號：H20090902)、異丙托溴銨(生產企業：Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG，規格：2 mL:異丙托溴銨500 μg，批準文號：H20100682)、干擾素α-1b(生產企業：北京三元基因工程有限公司，規格：10 μg：0.5mL/支，批準文號：國藥準字S20040039)治療，布地奈德0.5mg、異丙托溴銨2mL、干擾素α-1b 1 μg/mL、生理鹽水2mL混合行經氧霧化吸收，10 min/次。如患兒合并細菌感染加用抗菌藥物治療。

1.3 評估方法：治療前后均采集患兒外周靜脈血，使用AccuriC6型流式細胞儀(美國BD公司生產)測定患兒Treg(CD3+CD8-IL-17+T)、Th17(CD4+CD25highCD127lowT)頻率；采用酶聯免疫法(ELISA)測定患兒白介素-17(IL-17)、白介素-23(IL-23)、白介素-10(IL-10)、轉化生長因子-β(TGF-β)水平，試劑盒均購自上海紀寧實業有限公司和上海江萊生物科技有限公司，酶標儀購自上海沛歐分析儀器有限公司(318C+型)，進行檢測前對所有質控品進行檢測，測定質控品均在控后再對各組樣本進行檢測，檢測流程均嚴格按照試劑盒說明書和儀器操作手冊進行。

1.4 評估標準：臨床療效根據患兒癥狀體征分為顯效(治療7d后癥狀體征明顯改善，哮鳴音、濕羅音消失)、有效(治療7d后癥狀體征有所改善，哮鳴音、濕羅音基本消失)、無效(治療7d后癥狀體征仍無改善或加重)3級，總有效率=(顯效+有效)/總例數×100%。

1.5 觀察指標：評估患兒療效，比較治療前、治療1周后患兒Treg、Th17水平及相關細胞因子水平(IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β)，評估不同療效患兒的Treg、Th17水平，分析療效與Treg、Th17水平的相關性。

2 結 果

2.1 臨床療效：治療7d后，106例重型毛細支氣管炎患兒顯效61例、有效38例，無效7例，總有效率93.40%(99/106)。

2.2 治療前后患兒Treg、Th17水平對比：治療7d后，患兒Treg水平高于治療前(P<0.05)，Th17水平低于治療前(P<0.05)，見表1。

2.3 治療前后患兒相關細胞因子水平對比：治療7d后，患兒IL-10、TGF-β水平均高于治療前(P<0.05)，IL-17、IL-23水平均低于治療前(P<0.05)，見表2。

表1 治療前后患兒Treg Th17水平對比

表2 治療前后患兒相關細胞因子水平對比

2.4 不同療效患兒Treg、Th17水平：治療7d后，患兒顯效者、有效者Treg水平均高于治療前(P<0.05)，Th17水平均低于治療前(P<0.05)；無效者Treg、Th17水平與治療前對比差異無統計學意義(P>0.05)，顯效者、有效者、無效者治療后Treg、Th17水平對比，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同療效患兒Treg Th17水平

3 討 論

毛細支氣管炎是以免疫球蛋白E介導的、嗜酸性粒細胞浸潤為主的，多種炎癥介質共同介導的小氣道炎癥，輔助型T細胞亞群細胞比例失調是氣道高反應發生進展的關鍵。Th17和Treg是近年發現的一種新型CD4+效應T細胞亞群，應琴[4]等學者的研究顯示，孟魯司特鈉可通過調節毛細支氣管炎患兒體內Th17/Treg平衡來提高毛細支氣管炎療效。張進軍[5]等學者的研究也發現，毛細支氣管炎患兒經治療IL-10、TGF-β1水平均高于治療前。但回顧既往文獻發現，目前國內對小兒毛細支氣管炎，尤其是重型毛細支氣管炎，發生發展與Th17/Treg的變化研究較少。故本研究就此方面入手，進一步了解毛細支氣管炎與Th17/Treg失衡的關系，以指導臨床治療。

毛國其[6]等學者的研究顯示，毛細支氣管炎患兒Treg頻率低于健康嬰幼兒，而Th17頻率則高于健康嬰幼兒，Th17/Treg失衡與毛細支氣管炎發生密切相關。本研究中，106例患兒治療總有效率為93.40%。對比治療前后發現，治療7w后，患兒Treg細胞頻率較治療前明顯升高，Th17細胞頻率較治療前明顯降低，這提示治療后Th17/Treg失衡狀態有所改善。本研究數據還顯示，治療7d后，患兒IL-10、TGF-β均高于治療前，IL-17、IL-23水平均低于治療前。機體正常情況下，Th17/Treg呈相互拮抗、相互轉化的狀態。Th17細胞是人體內起著促進炎癥反應作用的一類CD4+T細胞亞群，其通過分泌IL-17細胞因子發揮強烈的致炎作用[7]。而Treg細胞則能夠對免疫細胞產生負性調節作用，通過促進釋放出IL-10等效應因子，從而對T細胞的活性及增殖產生抑制作用，發揮免疫抑制的功能。當發生毛細支氣管炎時，病毒侵襲使Th17上升促進炎性反應，使Treg下降減弱其對免疫功能的調節作用，故引發不同程度的免疫應答，產生各種病理癥狀體征。而治療后患兒IL-17等炎癥因子水平被控制，IL-10、TGF-β等抗炎因子水平升高，有文獻指出，Treg細胞能夠通過IL-10依賴的方式抑制Th17的促炎作用，高濃度TGF-β下誘導T細胞向Treg細胞分化，因此患兒治療后Th17/Treg失衡獲得糾正。

本研究進一步分析毛細支氣管炎療效與Treg/Th17的關系，數據顯示，治療后不同療效患兒Treg、Th17水平對比差異有統計學意義。其中，治療無效者Th17、Treg水平與治療前對比差異無統計學意義，這說明患兒Th17/Treg仍處失衡狀態。同時，患兒經治療后，顯效者、有效者和無效者Treg、Th17水平存在顯著差異，出現Treg水平越高患兒療效越好、Th17水平越低患兒療效越好的趨勢。而治療前Th17、Treg水平均與療效無關，考慮與本組樣本均為重型毛細支氣管炎患兒，Th17/Treg失衡較嚴重不足以反映明顯線性關系有關。這提示，在小兒重型毛細支氣管炎治療中，對患兒不僅要予以抗炎、給氧等對癥支持性治療，還需根據患兒免疫功能狀況以調節和治療患兒免疫功能失衡。另外，Th17在毛細支氣管炎和支氣管哮喘的發病過程中均起重要作用。因此，反復發作的毛細支氣管炎患兒血清Th17頻率較高可能是其病情向支氣管哮喘轉歸的原因之一。

綜上所述，治療后小兒重型支氣管炎患兒Treg及其細胞因子水平高于治療前、Th17細胞因子低于治療前，治療后Treg與療效呈正相關關系，Th17與療效呈負相關關系。